ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3145—2017 饲料中22种B-受体激动剂的测定 液相 色谱-串联质谱法 Determination of 22 β-agonists in feeds- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3145—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量监督检验中心 (北京)]。 本标准主要起草人：王培龙、索德成、李阳、王瑞国、程勐、张苏、赵根龙、苏晓鸥、李宏、周炜、冯三令、 黄士新。 NY/T 3145—2017 饲料中22种B-受体激动剂的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了饲料中22种β-受体激动剂含量测定的液相色谱-串联质谱方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料中克仑特罗（Clenbuterol)、沙 丁胺醇(Salbutamol)、莱克多巴胺（Ractopamine 下帕特罗（Zilpaterol）、氯丙那林（Clorprenaline）、特 布他林（Terbutaline）、西马特罗（Cimaterol）、西布特罗（Cimbutero) 马布特罗（Mabuterol)、溴布特罗 （Brombuterol）班布特罗（Bambuterol）、克个 roperol）、妥布特罗（Tulobuterol）、利托君 （Ritodrine）、沙美特罗（Salm neterol) 、喷布特罗PenbuRsrol)马喷特罗（Mapenterol)、福莫特罗（For- moterol)、苯乙醇胺 A(PhenylethanolaninA) )、克伦塞罗（Clencyclohexerol）、 拉贝特罗(Labetalol)22 种 β 本标准方法检出限为 RE 规范性引用文 下列文件对 十本 文仕的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 的版本适用于本文 件。凡是不注日期的 的引用文 件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文 GB/T 6682 分析实 室用水规格和试验方法 GB/T 14 699 饲米 采样 GB/T20195 3原理 饲料样品经提 取液提取后 液 相色谱-串联 ENT 质谱仪检测,基质添 加校正： 标法定量 4 试剂和材料 除非另有说明 分析纯试剂 实验室用水符合 GB/ 1/668 级水的规定。 4.1甲醇：色谱纯。 人 4.2甲酸：色谱纯。 4. 3 0. 1 mol/ L 盐酸溶液:将 9 mL盐酸用水定容至 Iu 000 4.4盐酸甲醇提取液：取0.1mo 盐酸20 mL,加人甲醇 80 mL 4.5氨水甲醇溶液:取5mL氨水与95mL甲 4.6样品稀释溶液：取甲酸0.1mL，乙腈10mL, 90mL水混勺 4.7克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西马特罗、西布特罗、马布特罗、 溴布特罗、班布特罗、克仑普罗、妥布特罗、利托君、沙美特罗、喷布特罗、马喷特罗、福莫特罗、苯乙醇胺 A、异克舒令、克伦塞罗、拉贝特罗对照品：纯度≥95%。 4.8β-受体激动剂储备液：分别精密称取各种β-受体激动剂对照品至棕色容量瓶中，用甲醇（4.1)配 成浓度各为1mg/mL的储备液，2℃～8℃冷藏保存，有效期12个月。 4.9混合标准品工作液：分别吸取各种β-受体激动剂储备液（4.8），用样品稀释溶液（4.6)稀释成浓度 为1μg/mL的标准品工作液。2℃～8℃冷藏保存，有效期3个月。 1 NY/T 3145—2017 4. 10 0氮气：纯度99.9%。 4.11滤膜：0.22μum,有机系 4.12固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱(3mL,60mg),或其他性能类似的小柱。 5仪器和设备 5.1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾电离源。 5.2氮吹仪。 5.3离心机:转速不低于8000 r/min。 5.4粉碎机。 5.5涡旋振荡器。 5.6恒温水浴振荡摇床。 5.7固相萃取装置。 5.8天平：感量0.01g；感量0.00001g。 6采样和试样的制备 按GB/T14699.1的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备 样品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，备用。 7分析步骤 7.1提取 称取配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料及精料补充料2g（精确至0.01g)样品于50mL离 心管中，准确加人20mL盐酸甲醇提取液（4.4），涡旋混合30s，超声提取30min，然后于8000r/min离 心5min，上清液备用。 7.2净化 固相萃取小柱依次用3mL甲醇、3mL水活化。取适量或全部上清液过柱，用3mL水和3mL甲 醇淋洗，抽干，用氨水甲醇溶液（4.5)3mL洗脱，收集洗脱液，速度控制在约1滴/s，用氮吹仪在50℃条 件下吹干，用1.0mL样品稀释液（4.6)溶解，过0.22μm滤膜，上机测定。如果检测含量超出线性范围 （1μg/L～100μg/L），应适当减少称样量重新处理或减少过固相萃取小柱的溶液量，将上机溶液所含药 物的浓度稀释至线性范围内上样。 7.3空白基质曲线的制备 选取与待测饲料样品类型相近、混合均匀程度较高的空白饲料，称取6份，每份2g（精确至 0.001g)，于50mL离心管中，按7.1和7.2步骤处理,在净化、吹干后的残渣中，分别添加适量的混 合标准品工作液，配置成不同浓度（1μg/L～100μug/L)的基质添加标准曲线或双平行单点标准溶液， 供液相色谱-串联质谱测定，进行定量。也可利用待检测样品，添加适量的混合标准品工作液，配置成 相应浓度（1μg/L～100μg/L)的基质添加标准溶液，按7.1和7.2步骤处理、通过扣除待测样品检测 值进行定量。 7.4参考液相色谱条件 色谱柱：Cl8柱，柱长150mm，内径4.6mm，粒径2.1μm(或其他效果等同的Cls柱）。 柱温：30℃。 进样量：10μL 流动相及参考梯度洗脱程序见表1。 2 NY/T 3145—2017 表 1 流动相及参考梯度洗脱程序 时间,min 流速，mL/min 0.1%甲酸溶液，% 乙腈,% 曲线 0 0. 3 95 5 6 1. 0 0. 3 95 5 6 2. 0 0. 3 80 20 9 6. 0 0. 3 70 30 9 7. 0 0. 3 10 90 6 8. 0 0. 3 10 90 6 9. 1 0. 3 96 5 9 10 0. 3 95 5 6 7.5 参考质谱条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：正离子模式。 检测方式：多反应监测。 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏 度达到检测要求。 毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度。 定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表2。 表2 22 种β-受体激动剂的定性离子对、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值 被测物名称 定性离子对，m/z 定量离子对，m/ 锥孔电压，V 碰撞能量,eV 213.9>153.9 32 氯丙那林 213.9>153.9 26 213.9>90.9 16 220.1>202.1 16 西马特罗 220.1>202.1 23 220.1>160.0 10 226.0>152.0 20 特布他林 226.0>152.0 25 226.0>170.0 20 228.0>154.0 20 妥布特罗 228.0>154.0 26 228.0>172.0 20 234.0>160.0 15 西布特罗 234.0>216.0 25 234.0>216.0 9 沙丁胺醇 240.0>148.0 20 240.0>148.0 25 240.0>222.0 10 262.2>185.0 24 齐帕特罗 262.2>185.0 24 262.2>244.0 13 263.1>203.1 18 克仑普罗 263.1>245.2 263.1>203.1 22 11 277.0>203.0 20 克仑特罗 277.0>203.0 25 277.0>259.0 10 288.0>150.0 20 利托君 288.0>150.0 19 288.0>121.2 20 292.2>236.2 20 喷布特罗 292.2>236.2 22 292.2>209.2 15 302.0>150.0 20 异克舒令 302.0>150.0 22 302.0>107.0 20 302.2>163.9 16 莱克多巴胺 302.2>163.9 20 302.2>284.2 12 3 NY/T 3145—2017 表2 (续) 被测物名称 定性离子对，m/z 定量离子对，m/z 锥孔电压，V 碰撞能量,eV 310.9>236.9 24 马布特罗 310.9>236.9 30 310.9>216.9 16 319.1>202.9 20 克伦塞罗 319.1>202.9 22 319.1>301.1 13 马喷特罗 325.2>237.0 15 325.2>237.0 19 325.2>307.1 15 拉贝特罗 329.0>207.0 17 329.0>2