ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3096—2017 农作物中农药代谢试验准则 Guideline for the testing of pesticide metabolism in crops 2017-06-12 发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 3096—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农药检定所。 本标准主要起草人：简秋、郑尊涛、李富根、穆兰、朱光艳、叶庆富、龚勇、秦冬梅、叶贵标、赵金浩、廖 先骏、王璞。 NY/T 3096—2017 农作物中农药代谢试验准则 1范围 本标准规定了农作物中农药代谢试验的基本原则、方法和要求。 本标准适用于农药登记中的农药代谢试验 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 GB 11930 操作非密封源的辐射防护规定 GB 12711 低、中水平放射性固体废物包装 标准 GB 14500 放射性废物管理规定 RESE NY/T 788 农药残留试验准则 国务院令第562 放射性物品运输安全管理条 3术语和定义 界定的 NY/T 788 以及下列术语 R 3. 1 农药代谢 农药直接或间 间接施 中的明 、分布、转化， 的代谢和（或） 降解产物，并明确代谢和( 3. 2 同位素标记农 isotopic labeled pesticide 利用放射性和（或●稳定 行同位素标记的农药 3. 3 放射化学纯度 radiochem purity 放射性标记化合物中以某种特定的化学 形态存在的放射性核素的活度 占总放射性核素活度的百 分比。 3. 4 总放射性残留量 total radioactive residue(TRR) 残留中源于标记农药的母体及其代谢和(或)降解产物的总放射性量，包括可提取残留量和结合残 留量。 3. 5 同位素示踪试验规范laboratory practice of isotopic tracing 在具有国家或省级以上“辐射安全许可证”资质(丙级以上非密封性放射性同位素实验许可资质)实 验室中，以同位素标记化合物为示踪剂，按照GB11930操作试验，获取推荐使用的农药在作物中的代 谢和(或)降解产物信息及途径，以及推荐农药母体及其代谢和(或)降解产物在作物中的消减动态规律。 3. 6 可提取残留 extractableresidue(ER) 1 NY/T 3096—2017 能够用常规提取方法得到的农药残留，即通常意义上的农药残留，包括母体及其衍生物。 3.7 结合残留 bound residue(BR) 在不显著改变残留物化学性质条件下,不能用常规提取方法提取的包括母体及其衍生物农药残留， 即不可提取残留。 4基本要求 4.1试验单位 4.1.1具有丙级以上非密封性放射性实验室资质。 4.1.2遵循同位素示踪实验操作规程进行代谢试验。 4.1.3具有满足代谢物分析技术要求的仪器、设备和环境设施。 4.2试验人员 4.2.1具有放射性工作人员许可证、个人剂量季度监测报告、职业病检测报告。 4.2.2具备进行农药代谢试验的专业知识和经验。 4.2.3掌握农药代谢试验的相关规定和技能。 4.3试验背景资料 试验农药的有效成分及其剂型的理化性质、制备方法，登记作物、防治对象、使用剂量、使用适期和 次数、推荐的安全间隔期，以及已有的毒理、残留和环境资料等，,并记录农药通用名称(中文、英文)、注意 事项以及生产厂家(公司)等。 5试验方法 5.1农药的同位素标记 根据农药化合物的元素组成和分子结构，选择射线类型、能量和半衰期合适的核素与稳定的标记位 置以及适宜的比活度。对于一些结构复杂的农药化合物,应选择多位置标记和(或)双(多)核素标记,或 者根据不同试验要求选择不同标记方式，以确保提高试验结果的质量。农药标记化合物的化学纯度和 放射化学纯度要求达到95%以上。 5.2供试作物 作物分为5类：根茎类、叶类、果实类、种子与油料类、谷类作物（见附录A），对不属于该5类的作 物,建议向农药登记管理部门咨询。为了推断一种农药在所有作物种类中的代谢,至少选择3类作物进 行代谢试验，每类应至少选1种作物。如果试验结果显示代谢途径相似，则不需要进行另外的试验；如 果结果显示代谢途径不同，应选择另外2类作物进行进一步的试验。在使用剂量和方法近似的情况下， 5.3作物栽培 用于代谢研究的作物可以种植在辐射防护设施完备的温室或者人工气候室内。试验时根据不同作 物的生理生长特性,按照常规栽培方法对其进行培养,培养期间记录环境条件(如温度、湿度、光照等)和 栽培措施。根据作物生长特性,选择适宜供试作物生长且未施用供试农药的土壤。 5.4施药方式 5.4.1施药剂量 一般采用推荐的良好农业规范中最大施药剂量;如果推荐的良好农业规范中施药次数超过3次，则 代谢试验的施药次数可为3次或为推荐施药总次数的1/3,取较大值。对于某些在作物中残留量特别 低的农药，可以适当增大施药剂量，以便鉴定各种代谢物。施药时间、方式应与供试农药推荐的施药方 2 NY/T 3096—2017 式一致。 5.4.2标记农药茎叶引入法 5.4.2.1涂抹法：根据拟登记产品剂型选择适当助剂,将农药标记化合物配制成适当浓度的溶液。蘸 取一定量在叶面或叶背反复涂抹,并通过测定实际引入作物的总放射性活度确定引人量。处理叶的叶 龄要求基本一致。涂抹时防止叶面损伤和交叉污染 5.4.2.2喷雾法：用微型喷雾器将示踪剂溶液均匀地喷洒在叶片表面，并通过测定实际引入作物的总 放射性活度确定引人量。喷洒需在气密性装置中进行，以保证实验人员安全，防止交叉污染， 5.4.3标记农药基质引入法 5.4.3.1毒土法试验时，将农药标记化合物用助剂配制成适当浓度的溶液，在播种前均匀混人土壤，或 在播种后通过浇灌施入土壤。 5.4.3.2沙培和水培试验时，将农药标记化合物用助剂配制成适当浓度的溶液，把标记农药在预定的 时间(或作物生育期)加人培养液中。 5.4.4标记农药种子引入法 将农药标记化合物用助剂配制成适当浓度的溶液，按照推荐施药方式进行种子处理。 5.5采样间隔和次数 施药后定期采样，采样次数可根据作物实际情况而定，应满足代谢物动态分析要求，采样时间点应 包括推荐的采收间隔期。作物首次采样应于施药后药液基本风干时进行，以确定标记农药的原始沉积 量。毒土法试验时应同时采集作物与土壤样品。 6样品的采集、运输及储藏 6.1样品采集 6.1.1作物样本的采集。作物样本的采集时间和采集方式由其农艺和经济食用方式确定。对那些在 未成熟期就被食用的作物，应采集相关的植株样本进行分析。采集后植株通常根据作物生理性状分为 根、茎、叶、果实（果肉和果皮）、种子。 6.1.2样品采集过程中应避免交叉污染。在采集叶片施药作物样品时，可用滤纸或套袋将施药叶片与 其他非施药叶片隔离；在采集根部施药作物样品时，可采用滤纸将地上部与施药的土壤或营养液等介质 隔离，防止污染地上部。每份样品要存放在独立的容器中，采样从空白对照开始。 6.1.3样品采集过程中应注意以下事项： a）在样品的采集、包装和制备过程中避免样品表面残留农药的损失； b）在样品的采集、包装和制备过程中，必须采取措施以杜绝放射性物质污染空白对照、土壤、 水等。 6.2样品的运输及储藏 6.2.1采集的样品应采用不含分析干扰物质和不易破损的容器包装；每一个样品应做好标识，并赋予 唯一编号，且于24h以内冷冻保存；同时，记录样品名称、采样时间、地点及注意事项等相关信息。 6.2.2样品应在不高于一18℃条件下储存,冷冻前不得将样品匀浆。解冻后应立即测定。有些农药在 储存时可能会发生降解，需要在相同条件下开展添加回收率试验进行验证。对于果皮和果肉分别检测 的样品，应该在冷冻前将其分离，分别包装。 7可提取残留分析 7.1样品提取 7.1.1根据待测农药的性质、作物样品类型和实验室条件选择适当的提取方法。 3 NY/T 3096—2017 7.1.2在提取的过程中,要求测量每一提取步骤的放射性,计算提取效率,确定最佳提取方案。 7.2样品净化 根据样品与干扰物物理、化学性质的不同，选择适当的方法进行净化。在净化过程中，根据萃取各 相或流出液的放射性检测来取舍目标物和杂质，避免放射性目标物丢失，确保放射性物质的回收率。 7.3代谢和(或)降解产物的分离与鉴定 7.3.1代谢和(或)降解产物的分离 通常采用薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱一液体闪烁测量仪（HPLC-LSC)、高效液相色谱一流 动液体闪烁仪(HPLC-FSA)联机技术分离净化样品中各组分,并根据流出组分的放射性特征峰来取舍 目标代谢物和杂质。色谱分离条件应以能将放射性目标物与杂质达到有效分离为宜。 7.3.2代谢和(或)降解产物的鉴定 将分离得到的放射性目标物进行色 鉴定目标物时,对比质 ING 二级质谱断裂行为推断放射性 目标物的分子结构。 立收集同位素质谱特征信 7. 4 放射性代谢和(或)降解产物的确 7.4.1采用共色谱法对鉴定结果进行确证实 确证结构的典型方法 通过在不同色谱体系下，主要代谢物与已 寸色谱图中目标物的保 a) 使用如质谱(MS)或串联质谱(MSMS)等可以确定其结构的技术 寸和(或)降解产物的 b) 二级质谱特征和碎裂行为与已知标样的进行比对。 C0.01 mg/kg,且在残留物总量中占的比例低于 TRR的 代谢物浓度为