ICS 65.100.01 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1859.8—2016 农药抗性风险评估 第8部分：霜霉病菌对杀菌剂抗药性 风险评估 Guidelines on the risk assessment for pesticide resistance- Part 8:The risk assessment for several downy mildew genera(Peronosporaceae ) resistance to fungicides 2016-05-23 发布 2016-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1859.8—2016 前言 NY/T1859《农药抗性风险评估》分为8个部分： 第1部分：总则； 第2部分：卵菌对杀菌剂抗药性风险评估； 第3部分：蚜虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性风险评估； 第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估； 第5部分：十字花科蔬菜小菜蛾抗药性风险评估； 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估； 第7部分：抑制乙酰辅酶A羧化酶除草剂抗性风险评估； -第8部分：霜霉病菌对杀菌剂抗药性风险评估。 本部分是《农药抗性风险评估》的第8部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种植业管理司提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所、中国农业大学 本部分主要起草人：刘西莉、陈立萍、杨峻、袁善奎、朱春雨、张楠、何静。 I NY/T 1859.8—2016 农药抗性风险评估 第8部分：霜霉病菌对杀菌剂抗药性风险评估 1 范围 本部分规定了霜霉病菌对杀菌剂抗药性风险评估的基本要求、方法及抗药性风险的管理。 本部分适用于卵菌门霜霉目霜霉科霜霉属、假霜霉属、盘梗霉属、单轴霉属、指梗霉属等专性寄生病 原菌对具有直接作用方式的杀菌剂抗药性风险评估的农药登记试验。其他试验可参照本部分执行。 2规范性引用文件 下列文件对于本部分的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修订单)适用于本文件。 NY/T1156.3一2006农药室内生物测定试验准则抑制黄瓜霜霉病菌试验平血叶片法 NY/T 1156.7一2006 农药室内生物测定试验准则防治黄瓜霜霉病试验盆栽法 NY/T1667（所有部分）农药登记管理术语 3 术语和定义 NY/T1667（所有部分）界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 药剂驯化 fungicide adaption 用杀菌药剂亚致死剂量连续对病原菌处理，使其对处理药剂忍受能力增加的过程 3. 2 紫外诱变 UV-mutagenesis 用紫外线照射病原菌的菌丝、孢子囊或游动孢子，诱发病原菌发生与抗药性相关的突变。 3. 3 抗药性突变频率fungicide resistance mutation frequency 指供试靶标病原菌群体中发生与抗药性相关突变的菌株数所占的百分比例。 3. 4 最小抑制浓度 minimum inhibitory concentration(MIC) 可完全抑制病原菌孢子萌发或菌丝生长的最低药剂浓度。 3. 5 抗性指数resistancefactor 抗药性菌株对该药剂的敏感性参数（一般以EC5o或MIC表示)与其亲本或野生敏感菌株敏感性参 数或与敏感基线的平均EC5o或MIC的比值。 3. 6 适合度fitness 病原菌在存活、生长、致病和繁殖等方面的能力。 3. 7 交互抗药性 cross-resistance NY/T 1859. 8—2016 病原菌对某一杀菌剂产生抗药性时，也对其他未接触过的杀菌剂表现抗药性的现象，也称正交互抗 药性。 3.8 负交互抗药性negative cross-resistance 病原菌对一种杀菌剂产生抗药性时，则对其他未接触过的杀菌剂表现为更加敏感的现象。 4抗药性风险评估 4.1抗药性风险的影响因子 4.1.1药剂 多作用位点、非选择性杀菌剂如百菌清、代森锰锌等在理论上属于低抗性风险的药剂；单作用位点、 选择性强的杀菌剂如甲霜灵等苯基酰胺类的杀霸剂嘧菌酯等甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂理论上属于高 抗性风险药剂。用于霜霉病防治等其他杀菌剂， 如霜霉威等 氨基甲酸酯类 烯酰吗啉等羧酸酰胺类、霜 脲氰、氟吡菌胺等杀菌剂理论上 抗性风险的药剂 Q 4.1.2靶标生物 卵菌门霜霉目霜霉科中的霜霉属、假霜霉属、盘 霉属和指 多 属种的病原菌 電霉病的古巴 可侵染植物，导致霜霉病和谷 白发病的！ 主要包括引起黄瓜 畏霜霉（Pseu- doperonospora cubens 霜霉病的莴 苣盘梗霉（Bremia 引起白菜霜霉病和萝卜霜霉病的寄生霜霉（Peron oaras itica）引起 大葱霜霉病的葱霜霉(Pro nospora destructor ）引起大豆霜霉病的东北霜霉（Pe man-schuri- ca）、引起首霜霉 霉（Sclerospo ra graminicola 间的再 侵染主要以气 流传播。国际杀菌 剂抗药收 行动委员会（Fungicide sistance hittee FRA 将病菌繁殖 周期较短，再侵染频 繁的古 假霜霉（Pseudo ben nopara vitico la)等归为高抗药 风险的 4.1.3农事操作及 态环境风险 大面积种植单 惑病品 电作 用作用机 相同的杀菌剂，以及连 态环境条件等，增加药剂选择压力和加重 施药方法和耕 作栽培措施等均会增加抗 4.2抗性风险评估内容 4.2.1敏感基线的建立 从未使用过某种药剂及其相同作用机理药剂的多个 共试菌株（≥60株）。按照 NY/T1156.3—2006中的平血叶 或NY/T1156.7—2006中的 法等准则方法测定其对该药剂 的敏感性（ECso值或MIC值）。如果供试菌株敏 ，则这些菌株可视为野生敏感菌株，其 对药剂的敏感性(ECso值或MIC值)的平均值可作为靶标菌对该药剂敏感基线的ECso或MIC值参数。 4.2.2药剂特性及交互抗性 明确待评估药剂所属类型、作用方式及其活性和持效期；调查该药剂(或同类药剂)在当地使用的历 史、使用频率；同类药剂是否有抗药性的现象；当地是否采取了抗药性治理措施。参考以上调查结果，并 依据对敏感菌株和抗药性菌株毒力测定结果，分析该药剂是否与生产上常用药剂之间具有交互抗药性 或负交互抗药性。 4.2.3靶标病原菌产生抗药性的潜能 采用紫外诱变、药剂驯化的方法在室内进行抗药性菌株的诱导。紫外诱变时以紫外光照射后孢子 囊或游动孢子致死率为70%～90%的照射剂量处理，以杀菌剂MIC剂量进行抗药性突变体筛选；药剂 2 NY/T 1859.8—2016 驯化时须先将健康作物叶片(或叶盘)在接近MIC浓度的药液中浸泡，之后将靶标菌孢子囊悬浮液接种 于带药叶片背面，培养数天,待其发病并产生孢子囊后,将孢子囊洗脱重新接种到用药液处理过的健康 叶片上，并逐渐提高药剂浓度。在含药浓度逐步提高的带药叶片上连续培养多代之后，将在含MIC药 剂浓度之上还能生长的菌体,确定为疑似突变体。在无药健康叶片上转接,继代培养3代后测定其对杀 菌剂的敏感性,抗药性生物学性状能够稳定遗传的菌株作为抗性菌株。靶标病原菌产生抗药性的潜能 以抗性突变频率和抗性指数表示。 抗药性突变频率 X按式(1)计算。 N (1) 式中： X Ni- 一筛选获 N2 - 一用于 标病原菌群体数量 G 抗性指数 Ei RF (2) 式中: S RF 性指数 Ei 抗性菌株对该药剂的敏感性（ECco 。），单位为微克/毫升（ug） E2 升（μg） 4. 2. 4 抗药性菌株的适合 合度测定 测定靶标 示病原菌 为孢子囊和游动孢子产生能力、休止孢萌发能力、 力和竞 力 等适合度相关的 生物学性状 标，比 亢药性菌株和敏感菌株（包） 果抗 性群体的适合度明显 低于敏感 （包括 本菌株)，则待评估药剂田间 更用 后靶标 为风险较低。如果抗性 群体的适合度提 接近或 成高于敏感群体（包括亲本菌株） 则待评估药剂具不 定的抗 亢性风险。如果抗性群 体的适合度 明 感群 菌株）待评 估药剂产生抗性 较高 4. 2.5 抗性 风险 级别分析 性、抗性遗传、药剂的活 性及其作用机制 病害特征等 药性的风险。 4. 2. 5. 1 高等抗性风险 如果药剂持效期长 作用位点单一 间有同类药剂使用的历史 标病原菌易于产生抗药性突变、 抗性指数很高，抗药性菌株适 度接近或高于敏感群体（包括亲 本菌株），且防治对象为气流和雨水传播 的多循环病害,则该药剂的田间使用风险 如抗药性由显性基因控制，则抗性风险级别为高等风 险。如抗药性由隐性基因控制,则抗性风险级别为中一高等风险。 4.2.5.2中等抗性风险 如果药剂作用位点单一、田间有同类药剂使用的历史、靶标菌易于产生抗药性突变、抗性指数低 中等、抗药性菌株适合度低于或接近敏感群体(包括亲本菌株）,则该药剂具有一定的田间使用风险。如 抗药性由显性基因控制,则抗性风险级别为中一高等风险。如抗药性由隐性基因控制,则抗性风险级别 为中等风险。 4.2.5.3低等抗性风险 如果药剂为多作用位点，田间没有同类药剂使用的历史、抗性菌株突变频率较低、抗性指数低、抗药 性菌株的适合度显著低于敏感群体亲本菌株，则该药剂的田间使用风险级别为低等风险 3 NY/T 1859.8—2016 5抗性风险管理 5.1抗性风险的可接受性 4.2.5要求确定抗性风险的级别后，要考虑抗性风险的可接受性。属于低等抗性风险级别的