ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3064—2016 苹果品种轮纹病抗性鉴定技术规程 Technical code for evaluation of apple variety resistance to ring rot 2016-12-23 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3064—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种子管理局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院郑州果树研究所。 本标准主要起草人：周增强、侯珲、王丽、闫振立、古勤生、彭斌、张恒涛、吕中伟。 I NY/T 3064—2016 苹果品种轮纹病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了苹果品种轮纹病（Botryosphaeria dothidea）抗性鉴定技术规程的技术与评价 标准。 评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 苹果轮纹病 apple ring rot 由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）引起的苹果果实腐烂、枝干病瘤或溃疡的一种真菌性 病害。 2. 2 抗病性 Eresistance 植物所具有的能够抵抗病原物为害的特征或能力。 2. 3 抗病性评价 evaluation of resistance 依据特定的技术标准判别植物对特定病害的反应程度和抵抗水平的描述。 2. 4 致病性 pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主和引起病害的能力。 2. 5 人工接种artificial inoculation 适宜条件下，通过人工操作将病原物接种体接种于植物适宜感病部位并使之发病的过程。 2. 6 病情指数 disease index 全面考虑发病率与严重度两者的综合指标。 2. 7 校正病情指数 relative disease index 供试品种的实际病情指数与校正系数的乘积。 3 病原菌的培养 3.1培养病原菌的基本设备 恒温箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、可控温的温室（使温度保持在20℃～28℃之间）、微波炉、 电磁炉、培养皿、试管、镊子、酒精灯、脱脂棉等。 3.2苹果轮纹病病原菌的培养 3.2.1培养基 NY/T 3064—2016 苹果轮纹病病原菌（参见附录A)的培养采用PSA或PDA培养基。 3.2.2病原菌分离与纯化方法 3.2.2.1组织分离方法 选取发病植株枝干病组织，沿病健交界处切成边长4mm的方块，用0.5%次氯酸钠溶液消毒 1min～3min，随后用无菌水洗涤3次，再置于PSA或PDA培养基平皿上，于28℃下培养，长出菌落后 做单菌丝纯化培养。 3.2.2.2单孢分离 取病样或经人工培养长出病原菌孢 后，直接在解剖镜下挑取单孢，再按照3.2.2.1的方法 培养。 3.3病原菌检测 对纯化后的分离物进 形态 3.4病原物的保存 3.4.1低温保存 将苹果轮纹病 PDA试管斜面培养基 满斜面后，4℃～8℃保 存。 3.4.2常温保存 S 将苹果轮纹病菌菌株接 中于 PSA或 PDA试管斜面培养基上培养,待菌落 布满斜市 面后，再向试管中 加入石蜡油封闭， 存 ARCH ，置室温下 4 鉴定材料的种植与管理 U 4.1鉴定圃 4.1.1鉴定圃的选 择 CEI 选择具有较好 态代 4. 1.2鉴定圃的 设 C 人工接种鉴 T 苗或假植苗中进行 20℃~35℃. 湿度控制在80% 王苗圃 或田间成龄树等活体植株 将待 材料嫁接，待嫁 接材料长出新梢后接 接种区 区待检材料 每小区5株树， T 重复4次。 4.1.3对照品种 鉴定中选择一个感病品 种 感病品种选择高 或高抗枝干轮纹病且稳 定性好，选择标准为在正常年份接种后其病情指数达40.0或以 般可选用“长富2”、“新红 星”、“奥勒冈矮生”品种或本地区的感病品种 选择抗师 病、高抗类型，如“松本锦”或当地 抗病品种。 4.2鉴定圃种植与管理 苹果落叶后至萌芽前，按照常规方法栽植待检材料和对照品种，进行常规水肥、土壤等管理。 4. 3防治其他病虫害的要求 在试验期间，一般不使用杀菌剂。确需防治有害生物，要做好施药记录，记录药剂使用的种类、使用 剂量、使用时期及施药方法等。 5人工接种鉴定 5.1接种体 2 NY/T 3064—2016 5.1.1接种体来源与选择 -般从黄河故道和环渤海湾等不同生态区选择代表性的中等致病力菌株，特殊情况下可根据委托 单位的要求从保存的菌种库中选择最新菌株或经田间复壮的标准菌株制备， 5.1.2接种体活化与扩繁 接种前挑取保存的菌株，接种于PSA或PDA培养基平皿上,26℃～28℃下活化培养3d～5d。 再在PSA或PDA培养基平皿上培养，5d～7d后沿菌落边缘用直径5mm打孔器取菌饼供接种 使用。 5.2人工接种方法 5.2.1接种的时期 萌芽后45d～75d 5.2.2接种方法 当年生枝条 三长到 n时开 15cm以下开始，每枝条 上一般接种4 接利 相距 接种区 检材料与 对照品 种随机排列或顺序排 列，每小区5 株树 重复 时用75%乙醇溶液 接种 cm 区域表皮表面消毒， 待乙醇挥发 后取 迷备用菌饼接 对皮光 后用沾 指棉缚在菌饼上，立 即再缠封 将备用菌饼先放置 干沾有无菌水的小块脱 待对 枝条表面消毒后， 直接缠上 带菌的湿脱 脂棉，外面再用封口膜包扎保湿。 保湿5d 脱脂棉及接种体，做 好标记， 5.3发病调查 5.3.1 调查日 苹果自 落叶 5. 3. 2 病害 调查方 每个接种 点均 3.3的分级标准记录接种点 病情况 5.3.3 病害 标准 0级：无 1级：枝条 直径小于1 nm.数 5个以下； 3级：枝条接种 数量 在1mm或以上; 5级：枝条接 连片 交租金 邻正常部位增粗在 25 7级：枝条接种 部位病瘤聚集 美连片 交相 9级：枝条接种部位因病增粗50 ,病瘤明显连片 开裂 5.4发病结果统计方法 发病结果统计方法按式(1)和式 D X100： (1) 式中： D 发病率，单位为百分率（%）； Na 病点数，单位为个； N 调查总点数,单位为个。 Z(N;Xi) X= X100 (2) NX9 式中： 病情指数； NY/T 3064—2016 各级病点数,单位为个； 相对级数值，i=0,1,3,5,7,9； N 调查总点数，单位为个。 5.5结果的校正 不同接种时期或年份对发病有一定影响，为消除这种差别，引入校正系数（）和校正病情指数 (CDI)来修正。校正系数和校正病情指数分别按式(3)和式(4)计算。 50.0 (3) Xo 式中： 校正系数； Xo 对照病情指数。 CDI=X X, (4) 式中: CDI 校正病情指数； a 校正系数； X, 被鉴定品种病情指数。 6 抗病性评价 6.1抗性类别划分 人工接种抗性类别划分标准见表1。 表1苹果品种轮纹病抗性级别及类别划分标准 抗性类别 抗性级别 校正病情指数(CDI) 缩写 类别 1 CDI=0 1 免疫 3 0<CD≤10 R 抗 5 10.1<CD≤30 MR 中抗 7 30.1<CD≤40 s 感 9 CDI≥40. 1 HS 高感 6.2重复鉴定 抗性评价一般重复两年，以两年试验结果中校正病情指数较高值划分抗性级别。 6.3鉴定有效性判别 感病品种对照或任一鉴定品种的病情指数达到40.0或以上，抗性级别达到7级～9级，该批次鉴 定有效。 7鉴定结果报告 人工接种鉴定一般以鉴定品种对特定生态区域内菌株的反应出具鉴定结果报告单。鉴定报告单- 般以单个品种出具，如集中批量送样的，也可以对多份品种出具一个报告单。鉴定结果原始记录表见表 2，鉴定结果报告单格式见表3。 4 NY/T 3064—2016 表 2苹果品种轮纹病抗性鉴定结果原始记录表 鉴定地点： 接种时间： 调查时间： 病情病级 病情指数 编号 品种名称 校正病情 重复区号 (X) 指数(CDI) I Ⅱ N I Ⅱ IV II IV II IV Ⅱ IV 检测人： 校核人： 审核人： 年 月 日 月 日 年 月 日 5