ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3088—2017 化学农药 天敌（瓢虫）急性 接触毒性试验准则 Chemical pesticideGuideline for natural enemy(ladybird beetles) acute contact toxicity test 2017-06-12发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3088—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农药检定所、中国矿业大学（北京）。 本标准主要起草人：于彩虹、林荣华、薛明明、王晓军、程沈航、姜辉、隋靖怡。 NY/T 3088—2017 化学农药 天敌（瓢虫）急性接触毒性试验准则 1范围 本标准规定了天敌瓢虫急性接触毒性试验的材料、条件、方法、质量控制、试验报告的基本要求。 本标准适用于为化学农药登记而进行的天敌瓢虫急性接触毒性试验，其他类型农药可参照使用。 本标准不适用于易挥发和难溶解的化学农药 2术语和定义 2. 1 半致死用量 一定试验周其 期内 引起50% 物死亡时单位面积的供试物使用 a.1hm 2. 2 S 供试物 test substang 试验中需要 则试的物 2. 3 R 限度试验 limittes 当供试物在 衣田内推荐最大使用剂量下对 靠的LR5o值 时，需在供试物最 大田间 飘虫的 生效应。 CEI 2. 4 多次施药因 yltiple a pplication factor 药最后 药的初始浓度与单次施药后初始浓度的 化值用 多次施药时 MAF表示。MAF 主要取决于该化 物 为的间隔以及施用的次数 3试验概述 人 采用药膜法处理飘虫幼虫。将供试物用水或其他有机浴剂配制成 同浓度的稀释液，定量 均匀施人一定面积的玻璃容器中的玻璃板（盘）或叶片表面然后将试验用 虫幼虫放人其中（上）胁迫 暴露一定时间，每天观察和记录容器中(上)瓢蛋的中毒症状和死亡数 至各浓度处理组死亡率稳定或 至成虫羽化。计算出LR50值及其9 言限。本标准药膜 史用指形管或玻璃板（盘）2种器具。 4试验方法 4.1材料和条件 4.1.1供试生物 选择七星飘虫（Coccinellaseptempunctata），试验幼虫采用孵化3d～4d的二龄幼虫。 4.1.2供试物 农药原药或制剂。难溶于水的可用少量对瓢虫毒性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂等助溶，助溶剂 用量不应超过0.1mL(g)/L。 4.1.3主要仪器设备 1 NY/T3088—2017 智能人工气候箱； 分析天平（精确到0.0001g）； 指形管； 喷雾装置（适用玻璃板药膜法）； 玻璃板（盘）试验装置（适用玻璃板药膜法）； 环状防护罩（适用玻璃板药膜法）； 瓢虫饲养装置等。 4.1.4试验条件 4.1.4.1温度 飘瓢虫的饲养温度范围应在23℃～27℃。 4.1.4.2湿度 相对湿度应在60%~90%。 4.1.4.3光照 光照周期（光暗比）应为16h：8h，光照强度不低于1000lx。 4.2试验操作 4.2.1预试验 4.2.1.1浓度设置 将供试物用蒸馏水或有机溶剂配制成4个5个较大间距不同浓度的稀释液，并设空白对照。供 试物使用溶剂助溶时，还需设溶剂对照。除此之外，为了验证瓢虫的敏感性，需设立一个参比物质，推荐 用乐果（Dimethoate）。 4.2.1.2染毒 染毒方式为药膜法，包括玻璃药膜和叶片药膜两种染毒方式。其中玻璃药膜的介质可为指形管或 玻璃板。 4.2.1.2.1 指形管染毒 在玻璃指形管中定量加入配置好的各浓度供试药液，将药液在指形管中充分滚动，直至晾干制成均 匀药膜管，然后将供试飘瓢虫幼虫单头接人药膜管中，饲喂足量的活蚜虫供瓢虫取食，并以纱布封紧管口， 以后每天饲喂充足的活蚜虫作为食物，饲喂蚜虫前需将残余的蚜虫清理干净，以保证瓢虫充分接触药 膜。对照组的瓢虫数量与处理组相同，并与处理组同时进行。指形管应平放，保证瓢虫能够自由爬行减 少重力对其的不利影响。 4.2.1.2.2玻璃板（盘)或植物叶片染毒 在一定尺寸（长×宽=40cmX18cm）的玻璃板（盘）或植物叶片上均匀涂布或喷洒配置好的各浓度 供试药液，并立即精确计算玻璃板（盘或叶片）上的着药量，然后自然晾干或冷风吹干待用。取预先制备 好的圆柱形玻璃环（直径5cm，高4cm），将距底部3mm之上的玻璃环内部均匀涂布滑石粉或聚四氟乙 烯（防止试虫沿着玻璃环内壁上爬，且避免对试虫生长造成不利影响），置于晾干的玻璃药膜板（盘或叶 片）上，保持玻璃环与板（盘）面或叶片间尽量无缝隙并做适当固定，每环单头接入受试飘虫幼虫并盖封， 按4.2.1.2.1的方法进行喂食。试验装置参见附录A。 玻璃药膜板（盘或叶片）需保持干净，制备需使用适宜的涂布或喷洒装置，装置应使供试物药液均匀 地涂布或喷洒在玻璃板（盘或叶片）上。涂布或喷洒使用药液量为200L/hm²。涂布或喷洒前需测试药 液沉降的均匀性，以满足在玻璃板（盘）或叶片上药液着药量为（2土0.2）L/cm。此过程可使用清水 重复测试至少3次，每次涂布或喷洒前后都应迅速对玻璃板（盘）或叶片称重，计算预计的着药量（重复 间的平均误差应控制在预计着药量的10%以下），同时记录涂布或喷洒装置的各种信息（如型号、喷嘴 类型及孔径、喷洒压力等）。重复施药操作前，涂布或喷洒装置应用清水清洗、校正。 2 NY/T3088—2017 4.2.1.3观察与记录 每天观察并记录玻璃管(环、叶片)中(上)瓢虫的中毒症状和死亡数，将死亡的幼虫、蛹与行为异常 的瓢虫一起记录(如活动不灵活的、抽搐的)直至化蛹。化蛹后，蛹继续保持在药膜管内观察至成虫羽 化，计算成虫羽化率，未羽化成虫均计入死亡虫数。当幼虫或蛹的减少是由于操作失误（例如，幼虫逃走 或在饲养、清洁过程中被杀死），受试瓢虫幼虫初始数量应减去减少的幼虫数量。 4.2.2正式试验 4.2.2.1浓度设置 根据预试验确定的浓度范围按一定比例间距设置5个～7个浓度组，相邻浓度的级差不能超过 每重复不少于10头二龄飘虫幼虫。 4.2.2.2染毒 按4.2.1.2的方法进行。 4.2.2.3观察与记录 按4.2.1.3的要求进行。 4.2.3限度试验 限度试验的上限剂量设置为供试物田间最大推荐有效剂量乘以多次施药因子（MAF)。当受试瓢 虫在供试物达到上限剂量时未出现死亡，则无需继续试验；当供试物在水或其他有机溶剂的溶解度小于 田间最大推荐有效剂量时，则采用其最大溶解度作为上限剂量，对于一些特殊的药剂也可采用相应的制 剂进行试验。 MAF按式（1)计算，当缺少任何数据时，MAF可选取默认值3。 MAF= (1) 式中： k 农药在植株表面的降解速率常数： n 施药次数，单位为次； i——施药间隔，单位为天(d)。 降解速率常数k按式(2)计算。 1n2 k= DT50 式中： DT5o— 农药在植株表面的降解半衰期，单位为天（d)。当缺少DTso的实测数据时，应采用默认值 10 d。 5数据处理 LR5o的计算可采用机率值法估算，也可应用有关毒性数据计算软件进行分析和计算。如寇氏法可 用于计算瓢虫在不同观察周期的LR5o值及95%置信限。当对照组受试生物出现死亡时，各处理组的死 亡率计算应根据对照组死亡率用Abbott公式进行修正。 LR5按式(3)计算。 logLR5o=Xm-j(ZP-0.5).. (3) 式中： Xm -最高浓度的对数； j 相邻浓度比值的对数； 3 NY/T3088—2017 ZP— 各组死亡率的总和（以小数表示）。 95%置信限按式（4)计算。 95%置信限=logLRso±1.96SlogLRso (4) 标准误S按式（5)计算。 (5) N 式中： -1个组的死亡率，单位为百分率（%） N 各浓度组瓢虫的数量，单位为个 6 质量控制 PUBL 质量控制条件包括 a) 对照组死亡 不超 b) 整个试验过程 要保证提供 c) 药膜制备保证 均玺 d) 所选测 试飘 虫幼虽对 参比物质乐果在0 20 hm剂量下其 80%，则该种群 行试验：S 可进 e) 试验期间 ，应保护 式验室条件正常，如出现各种原内的故障，须重新 试验报告 试验报告应 活下列内 a) 供试物 基本理化性质、来 源等 b) 供试 生 物名称、 来源、培养方法 c) 试验 包话 d) 试验 要设 e) 试验结 定试 95%置信限，并给出所采用的 f) 对照组及 组是 出现列 及异常反应 g) 试验质量 条保描 h) 试验结果及毒性评价。 4 NY/T3088—2017 附录A (资料性附录) 玻璃板（盘）药膜法试验装置示意图 玻璃板（盘)药膜法试验装置见图A.1、图A.2、图A.3。 单位为厘米 40 玻璃盘 40 安全玻璃 图A.1 两层玻璃板平面图 单位为厘米 图A.2 小圆柱立体图 单位为厘米 40 图A.3 药膜试验装置侧面图 5