ICS 65.020 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3087—2017 化学农药 家蚕慢性毒性试验准则 Chemical pesticide-Guideline for silkworm chronic toxicity test 2017-06-12 发布 2017-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3087—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农药检定所、山东农业大学。 本标准主要起草人：张燕、姜辉、王开运、乔康、赵旭、柳新菊、俞瑞鲜。 I NY/T3087—2017 化学农药 家蚕慢性毒性试验准则 1范围 本标准规定了化学农药对家蚕慢性毒性试验的材料、条件、方法、质量控制和试验报告的基本要求。 本标准适用于为化学农药登记而进行的家蚕慢性毒性试验，其他类型的农药可参照使用。 本标准不适用于易挥发和难溶解的化学农药。 2规范性引用文件 PUBI 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用无本文件、 GB/T31270. 性毒性试验 3术语和定义 A L 本文件 3.1 半致死浓度 median lethal concentration 在急性伺喂毒性试验中，引起30%供试家蚕死广时美叶年的供试物浓度 注：单位为毫克有双成分每下克桑叶mga/kg案叶）。 3. 2 最低可观察效应浓度 lowest observed effect concentration 在一定暴露期内，与对照相比，对家蚕产生显著影响C <0.05）的最低供试 用LOEC表示。 注：单位为毫克有效成分每干克案啡（mga kg桑啡。 3. 3 C bserved effect concentration 在一定暴露期 寸家蚕无明显影响的供试物浓度，即 LOEC的供试物浓 度，用NOEC表示 注：单位为毫克有效成分 每千克菜 kg菜叶） 3. 4 供试物 testsubstance 试验中需要测试的物质。 3.5 发育历期developmentalduration 家蚕从孵化到成为熟蚕的时间，包括5个龄期，每一龄期为起蚕到眠蚕的时间。 3. 6 结茧率percentageof cocooning 结茧家蚕数占饲养家蚕总数的百分率。 注：结茧以形成茧层为准，只吐浮丝或结平板董个体不做结董蚕统计。 3.7 茧层量 cocoonshellweight 家蚕所结茧茧层的重量。 1 NY/T3087—2017 3. 8 全茧量totalcocoonweight 层、蛹体和蜕皮的总重量。 3. 9 茧层率 percentageof cocoon shell 董层量占光董全董量的百分率。 3. 10 化蛹率percentageofpupation 化蛳家蚕数占结茧家蚕数的百分率。 3. 11 死笼率percentageofdeadwormcocoon 死笼茧占结茧总数的百分率。 注：凡茧内的死蚕、死、病蚕、病蛹、半蜕皮蛹（包住胸部或尾部2个以上环节）、不蜕皮、尾部3个环节呈黑色的 和虽然健康但未化蛹的毛脚蚕，均记为死笼茧。 4试验概述 将不同浓度的药液喷于桑叶上以供蚕食用。以二龄起蚕饲喂处理桑叶，48h后转至干净培养装置 中并饲喂无毒桑叶至熟蚕期，测定和观察农药对家蚕产茧量及部分生物学指标的影响，并确定对家蚕茧 层量影响的无可观察效应浓度（NOEC)和最低可观察效应浓度（LOEC)。 5试验方法 5.1材料和条件 5.1.1供试生物 试验用家蚕（Bombyamori）品系采用春蕾X镇珠。以二龄起蚕为供试生物。 5.1.2供试物 农药原药或制剂。难溶于水的可用少量对家蚕毒性小的有机溶剂、乳化剂或分散剂等助溶。 5.1.3主要仪器设备 喷雾设备（需喷雾均匀，可定量计算）； 人工气候室； 通风式昆虫毒性试验培养装置（参见附录A)； 通风泵； 分析天平（精确到0.0001g）； 移液器。 5.1.4试验条件 5.1.4.1温度 1龄～2龄家蚕饲养的最适温度应为（27土1)℃，试验期间每增长一龄，最适温度应降低1℃，直到 上族结茧，族中温度应为（24土1)℃。 5.1.4.2湿度 试验期间相对湿度应为70%～85%，族中相对湿度应为60%～75%。 5.1.4.3光照 光照周期（光暗比)应为16h：8h，光照强度应为10001x～30001x。 5.2试验操作 2 NY/T3087—2017 5.2.1预试验 5.2.1.1浓度组设置 参考家蚕急性毒性试验得出的LCso值，以较大的间距设置4个～5个浓度组，并设空白对照。供试 物使用溶剂助溶时，还需设溶剂对照。对照组和每浓度处理组均设2个重复，每重复20头二龄起蚕。 按照GB/T31270.11规定的试验方法获得LCso值，或按照附录B中规定的方法获得LCso值。当 使用按照GB/T31270.11方法得出的LCso时，须用桑叶浸渍修正系数对LCso进行修正后，方可用于本 标准中试验浓度设定。修正系数默认值为0.46L/kg桑叶。 5.2.1.2染毒 片叶重范围为2.0g～3.0g。采用喷雾设备将试验药液喷于桑叶的背面。喷药前称量桑叶的重量，喷 药后立即再次称量桑叶重量，以测定每片桑叶上喷施供试物的准确量。待桑叶晾干后，将叶子的叶柄插 入装有10%琼脂培养基的离心管中，以保持叶片新鲜，每个装置2片叶。 选择健康、大小一致的二龄起蚕，随机移人通风式昆虫毒性试验培养装置中的桑叶上。48h后，将 家蚕转移至干净饲养装置中并饲喂无毒桑叶至熟蚕期。待家蚕发育成熟后，及时捉蚕上族，整个试验饲 养至结茧、化蛹为止。 5.2.1.3观察与记录 试验过程中，观察并记录家蚕各龄期的发育历期、眠蚕体重及其他异常行为。上族后第8d采董削 茧测定全茧量、茧层量、蛹重，雌雄分别进行统计。 5.2.1.4数据处理 以茧层量为主要评价指标，采用方差分析对各个浓度处理组与对照组间的差异进行显著性分析，求 出供试物对家蚕茧层量与对照有显著差异的最低浓度(LOEC)和茧层量与对照无显著差异的最高浓度 (NOEC)。 5.2.2正式试验 5.2.2.1浓度组设置 根据预试验确定的浓度范围按一定比例间距（几何级差应控制在3.2以内）设置5个～7个浓度 组，并设空白对照。供试物使用溶剂助溶时，还需设溶剂对照。对照组和每浓度处理组均设3个重复， 每重复20头二龄起蚕。 5.2.2.2染毒 按5.2.1.2的规定进行。 5.2.2.3观察与记录 按5.2.1.3的规定进行。同时统计良蛹数量，计算茧层率、死笼率和化蛹率。 5.2.2.4数据处理 以董层量为主要评价指标，采用方差分析对各个浓度处理组与对照组间的差异进行显著性分析，最 终获得供试物对家蚕层量影响的NOEC和LOEC，并获得供试物对家蚕的发育历期、眠蚕体重、蛹 重、茧层率、结萤率、化蛹率、死笼率等生物学指标影响情况。 5.2.3限度试验 参考家蚕急性毒性试验得出的LCso值，设置1/10LCso为上限浓度，进行限度试验。当限度试验证 明供试物对家蚕茧层量影响的NOEC比限度试验浓度高，可判定供试物对家蚕茧层量无显著影响，则 无需继续进行慢性毒性试验。限度试验中，对照组和处理组至少设置6个重复。 5.3质量控制 质量控制条件包括： 试验结束时，对照组死亡率不超过20%； NY/T3087—2017 试验中所设置的浓度中应至少包括与对照组有显著差异和无显著差异的浓度各1个。 试验报告 试验报告应至少包括下列内容： a) 供试物的信息，包括： 1） 供试物的物理状态及相关理化特性，包括通用名、化学名称、结构式、水溶解度等； 2) 化学鉴定数据（如CAS号）、纯度（杂质）。 b) 供试生物：品系名称、来源、大小及饲养情况 c) 试验条件，包括： 1) 试验期间的环境温度、湿度和光照， 2) 采用的试验方法 PUBL 3) 元降时间）、试验容器（大小）、试验 4) 母液和试验药 方法包括任 5) 试验持 间。 d) 结果，包括 1) 龄期的发育历期、眠蚕体重，结重 居全董量 重 董层率、结茧率、 化蛳率 、死笼率 2) 董 要量影响的NOECLOEC并给出所采用的统计分析方法； 对 3) 组家蚕是否出现死一及异常反应， 4) 现察 到内供 式物对家蚕慢性毒性效应，如受试家蚕的发育历期缩 吉茧率是否降 低等 5) 试验 质屋控 ICUL GRI NY/T3087—2017 附录A （资料性附录） 通风式昆虫毒性试验培养装置 玻璃材质通风暴露装置（见图A.1)，直径20cm，高15cm。装置连接一个小型空气泵用来保证空 气流通。试验时在装置的瓶底铺一层2mm～4mm的琼脂，用以减缓桑叶萎的速度。 单位为厘米 2 15 3 4 20 说明： 1- 一进气； 4——出气； 2- 玻璃盖； 5- 一处理桑叶。 3- 暴露装置； 图A.1 通风式昆虫毒性试验培养装置示意图 5