ICS 67.120.10 X 22 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3101-2017 肉制品中红曲色素的测定 高效液相色谱法 Determination of monascus pigments in meat products- HPLC method 2017-06-12 发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3101—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部农产品加工局提出。 本标准由农业部农产品加工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部肉及肉制品质量监督检验测试中心(江西省农业科学院农产品质量安全与 标准研究所、江西省知识产权服务中心， 本标准主要起草人：胡丽芳、董秋洪、周瑶敏、储怡士、李伟红、李瑞丽、魏爱花、尹德凤。 I NY/T 3101—2017 肉制品中红曲色素的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了肉制品中红斑红曲胺、红曲玉红胺、红曲素、红斑红曲素和红曲玉红素含量的高效液 相色谱测定方法。 本标准适用于熏煮火腿类、灌肠类、熏烤鸡鸭类、酱鸭类和腌腊类肉制品中红斑红曲胺、红曲玉红 胺、红曲素、红斑红曲素和红曲玉红素含量的测定。 本标准方法检出限为0.18mg/kg，定量限为0.5mg/kg 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样中红曲色素用甲醇一乙酸乙酯(2十8,体积比)提取,提取液浓缩后,采用凝胶色谱净化,浓缩定 容后，用高效液相色谱测定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有规定,以下试剂均为分析纯。水应符合GB/T 6682规定的一级水要求。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2乙：色谱纯。 4.3乙酸乙酯。 4.4环已烷。 4.5抗坏血酸。 4.6磷酸。 4.7无水硫酸钠：于450℃焙烧4h,冷却后于干燥器储存，备用。 （8（699 于98%。 4.9甲醇一乙酸乙酯溶液：分别取200mL甲醇和800mL乙酸乙酯，混合均匀，备用。 4.10乙腈一水溶液：分别取700mL乙腈和300mL水，混合均匀，备用。 4.11磷酸溶液：量取1000mL水,用磷酸(4.6)调pH2.5±0.3。 4.12乙酸乙酯一环已烷溶液：分别取500mL乙酸乙酯和500mL环已烷，混合均匀，备用。 4.13标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取各标准品（4.8）10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并 定容至刻度,置于棕色干燥器中,4℃冰箱中避光保存。 4.14标准中间液（0.1mg/mL)：准确吸取各标准储备液（4.13）1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇溶 解并定容至刻度，置于棕色干燥器中，4℃冰箱中避光保存。 NY/T 3101—2017 4.15混合标准工作液：分别准确吸取各标准中间液（4.14）0.02mL、0.05mL、0.20mL、0.50mL、1.0 mL、2. 0mL,用甲醇稀释并定容至10mL,配置浓度分别为 0.20 μg/mL、0.50μg/mL、2. 0 μg/mL、5.0 μg/ mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的混合标准系列工作液,置于棕色干燥器中,4℃冰箱中避光保存,现配现用。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 5. 2 2分析天平：感量0.01mg和感量0.01g。 5.3组织均质器：转速不低于10000r/min 5.4 超声波清洗仪。 5. 5 离心机：转速不低于10000r/min 5. 6 氮气吹干装置。 2D 5.7 凝胶渗透色谱仪 30 cmX 5. 8 旋转蒸发仪 5. 9 离心管：50n TA 试样制备与保存 S 取适量代表性试样,绞 卒并均质。用洁净密封袋或试样瓶密封后于 试样制备操作过 程中应防止受到污染或使社 被测组分发生含量变化。 URA 7 分析步骤 7. 1 提取 T 内试样 称取制备好的 2 酯溶液 9），加入无水 硫酸钠(4.7)2 亢坏血酸( min,10 000r/min 上清液转人 另一个 50 mL 管中 残渣再加人10 mL甲醇乙酸乙 酯溶液（ 提取 合并上清液， 40℃下氮气吹至近 (用乙 完溶液（4.12） 10mL,待净化处 7.2净化 待净化液由5 试样环注 人凝胶 参透色 谱(GPC)柱,设定泵流量 5. n 以乙酸乙酯-环已 烷溶液(4.12)洗脱，收集 8in min流出液。 将收集的流出液于 °C旋转蒸发浓缩至约 1 mL, 40℃氮气吹至近干,用乙 晴 水溶液 4 10）定 至1. 0 mL,供高效液相色谱测定 7.1和7.2操作过程应在避光的环境下进 行 7. 3 液相色谱条件 a) 色谱柱：C18，250mmX 4.6 mm(内径),5 μm,或相当者 b) 流动相：乙腈和磷酸溶液（4.11),梯度洗脱，洗脱条件见表1； c) 流速:1.0 mL/min; d) 柱温：30℃； e) 检测波长：400nm； f) 进样量：20μL。 表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间,min 乙腈,% 磷酸溶液，% 0 70 30 5 70 30 2 NY/T 3101—2017 表1 (续) 时间,min 乙腈,% 磷酸溶液，% 20 90 10 30 70 30 7.4标准曲线绘制 将混合标准系列工作液（4.15）依次按上述色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，以峰面积为纵坐 标，浓度为横坐标,绘制标准曲线。 7.5测定 根据保留时间定性，外标法定量。超过标准曲线浓度范围的样液， ，应稀释后测定。5种红曲色素混 合标准溶液液相色谱图参见附录A。 7.6 空白试验 结果计算 单点校正按式(1) (1) 1000 式中： X 试样中红曲色素各组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） A 样液色谱图中红曲色素各组分的峰面积； 标准工 工作液中红曲色素各组分的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) Cs V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL) A, 标准 工作液色谱图中红曲色素各组分的峰面积 m 计算结果应扣 除空户值 以重复性条 件 获得的 2 次独 立测定结果的算术平均值表示 数 多点校正按式(2) 算。 1000 (2) 4 式中： 标准曲线上查得的试样中红曲色素各组分的浓度,单位为微克每 升(μg/ mL)。 计算结果应扣除空白值， 以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。 9精密度 在重复性条件下,获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。在再现性条 件下，获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。 NY/T 3101—2017 附录A (资料性附录) 红曲色素混合标准溶液液相色谱图 红曲色素混合标准溶液液相色谱图见图A.1。 mAV 30 I-SS8"c 25 9.3633 9.954-4 20 15.568-5 15 5.816-2 10 5 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 t,min 说明： 红斑红曲胺； 4 红斑红曲素； 一 红曲玉红胺； 红曲玉红素。 红曲素； 图 A.1 红曲色素混合标准溶液液相色谱图 中华人民共和国 农业行业标准 肉制品中红曲色素的测定 高效液相色谱法 NY/T3101—2017 * * 中国农业出版社出版 (北京市朝阳区麦子店街18号楼） （邮政编码：100125 网址： www.ccap.com.cn) 北京印刷一厂印刷 新华书店北京发行所发行 各地新华书店经销 * * * 开本880mmX×1230mm1/16 印张0.75 字数15千字 2017年9月第1版 2017年9月北京第1次印刷 书号：16109·4246 定价：18.00元 版权专有 侵权必究 NY/T 3101-2017 举报电话：（010）65005894