ICS 65.080 B 10 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3167-2017 有机肥中磺胺类药物含量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of sulfonamides in organic fertilizer- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3167—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农产品及转基因产品质量安全监督检验测试中心(杭州)、浙江省农业科学 院环境资源与土壤肥料研究所、绿城农科检测技术有限公司。 本标准主要起草人：钱鸣蓉、杨华、汪建妹、章虎、马军伟、吉小凤、王强、肖英平、曾银欢。 H NY/T 3167—2017 有机肥中磺胺类药物含量的测定液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了有机肥中磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲唑、磺 胺-5-甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲唑、磺胺间甲氧嘧 啶、磺胺异唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、苯甲酰碱 唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹啉的液相色 谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于有机肥中上述19种磺胺类药物含量的测 磺胺醋酰、磺胺噻唑、 ，磺胺甲噻二唑和磺胺氯哒嗪的检出限均为6μg/kg .定量限均为20μg/kg;其 2规范性引用文件 下列文件对于本文 文件的应 用是必 可少的。凡是注日期的 引用文 引用文 X 件。凡是不注日 日期的 ，其最新版 测量 法与结果的准确度(正确度与精密度） 分总则 GB/T 637 79 GB/T 6379. 测量 方法与结果的准确度（正确度与 第2 分 确定 准测量方法重现 ARCH 性与再现性的基不 GB/ T 6682 验室用 规格和试验 NY/T 302 有机 3原理 用酸化乙 通过超 净化 液相色谱-串联质 谱仪测定,基质术 M 4 试剂和材料 除非另有说明 听 有试剂 CB/T6682规定的 4.1 甲醇(CH;OH) 4. 2 乙腈(CH;CN):色谱 山 4. 3 甲酸(HCOOH):色) 4. 4 酸化乙腈:准确移取10 mL甲酸(4.3)和990mL乙腈(4.2) 4.5无水硫酸镁（MgSO4）。 4.6 氯化钠(NaCI)。 4.7 Cis,粉末,粒度 50 μm 60 A。 4.8 丙基乙二胺(PSA),粉末,粒度 40 μm60 μm。 4.9甲酸铵(HCOONH4):纯度99%。 4.102mol/L甲酸铵水溶液：0.63g甲酸铵(4.9)加入5mL水溶解。 4.112mmol/L甲酸铵溶液(含0.1%甲酸）:准确移取1mL甲酸(4.3)和1mL2mol/L甲酸铵水溶 液（4.10）至容量瓶中，加水定容至1000mL。 4. 12 2标准物质：磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺-5-甲氧 1 NY/T 3167—2017 嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异 唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、苯甲酰磺胺、磺胺苯吡唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹啉，纯度>95%。 4.13 3标准储备溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的磺胺醋酰、磺胺啶、磺胺噻唑、磺胺吡 啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺 氯哒嗪、磺胺甲唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、苯甲酰磺胺、磺胺苯吡唑、磺胺 间二甲氧嘧啶、磺胺喹啉各10.0mg，分别用甲醇溶解并定容至100mL，浓度为100mg/L，储备液储 存于一20℃,有效期为3个月。 4.14基质混合标准工作溶液：用空白样品提取液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液，混合标准工 作溶液现用现配。 4.15乙腈十水(5十5,体积比）。 4.16滤膜:有机相,0.22μm（25mm)。 4. 17 聚丙烯离心管:50mL。 4. 18 Φlmm的尼龙孔径筛。 51 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5. 2 分析天平:感量 0. 01 g 和 0. 1 mg。 5.3涡旋混合仪。 5.4超声清洗仪。 5.5高速离心机:转速不低于7000r/min。 5. 6 研钵。 6试样的制备 取有机肥样品按四分法缩减至约100g,经研磨粉碎,均通过Φ1mm尼龙孔径筛，装人样品瓶，并于 一20℃避光保存备用。 7 分析步骤 7.1前处理步骤 称取试样3g(精确到0.01g)至50mL离心管中，加人10mL水浸润，再加人15mL酸化乙睛 （4.4），涡旋混合1min，超声提取15min，7000r/min离心3min，转移上清液并加人6g无水硫酸镁 (4.5)和1.5g氯化钠（4.6),充分混匀，7000r/min离心3min。取1mL上层液并依次加入150mg无 水硫酸镁(4.5)、100mgCis（4.7)、20mgPSA(4.8)进行除水净化,涡旋30s,10000r/min离心3min。 移取500μL上清液加水定容至1.0mL,混合均匀,过0.22μm滤膜，待测。 7.2空白基质溶液的制备 称取空白有机肥样品3g(精确到0.01g),按7.1操作。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a）色谱柱:Ci柱,100 mmX2.1 mm(内径),粒度1.7 μm或性能相当者; b）流动相：流动相A为2mmol/L甲酸铵溶液(含0.1%甲酸)(4.11),流动相B为甲醇(4.1),梯 度洗脱(梯度表见表1)； 2 NY/T 3167—2017 c) 流速:0. 2 mL/ min; (P 进样量:5μL; e) 柱温:40℃。 表1 19种磺胺类药物的液相色谱梯度洗脱条件 时间，min 流动相 A,% 流动相 B,% 0 95 5 0. 5 95 5 1 75 25 3 25 11 20 80 12 100 13 100 13.1 5 15 5 7. 3. 2 质谱参考条件 质谱参考条 如 a) 离子源 贵雾离子 中 b) 扫描 c) 喷雾 电 :5 500 d) 毛细 度：45( 碰薄 e) 和气帘气 )psi;碰撞气 (GS2) 检测方 f) 反 y 多反应监测条件 保留时间 序号 min 1 3. 90 27 2 磺胺 人 4.23 3 磺胺噻唑 63 4. 40 32 156. 25 磺胺吡啶 90 4.63 250. 184.1 265. 2>156. 1°; 磺胺甲基嘧啶 82 5 4.85 265.2>172.1 25 268. 1>156. 1' ; 22 6 磺胺二甲嗯唑 82 5. 41 268.1>113.2 25 281.0>156.1; 27 7 磺胺-5-甲氧嘧啶 90 5.42 281.0>108.1 42 271.1>156.1; 21 8 磺胺甲噻二唑 60 5. 60 271.1>108.0 33 279.2>186.1"; 27 9 磺胺二甲嘧啶 90 5.86 279.2>156.1 27 281.1>156.1"; 25 10 磺胺甲氧哒嗪 95 6. 14 281.1>92.2 45 3 NY/T 3167—2017 表2 (续) 定量离子对*； 碰撞能量 序号 中文名称 去簇电压 保留时间 定性离子对 eV eV min m/z 285.1>156. 1° ; 11 22 磺胺氯哒嗪 60 6. 63 285.1>108.0 34 254.2>156.1°; 12 24 磺胺甲嗯唑 85 6.83 254.2>108.1 37 磺胺间甲氧嘧啶 281.2>156.1; 26 13 87 6. 97 281.2>108.1 38 14 268.1>108.1"; 22 磺胺异唑 82 7. 25 268.1>113.1 25 15 311.1>156.0°; 26 磺胺邻二甲氧嘧啶 73 7. 22 311.1>108.0 37 苯甲酰磺胺 277.1>156.0"; 16 19 60 7. 69 277.1>108.1 32 315.1>156. 0* ; 17 29 磺胺苯吡唑 85 8.08 315.1>160.1 31 311.3>156.1°; 31 18 磺胺间二甲氧嘧啶 80 8.54 311.3>218.0 38 19 301.1>156.1'; 24 磺胺喹嗯 36 80 8.85 301.1>108.0 离子对为定量离子对，对于不同的质谱仪器，各项参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。 7.4定性测定 检出的色谱峰保留时间与磺胺类标准物质保留时间相对偏差在土2.5%以内,并且在扣除背景后所 选择的两对离子对的相对丰度比偏差不超过表3的规定,则可判断样品中存在磺胺类药物。 表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 单位为百分率 相对离子丰度 >50 20~50(含） 10~20(含) 《10 允许的相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.5定量测定 本方法采用外标法定量，以基质标准工作溶液(4.14)质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准 工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，试液中分析物的响应值应在仪器测定的线性范围内。如 试样溶液中磺胺类药物的质量浓度值超出线性范围，则用乙十水（5十5，体积比)（4.15)稀