ICS 67.140.10 X 55 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3173-2017 茶叶中9,10-葱醒含量测定 气相色谱-串联质谱法 Determination of 9,10-anthraquinone in tea- Gas chromatography-tandem mass spectrometry 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3173—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院茶叶研究所。 本标准主要起草人：陈宗懋、周利、罗逢健、张新忠、楼正云、孙荷芝、汪煊。 I NY/T 3173—2017 茶叶中9，10-葱醒含量测定 气相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了茶叶中9,10-葱醒含量的气相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于茶叶中9，10-葱醒含量的测定。 本标准的定量限为0.02mg/kg。 2规范性引用文件 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括 GB/T 6379. 2 测量方法与结果的准确度 准测量方法重复性与再现性的基本方法 GB/T6682 分析实验室用水规格和 试验 RES 3原理 试样中的9， 醌细丙 和正已烧的混合溶 硅士净化 串联质谱测定， 内标法定量。 URAL 4试剂和材料 4.1试剂 4. 1. 1 丙酮(CsHb ,CAS 4. 1. 2 正已烷（C o,C 4.1.3无水硫酸钠 Na.S( 烧4 存 器中 中备用。 4.1.4无水硫酸镁 12h冷 中备用。 4.2 溶液配制 R 4.2.1丙酮-正已烷溶液 1体积丙酮加天4体积正已烷申，混匀现用现配。 4.2.2丙酮-正已烷溶液( VA 4.3标准品 4.3.19,10-葱醒标准品(C H:Q2,CAS号 84 65 纯度≥99.0% 4. 3.2 内标 D：-葱醒标准品(C14D:Oz,CAS号:10439-39-1),纯度> 4.4标准溶液配制 4.4. 1 9,10-葱醒标准储备溶液(100mg/L):准确称取 10mg (精确到0. 1mg)9,10-葱醒标准品于50 mL烧 杯中,用丙酮溶解并转移至100mL容量瓶中,用丙酮定容至刻度,混匀，一18℃冷冻避光保存,有效期6个月。 4. 4. 2D-葱醒标准贮备溶液(100 mg/ L):准确称取10mg(精确到 0.1 mg)D:-葱酮标准品于 50 mL烧杯 中,用丙酮溶解并转移至100mL容量瓶中,用丙酮定容至刻度,混匀，一18℃冷冻避光保存,有效期6个月。 4.4.3定容溶液（含D-葱醒0.04mg/L):移取D-葱醒标准储备溶液1mL于50mL容量瓶中， 4.2.2溶液定容至刻度，再取出其中1mL于50mL容量瓶中，4.2.2溶液定容至刻度。 4.5材料 4.5.1弗罗里硅土(150μm～250μm）,500℃条件下烘干4h，加人7%水(/w)脱活。 1 NY/T 3173—2017 4.5.2有机系滤膜（尼龙材质）,0.22μm。 5仪器和设备 5.1气相色谱-串联质谱：配电子轰击电离源(EI)。 5.2 分析天平感量 0.000 1g和0. 01 g。 5.3超声仪。 5.4旋转蒸发仪。 5.5 离心机:转速不低于 6 000 r/min。 5.6 王 玻璃填充柱：10cmX0.5cm（内径）。 5.7E 固体样品粉碎机。 5.8 标准网筛:425 μm。 5.9梨形浓缩瓶：100mL。 5.10离心管：50mL(带聚四氟乙烯旋盖）。 5.11氮吹仪。 6试样制备 取茶叶500g，粉碎后使其全部通过425μm标准网筛，放人聚乙烯瓶或袋中。试样于常温干燥避光 条件下保存。 7分析步骤 7.1提取 准确称取1.5g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中,加入1.5mL水浸润30min,加人15mL提取溶液 (4.2.1),超声提取20min后，加人1g无水硫酸镁，立刻摇匀，以6000r/min离心5min。移取10mL上清液于 100mL梨形浓缩瓶中,35℃旋转蒸发至近干,氮气吹干。2mL洗脱溶液(4.2.2)溶解残渣,待净化。 7.2净化 在玻璃填充柱中依次加人脱脂棉、2g无水硫酸钠、2g弗罗里硅土和2g无水硫酸钠后,10mL洗脱 溶液(4.2.2)预淋洗柱，弃去流出液。上样待净化液(7.1),分2次，每次用4mL洗脱溶液（4.2.2)润洗 梨形浓缩瓶，上柱，再加人10mL洗脱溶液（4.2.2)洗脱目标物，收集所有流出液，于35℃旋转蒸发至近 干，氮气吹干。1mL定容溶液(4.4.3)溶解残渣，过0.22μm有机系滤膜于进样小瓶，待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1气相色谱参考条件 色谱柱：VF-5ms石英毛细管柱[5%-二苯基-95%二甲基硅氧烷,30mX0.25mm（内径）×0.25 μml或相当类型色谱柱。 载气：氮气(纯度≥99.999%,流速1.0mL/min)。 进样口温度：250℃。 程序升温条件：初始温度80℃,以15℃/min升温至240℃,再以25℃/min升温至280℃，保留5min。 进样方式：不分流进样。 进样体积:1μL。 7.3.2质谱参考条件 检测方式：多反应监测MRM,多反应监测条件见表1。 电离能量：70eV。 2 NY/T 3173—2017 离子源温度：210℃。 传输线温度：280℃。 碰撞气体(Ar):2.0mTorr。 表 19,10-葱醒和 D：-葱醒的色谱质谱参数 化合物名称 保留时间，min 定量离子对（碰撞能，eV) 定性离子对(碰撞能,eV) 9,10-葱醒 13.02 208.0/152.0(22) 208.0/180.0(10) D-葱醒 12.99 216.0/160.0(20) 216.0/188.0(10) 7.4 标准工作曲线 7.4.1溶剂标准溶液曲线的制备 准确吸取适量9,10-葱醒溶液（4.4.1)，氮气吹干，用4.4.3溶液逐级稀释，配制成质量浓度为0.01 mg/ L、0. 02 mg/ L、0. 05 mg/L、0. 2 mg/ L和 1 mg/ L系列标准溶液,按参考色谱和质谱条件测定。以 测得9,10-醒和D：-葱醌峰面积比为纵坐标，对应的9,10-葱醌标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标 准曲线,求出回归方程和相关系数。 7.4.2基质匹配标准溶液曲线的制备 按准确吸取适量9,10-葱醒溶液(4.4.1),氮气吹干,用空白溶液稀释,配制成质量浓度为0.01mg/ L、0. 02 mg/ L、0. 05 mg/ L、0. 2 mg/ L 和 1 mg/ L系列标准溶液,按参考色谱和质谱条件测定。以测得 9,10-葱醌和D：-葱醒峰面积比为纵坐标,对应的9,10-葱醌标准溶液质量浓度为横坐标,绘制标准曲 线,求出回归方程和相关系数。 7.5定性及定量 7.5. 1保留时间 被测试样中9,10-葱醌和内标物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误 差应在士2.5%之内。 7.5.2定量离子、定性离子及子离子丰度比 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致,并且在扣除 背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子对应出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品 中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比,其允许偏差 不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在9,10-蒽醌。 表 2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 单位为百分率 相对离子丰度 >50 20~50(含） 10~20(含） ≤10 允许相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.6测定 分别将基质匹配标准溶液和待测溶液注人气相色谱-串联质谱联中，以保留时间和定性离子对定性， 样品中9,10-葱醒质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内。采用内标法定量。同时做空白试验。 7.7空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤等进行平行操作。 8结果计算 试样中蒽醌的残留量用质量浓度w计,按式(1)计算。 AXp, XV (1) A,Xm 式中： 试样中9,10-葱醌含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； w 3 NY/T 3173—2017 样品溶液中9,10-葱醌和D-葱醒的峰面积比； A, -标准工作溶液中9,10-葱醒和D：-葱酮的峰面积比； 标准溶液中9,10-葱醒的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V- 样品提取溶液体积,单位为毫升(mL)； m 试样的质量,单位为克(g)。 计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字。当结 果大于1 mg/kg时,保留3位有效数字。 9精密度 本方法的精密度数据按照GB/T 6379.2的规定确定 9.1在重复性条件下,2次独立测定结果的绝对差 于重复性限(r) ,重复性限(r)的数据为： 质量浓度为 21 9.2在再现性 件 ,2 资独 测灸 结果的绝对差不大于 现性限 R)的数据为： 质量浓度 时，再现性 为0 限O 质量浓度 为 . 05 mg kg时：再现性限(R)为 质量浓 要头 kg时，再现性限(R）为 L 10 其他 A 本标准的 线相范目 为 mg 11 谱图 9,10- 和 D. 醒标准浴 图2。 相对峰度 100 75 葱醒 50 E 人 25 E 0 50 100 150 200 250 300 相对峰度，% 质核比,m/z 100 9.499e+7 Ds-葱醌 75E