ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3151-2017 农药登记 土壤和水中化学农药 分析方法建立和验证指南 Guideline on the development and validation of analytical methods for pesticides in the soil and water 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3151—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农药检定所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所。 本标准主要起草人：何红梅、周艳明、张春荣、曲、吴珉、刘学、蔡磊明。 I NY/T 3151—2017 农药登记土壤和水中化学农药分析方法建立和验证指南 1 范围 本标准规定了土壤和水中化学农药母体及其主要代谢物分析方法建立和验证的基本要求。 本标准适用于为农药登记而开展的土壤和水中化学农药分析方法的建立和验证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 千本文件 GB/T6682 分析实 验室用水规格和试验方 GB/T 8170 数值 修约赵 见则与极限数值 3 术语和定义 下列术语和定义适 3. 1 S 待测物 analytes 农药母体及其 要代谢 R 3. 2 检出限 limit 基质中的待测 为基 噪 声的3倍， 以前处理方法的浓缩倍数和LOQ水平的平 3. 3 定量限 limit ation(LO0 经添加回收试验验 更的最低水平用工 3. 4 灵敏度sensitivit 单位浓度或单位质量的待测物质的变化所引起的响应值变化的程度 方法白 敏度通常以方法的 定量限(LOQ)来表示。 3.5 准确度accuracy 测试结果或测量结果与真值间的一致程度,用 3.6 精密度precision 在规定条件下,所获得的独立测试或测量结果间的一致程度,用相对标准偏差(RSD)表示。 3.7 半致死浓度 median lethal concentration 在急性毒性试验中,引起50%的供试生物死亡时的供试物浓度,用LCso表示。 3. 8 半抑制(效应)浓度 median effective concentration 1 NY/T 3151—2017 在农药生态毒性试验中，引起50%的供试生物活动或生长受抑制时的供试物浓度，用EC5o表示。 4分析方法的建立 4.1概述 依据待测物的性质，通过筛选提取溶剂和净化条件（需要时），选择检测仪器和条件，建立待测物在 基质中的定量、定性分析方法。 4.2试剂或材料 4.2.1试剂 有机试剂的级别宜为分析纯及以上纯度,无机试剂的级别宜为化学纯及以上纯度,水至少为GB/T 6682规定的实验室一级水。 4.2.2标准物质 宜使用有证书的标准物质。 4.2.3试验基质 主要的试验基质包括： a）作物耕作区代表性土壤； b）人工土壤； c）饮用水； d）地下水或地表水； e) 测试用水。 4.3仪器设备 主要的仪器设备包括： a） 液相色谱仪； b）气相色谱仪； c）色谱一质谱联用仪； d）电子天平； e）其他辅助设备等。 4.4试验步骤 4.4.1提取 根据待测物的理化性质,通过筛选提取溶剂的种类、用量、提取方式、收集容器和浓缩条件，确定提 取方法。 4.4.2净化 通过筛选净化方式和材料，确定净化步骤、收集容器、浓缩条件、定容体积和定容方式等，确定净化 方法。 4.4.3衍生化 如需要衍生化，通过筛选衍生化试剂和衍生化条件，确定试验方法 4.4.4样品检测 4.4.4.1仪器选择及检测条件优化 根据待测物的性质和检测要求，选择合适的检测仪器并优化仪器参数。 4.4.4.2绘制标准曲线 准确称取标准物质，选择合适的溶剂配制标准溶液母液，再逐步稀释配制系列标准工作溶液，在 4.4.4.1所优化的仪器条件下进样测定。以待测物的绝对量或浓度为横坐标，响应值（如峰高或峰面 积)为纵坐标,绘制标准曲线。标准溶液的浓度范围宜从LOQ的30%至超过待测物最高含量20%。绘 2 NY/T 3151—2017 制标准曲线至少5个数据点(不包括空白),优先采用线性回归方程拟合，获得相关系数，并确定线性响 应范围。线性回归方程(Y=aX十b)的相关系数r不低于0.99。此外,基于不同的检测原理也可采用其 他函数(如指数函数、对数函数等)拟合。 不同样品基质，需分别考察基质效应。当基质效应<20%，可使用溶剂标准曲线进行计算，否则需 用基质标准曲线进行计算。 4. 5 质量控制 4.5.1回收率 在空白基质中添加待测物，测定回收率。添加回收试验至少设置2档添加浓度： a)LOQ; b)10 倍 LOQ,或其他相关浓度水平(≥5 倍 LOQ) 每档浓度至少5个重复,计算平均回收率和相对标准偏差(RSD)。同时,需做空白基质样品，作为 对照。所用基质需包含所有待测基质的类型,不同类型的土壤和水应分别进行添加回收试验。 将测试溶液得到的响应值代入标准曲线回归方程，计算样品中待测物的含量。土壤中待测物的含 量单位用 μg/ kg 或 mg/ kg表示,水中待测物的含量单位用 μg/ L或 mg/ L表示。计算结果以 3位有效 数字表达，含量低于0.001mg/kg或0.001mg/L时，结果可采用2位有效数字表达。 对数据的修约应符合GB/T8170的规定。 添加回收率试验的平均回收率要求见附录A。 4.5.2精密度 方法的精密度包括重复性和再现性，以相对标准偏差（RSD）表示： a) 重复性：同一操作者在同一实验室，使用相同的测试材料及仪器设备，按照相同的方法进行，每 种基质都应做重复性试验，至少做2档添加浓度，每档浓度至少5次重复。 b）再现性：使用相同的测试材料按照相同的方法，在不同的条件下（如不同分析人员、不同批次的 试剂等），选取代表性基质，在3个不同日期的时间段进行独立的回收率试验，至少应做2档添 加浓度,每档浓度至少5次重复。 添加回收率试验的精密度要求见附录A。 4.5.3灵敏度 方法的灵敏度以方法的定量限(LOQ)表示,最低一档添加回收浓度即为LOQ。 土壤中待测物的 LOQ至少为 0. 001 mg/kg。如果待测物对最敏感的非靶标生物的毒性浓度(LCso 或ECso）低于0.001mg/kg，则LOQ须满足该LCso或ECso值。对于除草剂,LOQ须满足最敏感作物的 EC1值。 饮用水和地下水中待测物的LOQ至少为0.1ug/L。对于地表水,LOQ应满足表1中的最低效应 浓度。 表 1 与地表水 LOQ 设置相关的效应浓度 生物 急性试验 慢性试验 鱼 LCso/100 NOEC/10 水 ECso/100 NOEC/10 摇蚊 ECso /100 NOEC/10 藻 ECso / 10 高等水生植物 ECso/10 注：NOEC，无可见效应浓度（noobserved effectconcentration）。 4.5.4选择性 将空白基质样品、最低档浓度的标样和最低一档添加浓度的样品进行测定分析，说明该方法检测信 3 NY/T 3151—2017 号仅与待测物有关，与其他物质无关。空白值通过测定添加试验所用的空白基质获得，在仪器最高灵敏 度下无可见干扰。否则，应给出详细说明。 若检测使用的是质谱，宜提供质谱图(若使用串联质谱，则提供子离子质谱图），以说明检测离子选 择合理性。 4.6样品分析 4.6.1定性分析与定量分析同步进行 当采用质谱检测器进行分析测定时，需满足： a) 使用气相色谱/液相色谱-单级质谱同步进行定性、定量分析时，对于低分辨质谱，至少选择3 个监测碎片离子,其中,选择1个监测碎片离了 子用于定量分析，至少增加另外2个监测碎片离 子(优先选择m/z>100)用于定性分析;对于高分辨质谱,至少选择 2个监测碎片离子,其中， 选择1个监测碎片离子用于定量分析，至少增加另外1个监测碎片离子用于定性分析。 b) 使用气相色谱/液相色谱-串联质谱同步进存定性(定量分析时,至少选择 2对离子对进行定性 定量分析,其中,选择 1 对半度高 分析， 至少增加另外1对反应监 测离子对用于定性分析。 4.6.2定性分析与定量分析分 检出目标 采用独立的分析方法进行确认 不 b) 显不同选择性的固定相或(和)流动相： c) 不同的 检测器 如GCMS对比GC CD,HPL 对比 d) 原方法 三衍生方法时适用） ARCH 衍生 e) 高分 辨质谱； f) 不同白 的电离 如 ESI正离子模式对比负离子模式 5独立实验室验证 当建立或参 室旧 证实验室个数不 少于1个(不包括 应确让 分析要求 析方法的线性范 围、检出限、定量 参见4元 6数据处理 U 6. 1 回收率的计算 按式(1)计算回收 (1) 式中： R 回收率,单位为百分率(% Ca -添加样品待测物的实测浓度,单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L); C。一—待测物理论添加浓度,单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L)。 6. 2标准偏差和相对标准偏差的计算 按式(2)、式(3)计算标准偏差和相对标准偏差。 C(X; -X)2 S: n-1 式中： NY/T 3151—2017 S 标准偏差； 第i次测量得到的回收率,单位为百分率(%)； x 一 回收率的平均值； n 参与计算的回收率个数。 S RSD= X100 (3) X 式中