ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3140—2017 饲料中苯乙醇胺A的测定 高效液相色谱法 Determination of phenylethanolamine A in feeds- High performance liquid chromatography 2017-12-22 发布 2018-06-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3140—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都）。 本标准主要起草人：张静、赵立军、程传民、陈红、高庆军、王宇萍、李云。 H NY/T 3140—2017 饲料中苯乙醇胺A的测定、高效液相色谱法 1范围 本标准规定了饲料中苯乙醇胺A的高效液相色谱测定法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中苯乙醇胺A的测定。 本标准方法的检出限为 1. 0 mg/kg,定量限为 2. 0mg/kg。 2 规范性引用文件 PUBI 十，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引 用文件,其最新版本 GB/T 6682 分 析实 验室用水规 GB/T 14699. 采样 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 农业部1486 号公 010 饲料中 苯乙醇胺 A的测定 S 高效液相 普法 3 术语和定义 下列术语和定 义适用 本文件 R 3. 1 苯乙醇胺 phenylethano 化学名称为 2 4-硝基 （-甲氧基本基） 量为344.17，分子 - methoxy phenyl) ethanol 4原理 试样中的苯乙醇胺A经甲酸甲醇溶液提取、固相萃取柱净化后， ,用高效液相色谱仪进行测定,外标 法定量。 5试剂和材料 除非另有说明,所有试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中一级水的规定。 5.1乙腈：色谱纯。 5.2甲醇。 5.3甲酸：优级纯。 5.4苯乙醇胺A对照品纯度≥95%。 5.50.1%甲酸溶液：取甲酸1.0mL加水定容至1000mL,摇匀即得。 NY/T 3140—2017 5.6甲酸甲醇溶液：取甲酸0.1mL,加人甲醇定容至100mL,摇匀即得。 5.7稀释液：取0.1%甲酸溶液（5.6)80mL，加乙腈至100mL，摇匀即得。 5.8氨化甲醇溶液：取氨水5mL,加人甲醇至100mL，摇匀即得。 5.9标准储备溶液：100μg/mL，准确称取苯乙醇胺A50mg（精确到0.1mg），用甲醇配制成100μg mL的标准储备溶液，一18℃避光保存备用，有效期为6个月。 5.10标准工作溶液：用稀释液（5.7)稀释标准储备溶液（5.9），配制成浓度范围为1.00μg/mL、2.00 μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL的标准工作溶液，4℃避光保存，有效期1 个月。 5.11混合型阳离子固相萃取柱：3mL,60mg;或相当的分析柱。 5. 12 2微孔滤膜：0.45μm，有机相。 6仪器和设备 6.2天平:感量1 mg。 6.3 分析天平:感量 0.1 mg。 6.4离心机:转速为5000 r/min及以上。 6.5超声水浴。 6.6涡旋混合器。 6.7固相萃取装置。 6.8氮吹装置。 7试样制备 按照GB/T14699.1的规定，抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的 规定制备样品，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光常温保存，备用。 8 测定步骤 8.1提取 称取饲料试样2g(精确到0.001g),置于50mL离心管中,准确加入甲酸甲醇溶液（5.6)20.0mL， 涡旋混合30s，超声提取20min，期间摇动2次；取出后，于离心机上5000r/min离心5min，取上清液， 备用。 8.2净化 固相萃取柱(5.11)分别用甲醇3mL、水3mL活化，准确移取上清液（8.1)5.0mL过柱，分别用水3 mL、甲醇3mL淋洗，近干后用氨化甲醇溶液(5.8)3mL洗脱。收集洗脱液，在氮吹装置上50℃下用氮 气吹干。准确加入稀释液(5.7)1.0mL溶解，过0.45μm微孔滤膜，供高效液相色谱仪测定。 8.3测定 8.3.1高效液相色谱条件 色谱柱：Cig柱，柱长250mm，内径4.6mm,粒度5um;或性能相当的分析柱； 柱温：30℃； 流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，梯度见表1； 流速:1. 0 mL/ min; 进样量：20μL； 2 NY/T 3140—2017 检测波长：276nm。 表1流动相梯度洗脱条件 时间,min 流动相A,% 流动相 B,% 0. 00 80 20 10.00 60 40 10. 10 80 20 18.00 80 20 8.3.2定性测定 在仪器最佳工作条件下，样品中待测物的保留时间与苯乙醇胺A标准工作溶液中对应的保留时间 相对偏差在土2.5%之内，则可判定样品中存在对应的待测物。如需进一步确认，可按农业部1486号公 告—1—2010的规定检测。 8.3.3定量测定 按照上述液相色谱条件测定样品溶液和标准工作溶液，以色谱峰面积进行单点或多点校正定量，样 品溶液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范围内。苯乙醇胺A标准工作溶液色谱图参见附录A。 9 结果计算 试样中苯乙醇胺A的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克（mg/kg），单点校正按式（1) 计算。 .(1) P,Xm 式中： X 试样中苯乙醇胺A的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； P; 试样溶液峰面积值； C, 标准工作溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； Ps 标准工作溶液峰面积值； m 称取试样的质量，单位为克(g)； V 上机前定容体积,单位为毫升（mL）； n 稀释倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。 多点校正按式(2)计算。 C XVXn X= (2) m 式中： CH 标准曲线上查得的试样中苯乙醇胺A的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 10 重复性 在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的20%。 3 NY/T 3140—2017 附 录 A （资料性附录） 苯乙醇胺 A标准工作溶液的高效液相色谱图 苯乙醇胺A标准工作溶液色谱图见图A.1。 mAU 40 PU 30 20 醇胺 A 标准工作溶液(10 μg/mL)的高效液相色 NY/T 3140-2017. 中华人民共和国 农业行业标准 饲料中苯乙醇胺 A的测定 高效液相色谱法 NY/T 3140—2017 * 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼) （邮政编码：100125 网址：www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行各地新华书店经销 * * * 开本880mmX1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2018年5月第1版 2018年5月北京第1次印刷 书号：16109·4346 定价：18.00元 版权专有 侵权必究 NY/T 3140-2017 举报电话：（010）65005894