ICS 65.100.01 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2883—2016 农药登记用日本血吸虫尾坳防护剂 药效试验方法及评价 Efficacy test methods and evaluation of protective agent against Schistosoma japonicum cerariae for pesticide registration 2016-05-23 发布 2016-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 2883—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：农业部农药检定所、湖南省血吸虫病防治所。 本标准主要起草人：魏望远、朱春雨、易平、杨峻、张楠、曹艳、聂东兴。 人 NY/T2883—2016 农药登记用日本血吸虫尾坳防护剂药效试验方法及评价 1 范围 本标准规定了日本血吸虫（Schistosoma japonicum)尾坳防护剂（以下简称防护剂)室内和模拟现场 药效试验方法和药效评价指标。 本标准适用于农药登记用尾坳防护剂的效果评价。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 日本血吸虫尾 Schistosoma japonicum cercaria 日本血吸虫生活史的一个阶段，由体部和尾部组成；尾蜘感染终宿主后发育成熟为日本血吸虫 成虫。 2. 2 感染性钉螺 infected Oncomelania snail 能逸出日本血吸虫尾蜘的钉螺。 2. 3 虫负荷 worm burden 小鼠体内感染日本血吸虫成虫的数量。 3仪器设备 3. 1 体式显微镜 放大倍数不低于 10 倍。 3.2 塑料储物箱内径长 40 cm,宽 30 cm,高 25 cm(或同体积容器),可容纳水体 30 L。 3.3铁丝笼用铁丝制作成长方体网格型鼠笼,鼠笼规格为 35 cm×8 cm×8cm,隔成5 格,周边网格 孔径0.5 cm。鼠笼的底四角有可伸缩调节的脚柱,测定鼠笼可固定于塑料储物箱水面 2 cm处。 4试剂与材料 4.1生物试材 4.1.1日本血吸虫尾蜘 将 30只～50只日本血吸虫感染性钉螺,放人 100mL的烧杯中，上盖尼龙纱 网，倒入25℃脱氯水至淹没纱网，在白炽灯下逸坳1h～2h，获得尾蜘2000条左右用于室内防蜘感染 实验。 4.1.2实验小鼠选取体重(20±2)g小鼠,雌雄各半,常规饲养1d以上。 4.1.3感染性钉螺感染性钉螺可逸出尾蜘100条/只～500条/只。在钉螺饲养盘中（25土1)℃饲养 1d以上用于模拟现场防蜘感染实验。 4.2 脱毛膏 4. 3 试验药剂 制剂。 4. 4 空白对照 脱氯自来水。 5 试验条件与方法 5.1试验条件 ：温度为（25±1)℃，相对湿度为（60士5）%。 NY/T 2883—2016 5.1.1尾蜘活性鉴定方法 试验时将尾坳置于解剖镜下观察，用解剖针轻刺尾蜘，尾坳活动良好者为活坳，不活动或有软体肿 胀、断尾、透明化的为死亡尾蜘或丧失入侵能力的尾蜘。 5.1.2小鼠解剖法 用镊子将处死后的小鼠腹部皮肤提起，用剪刀剪开腹壁，打开腹腔，观察小鼠肝脏有无日本血吸虫 虫卵沉着引起的肉芽肿，并取肉芽肿肝组织1g,在体式显微镜下观察血吸虫卵；分离肝门静脉、肠系膜 静脉观察有无血吸虫成虫。若发现成虫,则将内脏取出放人平血中，加入生理盐水，分离检出所有血吸 虫成虫，观察并记录单雌虫数、单雄虫数和雌雄合抱虫数 5.2室内防感染试验 设待测药剂组和空白对照组，每组试验小鼠10只，雌雄各半 将试验小 鼠腹部用脱毛剂去毛2cm² 后，在小鼠脱毛部位用无水乙醇清洗 再用脱氯水冲洗3次关用干净卫生纸 次中 吸干。将小鼠固定于木 板架上，试验组按厂家推 荐剂量涂抹待药剂 玻片上，40条/（片·鼠 ），置鼠脱无部位分 感染小鼠 min) 手小鼠移人 饲养盒内 内，分组常规饲养， 同法感染对照组鼠， 后按鼠解 算感 染下降率和虫负 RES 荷下降率。重复三 5.3模拟现场防！ 防蜘感染试验 设待测药剂组和 照组各 组，每组10只，雌雄各半。 将每组小鼠四 笔和鼠体1/2以下部 位用脱毛膏脱毛后， 次。在待测组小 )℃脱氯水 30L，于鼠笼两 投感 分别将 2组鼠笼固定于感 侧各 2 cm处, 浸泡于水体,连续感染 4 h后,将小鼠移入饲养盒内分 组常规饲养，35d后 使小鼠胸、腹部、 肢和尾 4 按常规解部法解剖 女集血叻 及虫虫体,计数检获成虫数，计算感染下 负荷下降王。 重复三次。 6 数据统计与分析 感染下降率按式 式中： 感染下 为百分率（%）； C 对照组感 、鼠数量，单位为只 T 实验组感染 吸虫的小鼠数量，单位为只 N, 实际观察的小鼠 总装 单位为只 平均虫负荷按式(2)计算。 (2) 式中: N 平均虫负荷； ZK; 表示观察组收集日本血吸虫总虫数，单位为只； ZN; 表示观察组小鼠总数，单位为只。 虫负荷下降率按式(3)计算。 Po-; = (no -n;)/no X 100 · (3) 式中： Po-i- 虫负荷下降率，单位为百分率（%)； 2 NY/T 2883—2016 no 观察期内空白对照组平均虫负荷； n; 观察期内用药组平均虫负荷。 药效评价指标 测试药物推荐应用剂量各试验结果均达到评价指标的为合格产品（见表1）。 表 1 药效评价指标 方 合格判定指标 感染下降率≥85% 室内防蜘感染试验 虫负荷下降率≥95% 4h感染下降率≥85% 模拟现场防蚜感染试验 4h虫负荷下降率≥95% 结果与报告编写 根据感染下降率、虫负荷下降率统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。 NY/T 2883—2016 no 观察期内空白对照组平均虫负荷； n; 观察期内用药组平均虫负荷。 药效评价指标 测试药物推荐应用剂量各试验结果均达到评价指标的为合格产品（见表1）。 表 1 药效评价指标 方 合格判定指标 感染下降率≥85% 室内防蜘感染试验 虫负荷下降率≥95% 4h感染下降率≥85% 模拟现场防蚜感染试验 4h虫负荷下降率≥95% 结果与报告编写 根据感染下降率、虫负荷下降率统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。 NY/T 2883—2016 no 观察期内空白对照组平均虫负荷； n; 观察期内用药组平均虫负荷。 药效评价指标 测试药物推荐应用剂量各试验结果均达到评价指标的为合格产品（见表1）。 表 1 药效评价指标 方 合格判定指标 感染下降率≥85% 室内防蜘感染试验 虫负荷下降率≥95% 4h感染下降率≥85% 模拟现场防蚜感染试验 4h虫负荷下降率≥95% 结果与报告编写 根据感染下降率、虫负荷下降率统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。