ICS 65.080 G 20 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3174—2017 水溶肥料 海藻酸含量的测定 Water-soluble fertilizers-Determination of alginic acid content 2017 - 12 - 22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部 5发布 NY/T 3174—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、中国海洋大学、中国农学会、中国植 物营养与肥料学会、土壤肥料产业联盟、青岛海大生物集团有限公司、青岛明月蓝海生物科技有限公司、 北京雷力海洋生物新产业股份有限公司、领先生物农业股份有限公司。 本标准主要起草人：王旭、王鹏、刘蜜、侯晓娜、王海华、孙又宁、保万魁、林茵、韩岩松、黄均明。 NY/T 3174—2017 水溶肥料 海藻酸含量的测定 1范围 本标准规定了水溶肥料海藻酸(褐藻酸)含量测定的间羟联苯分光光度法试验方法。 本标准适用于以海带、马尾藻、泡叶藻等褐藻为原料经生物、化学、物理提取加工而成的液体或固体 水溶肥料。本法不适用于含硝酸根、腐植酸类物质及其他在比色过程中产生干扰的水溶肥料。 光度法试验方 2规范性引用文件 RD 件。凡是不注日期的 HG/T 3696 无机 化学 分析用标准溶液、制剂及 制品白 NY/T 887 密度的测定 S 3原理 多聚己糖醛酸 1，在波长520nm 2 处测定其吸光度 由此可以用分光 光度法测定。 4试剂和材料 所用试剂、水和 定执行。 4.1浓硫酸：优 4.2四硼酸钠硫酸 硼酸钠0.478g， 置于100mL烧杯用浓 oL容最瓶中用浓硫酸 4.3氢氧化钠溶液 .OH 4.4间羟基联苯溶液 Ho 称取间羟基联苯 0.15 mL氢氧化钠溶液 （4.3)中,置于棕色瓶中， 阴暗处保存 4.5海藻酸钠标准溶液：o(海藻酸钠) 准确称取海 藻酸钠 00g，置于100mL烧杯用 水溶解后,转移至1000mL容量瓶中用水定容。 5仪器 5.1通常实验室仪器。 5.2分光光度计，配1cm比色皿。 5.3恒温振荡器：温度可控制在(25土5)℃,振荡频率可控制在(180土20)r/min。 5.4水浴锅。 6分析步骤 6.1试样的制备 固体样品缩分至约100g，将其迅速研磨至全部通过0.50mm孔径试验筛（如样品潮湿，可通过 1 NY/T 3174—2017 1.00mm孔径试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥容器中；液体样品经摇动均匀后，迅速取出约100mL， 置于洁净、干燥容器中。 6.2试样溶液的制备 称取0.5g～2g混合均匀的试样（精确至0.0001g),置于250mL容量瓶中。液体试料直接加水定 容；固体试料加水约150mL，置于（25士5）℃恒温振荡器内，在（180土20）r/min的振荡频率下振荡30 min,取出后用水定容，干过滤（或放置至澄清）。 6.3标准曲线的绘制 分别吸取海藻酸钠标准溶液（4.5)0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL 于7个具塞试管中,再分别用水补充至总体积为1.00mL，混匀。该标准系列溶液海藻酸钠的质量浓度 分别为 0 μg/mL、10 μg/ mL、20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/ mL。将试管置于冰 水浴中,在每个试管中缓慢加入四硼酸钠硫酸溶液（4.2)6.00mL,塞上塞子,混匀。将试管放人沸水浴 中加热5min,冷却至室温。在每个试管中加人100μL间羟基联苯溶液(4.4)作为显色剂,混匀。室温 放置10min后，在520nm波长处用1cm比色皿进行比色，以0μg/mL的标准溶液调零，读取吸光度。 以标准系列溶液海藻酸钠的质量浓度（μg/mL)为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 注1:在测定过程中,若标准溶液在加入显色剂之前有颜色，则应于另一组具塞试管中,加人相同体积的标准溶液,除 显色阶段用100μL氢氧化钠溶液（4.3)代替间羟基联苯溶液外，其余操作相同，测定吸光度，计算时扣除之 注2：糖醛酸显色颜色深浅与浓硫酸浓度和纯度有关。故在测定样品和制作标准曲线时，应使用同规格、同批号的浓 硫酸，以保证其浓度、纯度一致。 6.4试样溶液的测定 准确吸取试样溶液或用水稀释一定倍数后的试样溶液1.00mL(含海藻酸钠10μg～100μg)置于具 塞试管中，在与测定标准系列溶液相同的条件下显色、比色，以空白试验溶液调零,读取吸光度。在标准 曲线上查出相应的质量浓度（μg/mL） 注：在测定过程中，若试样溶液在加入显色剂之前有颜色，则应于另一具塞试管中,加入相同体积的试样溶液，除显 6.5 空白试验 除不加试样外，其他步骤同试样溶液。 注：硝酸根的干扰可尝试采用SephadexG10凝胶柱进行层析处理来消除。参考方法如下：取1mL试样溶液（海藻 酸含量为10mg～20mg)经SephadexG10凝胶过滤层析，凝胶高度为75cm,直径为1.6cm，流速1mL/min,收 集时间为55min～95min。收集完成后，定容至100mL得到试样溶液。 7 分析结果的表述 海藻酸含量以质量分数计,数值以百分率表示，按式(1)计算。 (1) m X 106 式中: 由标准曲线查出的试样溶液中海藻酸钠的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； D 一测定时试样溶液的稀释倍数； Vi 一试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； 0.8890——将海藻酸钠质量换算为海藻酸质量的系数； m 试料的质量，单位为克(g)； 106 -将克换算成微克的系数，以微克每克（μg/g)表示。 取2次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留到小数点后1位。 8允许差 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差应符合表1的要求。 2 NY/T 3174—2017 表 1 海藻酸含量(α)，% 平行测定结果的绝对差值，% 不同实验室测定结果的绝对差值，% 2.0 ≤0. 2 ≤0. 4 2. 0<w<5. 0 0.5 ≤1. 0 5. 0<<10. 0 ≤1. 0 ≤2. 0 @>10.0 2. 0 ≤4. 0 9 质量浓度的换算 液体试样海藻酸含量以质量浓度2计，单位为克每升（g/L），按式（2)计算。 β2 = 1000p (2) 式中: 1000 将克每毫升换算为克每升的系数，以毫升每升(mL/L)表示； 试样中海藻酸的质量分数； p 液体试样的密度，单位为克每毫升（g/mL）。 结果保留到整数。 液体试样密度的测定按NY/T887的规定执行。 3 NY/T 3174—2017 附录A （资料性附录） 海藻酸含量测定咔唑硫酸分光光度法 A.1范围 咔唑硫酸分光光度法测定海藻酸（褐藻酸） 于以海带、马尾藻、泡叶藻等褐藻为原料经生 物、化学、物理提取加工而成的、不含干扰成分的液体或固体海藻提取物 本法不适用于含硝酸根、磷酸根、铜镶硼等 唐等中性糖、腐植酸类物质及其他 AND 注：适用时用于质量自控 A.2原理 A RE 海藻酸经水解生 醛酸和古罗糖醛酸,这两种糖醛酸可在强酸 支长550 紫红色化合物 m 处测定其吸光度,在 一定浓度范围内，该化合 的双光 糖醛酸浓度 呈正比例关系，由此 可以用 分光光度法测定 ARC A A.3 试剂和材料 R 所用试剂 和溶液的配 A.3.1浓硫酸 级纯 A.3.2味唑乙 液.9 醇中 溶 A.3.3海藻酸钠标 00gl 称取海藻酸 0mL烧杯用 水溶解后,转移至 mL A.4仪器 U A. 4. 1 通常实验室仪 A. 4.2 分光光度计，配 5cm比色皿 A.4.3 恒温水浴锅。 A.5 分析步骤 A.5.1i 试样的制备 固体样品缩分至约100g，将其迅速研磨至全部通过0.50mm孔径试验筛（如样品潮湿，可通过 1.00mm孔径试验筛），混合均匀，置于洁净、干燥容器中；液体样品经摇动均匀后，迅速取出约100mL， 置于洁净、干燥容器中。 A.5.2试样溶液的制备 称取1g～5g混合均匀的试样（精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中，加水溶解后定容，摇匀， 干过滤。 A.5.3标准曲线的绘制 取6个具塞三角瓶，分别加人0mL、0.30mL、0.60mL、0.90mL、1.20mL、1.50mL海藻酸钠标准 NY/T 3174—2017 溶液（A.3.3),然后用水补充至3.00mL，该标准系列溶液含海藻酸钠分别为0mg、0.30mg、0.60mg、 0.90mg、1.20mg、1.50mg。将具塞三角瓶放在冰水浴中,边摇动边缓慢加人浓硫酸(A.3.1)18mL(开 始要慢，约每秒1滴，待加入一半酸后可增加至每秒2滴）。加完后塞上塞子，放入沸水浴中加热20 min，取出10.0mL于80℃水浴加热5min。然后加人咔唑乙醇溶液（A.3.2)0.30mL，混匀，室温下放 置45min。在550nm波长，用0.5cm比色皿进行比色，以含海藻酸钠0mg的标准溶液调零，读取吸光 度。以标准系列溶液含海藻酸钠的质量(mg)为横坐标、相应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。 A.5.4试样溶液的测定 吸取试样溶液或用水稀释一定倍数后的试样溶液3.00mL(含海藻酸钠0.30mg～1.50mg),在与 测定标准系列溶液相同的条件下显色、比色，以空白试验溶液调零，读取吸光度。在标准曲线上查出相 应海藻酸钠的质量（mg)。 注：在测定过程中，若试样溶液在加人显