ICS 65.020 B 32 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3030—2016 棉花中水溶性总糖含量的测定 葱酮比色法 Determination of total water-soluble sugars in cotton- anthrone colorimetry 2016-12-23 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 3030—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院棉花研究所、安徽中棉种业长江有限责任公司、新疆图木舒克质 量技术监督局。 本标准主要起草人：王延琴、杨伟华、唐淑荣、周大 、匡猛、马磊、蔡忠民、王星军、孟俊婷、方丹、韦 京艳、徐双娇、周关印。 NY/T 3030—2016 棉花中水溶性总糖含量的测定 葱酮比色法 1 范围 本标准规定了棉花中水溶性总糖含量测定的葱酮比色法。 本标准适用于棉花中水溶性总糖含量的测定。 本标准方法的线性范围为0mg/mL～0.1 mg/mL。 本标准方法的定量限为0.003mg/mL。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6097棉纤维试验取样方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3原理 棉花中的水溶性糖在浓硫酸存在下与葱酮发生显色反应，产生蓝绿色化合物，在波长575nm处测 定吸光度，吸光度值与总糖含量成正比，根据标准工作曲线所得的回归方程，计算出糖含量。 4试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的三级水。 4.1 硫酸(H²SO4):密度1.84g/mL。 4.2葡萄糖标准品（CH12O）：含量大于99.5% 4.3葡萄糖标准溶液Lo(C,H12O）=1mg/mL]:称取葡萄糖标准品0.01g（精确到0.1mg）,加少量水 溶解并稀释定容至100mL。 4.4硫酸一葱酮指示剂：称取0.2g葱酮（精确到1mg）,加100mL浓硫酸溶解，现用现配。 5仪器 5.1分光光度计。 5.2分析天平：感量±0.0001g、感量土0.001g 5.3恒温水浴振荡器。 6取样 6.1取样步骤 6.1.1按GB/T6097的规定抽取实验室样品，风干，放入聚乙烯塑料包装袋内密封。 6.1.2从实验室样品中随机抽取不少于150g的试验样品，将其中的非棉纤维去除，充分混匀。 7试样的制备 称取1g试样（精确到0.001g）3份，分别置于100mL具塞容器中，加水50mL，用玻璃棒反复挤压 至棉纤维完全浸湿，盖紧容器盖，沸水浴中震荡加热60min，取出冷却后加0.1g活性炭，摇匀，脱色 1 NY/T 3030—2016 30min后过滤，加水定容至50mL备用。 8分析步骤 8.1标准曲线的制订 分别吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL葡萄糖标准溶液（4.3)至50mL 容量瓶中用水定容至刻度，摇匀。浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、 80μg/mL、100μg/mL。准确吸取上述标准葡萄糖溶液1mL加入10mL具塞比色管中，每一试管加人 5mL硫酸一葱酮指试剂（4.4)，盖盖震荡，使之完全混合 在沸水中震荡加热10min，取出后于自来水 中冷却。20min后，在分光光度计上，以含葡萄糖0mL的试管作对照.在波长575nm处测定吸光度 值。以葡萄糖含量为横坐标、吸光度值为纵坐标 制标准曲线，或计算回归方程。 可溶性总糖以葡萄糖(Cs (1) 式中： 可溶性总糖浓度 A- 吸光度值 RES 8.2测定 准确吸取1mL试 0 mL具塞试管中,加 5mL硫 葱酮指讨 盖震荡 使之完全 混合。在沸水浴 10m 在自来水中冷却至室 在波长52 处测 定 液的吸光 ARCH 度。根据标准曲 计算相应的糖浓度 结果计算 含糖量按式（2） ......(2) 式中： M 试样含 试样质 m 取3次测定结果的算 内值为测定结果,计算结果保留小数点后两位 10精密度 本标准方法的重复性标准偏差(s)为 10.04. 2 NY/T 3030—2016 30min后过滤，加水定容至50mL备用。 8分析步骤 8.1标准曲线的制订 分别吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL葡萄糖标准溶液（4.3)至50mL 容量瓶中用水定容至刻度，摇匀。浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、 80μg/mL、100μg/mL。准确吸取上述标准葡萄糖溶液1mL加入10mL具塞比色管中，每一试管加人 5mL硫酸一葱酮指试剂（4.4)，盖盖震荡，使之完全混合 在沸水中震荡加热10min，取出后于自来水 中冷却。20min后，在分光光度计上，以含葡萄糖0mL的试管作对照.在波长575nm处测定吸光度 值。以葡萄糖含量为横坐标、吸光度值为纵坐标 制标准曲线，或计算回归方程。 可溶性总糖以葡萄糖(Cs (1) 式中： 可溶性总糖浓度 A- 吸光度值 RES 8.2测定 准确吸取1mL试 0 mL具塞试管中,加 5mL硫 葱酮指讨 盖震荡 使之完全 混合。在沸水浴 10m 在自来水中冷却至室 在波长52 处测 定 液的吸光 ARCH 度。根据标准曲 计算相应的糖浓度 结果计算 含糖量按式（2） ......(2) 式中： M 试样含 试样质 m 取3次测定结果的算 内值为测定结果,计算结果保留小数点后两位 10精密度 本标准方法的重复性标准偏差(s)为 10.04. 2 NY/T 3030—2016 30min后过滤，加水定容至50mL备用。 8分析步骤 8.1标准曲线的制订 分别吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL葡萄糖标准溶液（4.3)至50mL 容量瓶中用水定容至刻度，摇匀。浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、 80μg/mL、100μg/mL。准确吸取上述标准葡萄糖溶液1mL加入10mL具塞比色管中，每一试管加人 5mL硫酸一葱酮指试剂（4.4)，盖盖震荡，使之完全混合 在沸水中震荡加热10min，取出后于自来水 中冷却。20min后，在分光光度计上，以含葡萄糖0mL的试管作对照.在波长575nm处测定吸光度 值。以葡萄糖含量为横坐标、吸光度值为纵坐标 制标准曲线，或计算回归方程。 可溶性总糖以葡萄糖(Cs (1) 式中： 可溶性总糖浓度 A- 吸光度值 RES 8.2测定 准确吸取1mL试 0 mL具塞试管中,加 5mL硫 葱酮指讨 盖震荡 使之完全 混合。在沸水浴 10m 在自来水中冷却至室 在波长52 处测 定 液的吸光 ARCH 度。根据标准曲 计算相应的糖浓度 结果计算 含糖量按式（2） ......(2) 式中： M 试样含 试样质 m 取3次测定结果的算 内值为测定结果,计算结果保留小数点后两位 10精密度 本标准方法的重复性标准偏差(s)为 10.04. 2 NY/T 3030—2016 30min后过滤，加水定容至50mL备用。 8分析步骤 8.1标准曲线的制订 分别吸取0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL葡萄糖标准溶液（4.3)至50mL 容量瓶中用水定容至刻度，摇匀。浓度分别为0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、 80μg/mL、100μg/mL。准确吸取上述标准葡萄糖溶液1mL加入10mL具塞比色管中，每一试管加人 5mL硫酸一葱酮指试剂（4.4)，盖盖震荡，使之完全混合 在沸水中震荡加热10min，取出后于自来水 中冷却。20min后，在分光光度计上，以含葡萄糖0mL的试管作对照.在波长575nm处测定吸光度 值。以葡萄糖含量为横坐标、吸光度值为纵坐标 制标准曲线，或计算回归方程。 可溶性总糖以葡萄糖(Cs (1) 式中： 可溶性总糖浓度 A- 吸光度值 RES 8.2测定 准确吸取1mL试 0 mL具塞试管中,加 5mL硫 葱酮指讨 盖震荡 使之完全 混合。在沸水浴 10m 在自来水中冷却至室 在波长52 处测 定 液的吸光 ARCH 度。根据标准曲 计算相应的糖浓度 结果计算 含糖量按式（2） ......(2) 式中： M 试样含 试样质 m 取3次测定结果的算 内值为测定结果,计算结果保留小数点后两位 10精密度 本标准方法的重复性标准偏差(s)为 10.04. 2