ICS 65.120 NY B 46 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2897—2016 饲料中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的测定 高效液相色谱法 Determination of β-apo-8'-carotenal in feeds- High performance liquid chromatography 2016-05-23 发布 2016-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2897—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。 本标准起草单位：华中农业大学、广州汇标检测技术中心、广州立达尔生物科技有限公司、帝斯曼 (中国)有限公司。 本标准主要起草人：张妮娅、齐德生、陈雷、高思。 NY/T 2897—2016 饲料中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中β-阿朴-8°-胡萝卜素醛的高效液相色谱测定方法， 本标准适用于添加剂预混合饲料、浓缩饲料及配合饲料中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的测定。本标准 的方法检出限为 0. 6 mg/ kg,定量限为 2. 0 mg/ kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样方法 GB/T20195动物饲料样品的制备 3原理 试样中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛经甲醇、正已烷和乙酸乙酯提取后，在氮气保护下浓缩，用流动相重 溶，注人高效液相色谱仪中进行分离，紫外检测器检测，外标法测定样品中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛含量。 4试剂和材料 除特别说明外，所有试剂均为分析纯试剂，试验用水符合GB/T6682中三级用水规定，色谱用水符 合GB/T6682中一级用水规定。 4. 1 甲醇。 4.2饱和氯化钠溶液：将氯化钠逐步加人100mL水中,搅拌,直至氯化钠不再溶解，上清液即为饱和氯 化钠溶液。 4.3 正已烷。 4. 4 乙酸乙酯。 4.5 冰乙酸。 4.6 无水乙醇。 4. 7 甲基叔丁基醚。 4. 8 乙酸溶液(0. 05%):取 0. 5 mL 冰乙酸于 1 L容量瓶中,用水定容。 4.9提取剂:将甲醇、乙酸乙酯、正已烷按照体积比为1：1：1混合均匀。 4.10甲基叔丁基醚一甲醇(1十1)溶液：将甲基叔丁基醚和甲醇按照体积比为1：1混合均匀。 4.11 β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准品(含量大于 96%)。 4.12β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准储备液：称取β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准品 0.05g(精确至 0.000 1 g）,用甲基叔丁基醚一甲醇溶液（4.10)溶解，转人100mL棕色容量瓶中，定容至刻度，配制成浓度为 500mg/L的β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准储备液。4℃下避光保存,有效期为 6个月。 醚-甲醇溶液(4. 10)逐级稀释成浓度为 0. 5 μg/ mL、1. 0 μg/ mL、2. 0 μg/ ml、4. 0 μg/ mL、8. 0 μg/ mL 的 系列标准工作液。 NY/T2897—2016 5仪器 5.1分析天平：感量0.0001g。 5.2高效液相色谱仪：配有紫外检测器 5.3氮吹仪。 5.40.45μm微孔滤膜。 试样的采集与制备 按GB/T14699.1采集有代表性的样品，用四分法缩减取样。 按 GB/T20195制备样品，粉碎过 0.45mm孔径的试验筛，混合均 7 分析步骤 7.1试样溶液的制备 称取试样0.5g 中，再 手分别加人饱和氯 个取 化钠溶液（4.2)2.0 mL 酸溶液（4 用提取剂 次 每次15mL，将 上层萃取液合并后 无水乙 F30℃下氮气吹干 入 厂基 醚-甲醇溶液 (4. 10)4. 0 mL(V 刃，通过0.45 微孔滤膜过滤，制成试样溶液 作均 在避光通风 柜内进行。试样溶液避光冷 藏，24h内完成上机测定 7.2测定 7.2.1色谱参 色谱柱：C 长 mm. 流动相：A 甲醇、 062 三乙胺混 合溶液（90十6 L 梯度洗脱程序 按表1 执行； 进样量：20g GRIC 流速：1mL/m 检测波长：462 柱温：35℃。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间，min A, B, % 0 93.5 6. 5 34 93.5 6. 5 34.1 100 50 100 50.1 93.5 6. 5 7.2.2标准工作曲线的绘制 分别取20μL不同浓度的β-阿朴-8-胡萝卜素醛标准工作液（4.13）上机测定。以浓度（c)为横坐 标，峰面积（A)为纵坐标，绘制标准工作曲线，得出回归方程。 β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准溶液的色谱图参见附录A。 7.2.3样品测定 取20uL试样溶液（7.1)在高效液相色谱仪上测定峰面积，根据回归方程（7.2.2)计算试样溶液中 β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的浓度(C。）。 2 NY/T 2897—2016 结果计算 8 饲料中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的含量X,以质量分数[毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。 Co X Vi X (1) m 式中: m 试样质量，单位为克(g)； Co 由标准工作曲线查得的试样溶液中β-阿朴-8'-胡萝卜素醛的浓度，单位为毫克每升（mg/ L); Vi一一用于溶解残余物的甲基叔丁基醚 醇溶液的体积（7.1 .单位为毫升（mL）。 位小数 9 重复性 ARD 在重复性条件下 立测 与这两个测定 直的绝 对差值，在测定结果小 于或等于50 mg/ 该 购值的15%；测定结果 于该平均值的10%。 NY/T 2897—2016 附 录 A （资料性附录） β-阿朴-8°-胡萝卜素醛标准溶液高效液相色谱图 β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准溶液(7.2μg/mL)的高效液相色谱图，见图A.1。 mV j检测器A：462nm β-阿朴-8°-胡萝卜素醛 250- 37.0 37.5 38.0 38.5 39.0 39.5 40.0 40.5 41.0 41.5 42.0 42.5 43.0 min 图A.1 β-阿朴-8°-胡萝卜素醛标准溶液(7.2μg/mL）高效液相色谱图 4 NY/T 2897—2016 附 录 A （资料性附录） β-阿朴-8°-胡萝卜素醛标准溶液高效液相色谱图 β-阿朴-8'-胡萝卜素醛标准溶液(7.2μg/mL)的高效液相色谱图，见图A.1。 mV j检测器A：462nm β-阿朴-8°-胡萝卜素醛 250- 37.0 37.5 38.0 38.5 39.0 39.5 40.0 40.5 41.0 41.5 42.0 42.5 43.0 min 图A.1 β-阿朴-8°-胡萝卜素醛标准溶液(7.2μg/mL）高效液相色谱图 4