ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3198—2018 热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程 芒果细菌性黑斑病 Technical code of practice for resistance identification to diseases and insects of tropical crops germplasm- Mango bacterial black spot 2018-03-15 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 3198—2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所、海南大学环境与植物保护学院 本标准主要起草人：漆艳香、张贺、蒲金基、张欣、刘晓妹、谢艺贤、喻群芳、陆英、张辉强。 I NY/T 3198—2018 热带作物种质资源抗病虫鉴定技术规程 芒果细菌性黑斑病 1 范围 本标准规定了芒果种质资源抗细菌性黑斑病鉴定的术语和定义、接种体制备、接种鉴定及抗病性判 定等方法。 本标准适用于芒果种质资源对细菌性黑斑病的抗病性鉴定及评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本 件 2. 1 芒果细菌性黑斑病 黄单胞菌芒果致病变 Xant homgyg ampestris pv. mangi feraeindicae(Pa Kulkami 9483Ro Ribeiro Kimura 种细菌性病害。 该病害症状参见附录 2. 2 接种体 culum inoc 病菌纯培 养白 2. 3 接种菌悬液 inoculum uspension 用于接种的 2. 4 抗病性评价 按照规定的操 为反应程度和抗病性 GR 3接种体制备 3.1菌株要求 用于抗病性鉴定的菌株应是本地新分离的强致病力菌 3. 2接种体与接种菌悬液制备 将保存的芒果细菌性黑斑病菌转接到NA平板上, 培养481 2h后，用无菌水配制成浓度约 为1. 0X106CFU/mL的菌悬液。 室内抗病性鉴定 4.1对照品种 以“贵妃芒'为感病对照品种，乳芒'为抗病对照品种。 4.2鉴定材料准备 将株高60cm～80cm的芒果苗截顶,待其侧枝整齐抽出大量淡绿色叶片时,选取大小基本一致、健 康完整无病斑的淡绿色叶片(或在田间采集大小一致、健康完整无病斑的淡绿色叶片）,用2%NaCIO 浸泡5min，无菌水冲洗3次，晾干，叶片背面向上平放在垫有湿润滤纸的保鲜盒内备用。 4.3接种方法 1 NY/T 3198—2018 采用浸润接种法进行接种。在叶片背面主脉中部两侧各选择2个点，用无菌束针（7根3号昆虫针 固定在一起，直径2mm）刺破表皮，再用不带针头的一次性注射器（孔口直径2mm）对准伤口浸润接种， 每个接种点注射20μL菌悬液，每次接种10片叶，重复3次，以接种无菌水为对照。28℃下每隔12h喷 水1次保湿，以叶面均匀润湿但不形成水滴为宜， 5田间抗病性鉴定 5.1对照品种 同4.1。 5. 2 2鉴定材料准备 将室内抗病性鉴定表现为免疫、高抗、抗病和中抗的种质，进一步开展田间抗病性鉴定。将株高 60cm～80cm的芒果苗截顶，待其侧枝整齐抽出大量淡绿色叶片。 5.3接种方法 采用浸润接种法进行接种。每份种质随机选取大小基本一致、健康完整无病斑的6片淡绿色叶，用 无菌束针（7根3号昆虫针固定在一起，直径2mm）刺破表皮，再用不带针头的一次性注射器（孔口直径 2mm)对准伤口浸润接种，接种点直径与针管口直径基本一致。每张叶片每侧接2个点，3次重复，以接 种无菌水为空白对照，接种后喷水，套袋保湿48h。 6病情调查及统计 6.1调查时间和方法 室内接种第7d、田间接种第10d记录统计发病率，并采用十字交叉法测量病斑直径，单位为毫米 (mm),计算各病斑平均直径(α)。 6.2病情分级 病情级别及其相对应的病斑平均直径大小见表1。 表 1芒果细菌性黑斑病的病情分级标准 病情级别 病斑平均直径(α),mm 2=0 1 2.0 3 2.0<≤4.0 5 4. 0<≤6. 0 7 6. 0<r≤8. 0 9 r>8. 0 6.3 3病情指数计算 以病斑平均直径大小作为病情分级标准,计算病情指数(DI),填人附录 B中的表B.1,病情指数按 式(1)计算。 Z(N; Xi) DI = X 100 NX9 ..... (1) 式中: DI- 病情指数； 各病情级别的病斑数； i 各病情级别值； N 调查病斑数。 2 NY/T 3198—2018 7 抗病性判定 7. 1 # 抗病性判定标准 将鉴定材料 3 次重复的病情指数(DI)加和平均,得到的病情指数平均值用 ADI 表示,用 ADI 判定 芒果种质对细菌性黑斑病的抗病性(表2)。 表 2 2芒果种质对细菌性黑斑病的抗病性判定标准 病情指数平均值(ADI) 抗病性级别 ADI=0 免疫(I) 0<ADK15 高抗(HR) 15<ADK30 抗病(R) 30<ADK45 中抗(MR) 45<ADK60 感病(S) ADI>60 高感(HS) 8 鉴定有效性判定 如果感病对照品种病情指数平均值ADI>45,则该批次鉴定结果视为有效。 如果空白对照发病，则该批次鉴定结果视为无效。 9 重复鉴定 田间鉴定结果与室内鉴定结果差别2个等级及以上时,应再开展一次田间重复鉴定,并以最后一次 田间鉴定结果为准。 3 NY/T 3198—2018 附录A （资料性附录） 芒果细菌性黑斑病 A.1 症状 叶片：染病叶片最初在近中脉和侧脉处产生水渍状浅褐色小点，逐渐变成黑褐色，病斑扩大后边缘 受叶脉限制,呈多角形或不规则形,有时多个病斑融合成较大病斑，病斑表面隆起,外围常有黄色晕圈 （图A.1的1）。 枝条：枝条发病后呈现黑褐色不规则形病斑，有时病斑表面纵向开裂，渗出黑褐色胶状黏液（图A.1 的2）。 果实：果实染病后，初期表皮上多呈现红褐色小点，扩大成不规则形黑褐色病斑，后期病斑表面隆起 变硬，溃疡开裂。潮湿条件下病部常有菌脓溢出（图A.1的3)。 2 说明： 1——叶片症状： 3 一果实症状。 2——枝条症状； 图 A.1芒果细菌性黑斑病症状 A.2 病原 属真细菌界（Eubacteria），变形细菌门（Proteobacteria），-变形细菌纲（Gammaproteobacteria），黄 单胞菌目（Xanthomonodales），黄单胞菌科（Xanthomonodaceae），黄单胞菌属（Xanthomonas），野油菜黄 单胞菌芒果致病变种[Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae（Patel,Moniz &Kulkarni 1948)Robbs,Ribiero & Kimura 1974]。 NY/T 3198—2018 附录B (规范性附录) 抗病性评价记录表 抗病性评价记录表见表B.1。 表 B. 1 抗病性评价记录表 调查 病情级别 鉴定结果 编号 种质名称 重复 病斑数 0 1 3 5 7 9 病情指数 平均病情指数 抗病性级别 I I 1.接种日期： 2.调查日期： 3.记录人： 鉴定技术负责人(签字)：