ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1248.7-2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第7部分：镰孢茎腐病 Technical specification on evaluation of maize resistance to pests- Part 7 :Fusarium and gibberella stalk rot 2016-10-26 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 1248.7—2016 前 NY/T1248《玉米抗病虫性鉴定技术规范》拟分为13个部分： 第1部分：大斑病； 第2部分：小斑病； 第3部分：丝黑穗病； 第4部分：矮花叶病； 第5部分：玉米； 第6部分：腐霉茎腐病； 第7部分：镰孢茎腐病； 第8部分：镰孢穗腐病； 第9部分：纹枯病； 第10部分：弯孢叶斑病； 第11部分：灰斑病； 第12部分：瘤黑粉病； 第13部分：粗缩病。 本部分为NY/T1248的第7部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种子管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心、中国农业科学 院作物科学研究所、四川省农业科学院植物保护研究所、吉林省农业科学院植物保护研究所。 本部分主要起草人：石洁、孙世贤、王晓鸣、李晓、普齐鸣。 I NY/T 1248.7—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第7部分：镰孢茎腐病 1范围 本部分规定了玉米抗镰孢茎腐病鉴定技术方法和抗性评价标准。 本部分适用于栽培玉米(Zea mays L.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近 缘种对镰孢茎腐病抗性的田间鉴定和评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 镰孢茎腐病fusarium and gibberella stalk rot 由真菌中的镰孢菌（无性态，Fusarium spp.）/赤霉菌（有性态，Gibberella spp.）侵染所引起的以玉 米植株基部茎节茎髓组织分解为特征的玉米病害。该病害引起玉米植株茎节内部腐烂、叶片黄枯或青 枯、果穗下垂、籽粒灌浆不足和根系发生紫红色腐烂的症状， 3镰孢菌接种体制备 3.1病原菌分离 以常规组织分离法或单孢分离法从发病植株茎秆基部节位的发病茎髓组织中分离茎腐病致病镰孢 菌或赤霉菌。病原菌经形态学鉴定确认为镰孢菌（Fusarium spp.）或赤霉菌（Gibberella spp.）（参见附 录A)后,进行纯化培养和致病性测定。 3.2致病种鉴定 对用作抗病性鉴定接种体的病原菌应进行种的鉴定。鉴定采用形态学和分子鉴定的方法（参见附 录A),确定病原菌的种级地位。 3.3病原菌繁殖 在接种前需要进行病原菌的繁殖。常用繁殖方法为将在培养基上培养的病原菌接种于经高压灭菌 的玉米粒或其他谷粒扩大繁殖。培养7d10d后，菌丝布满玉米粒/谷粒，即可用于接种（参见附录 A）。可采用不同地点来源的多个镰孢菌/赤霉菌菌株分别繁殖后混合接种。 4抗病性鉴定圃 4.1鉴定圃设置 鉴定圃应具备良好的自然发病环境，能够进行自主灌溉，一经采用不应随意更换。 4.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列。在进行选育品种抗病性鉴定时，每30行鉴定材料设1组已知高 感对照材料。 4.3种植要求 鉴定材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整，以使植株发病期能够与适宜的气候条件 NY/T 1248.7—2016 （降雨与温度）相遇。 鉴定小区行长5.00m，行距0.60m或0.65m，条播或穴播，每行留苗25株～30株，低于25株时视 为该品种/材料鉴定无效。鉴定种质资源时，每份鉴定材料种植1行；鉴定选育品种时，每份材料种植2 行。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同 5 接种 5.1接种时期 接种时期为玉米大喇叭口期(V13)至抽雄初 熟类型品种宜在V10阶段接种。接种可全 天进行。 5.2接种方法 接种采用土壤接种法 cm~ cm），将病原菌培养物 20 g～30 g 接种在露出的 根系久 NDA 原 菌能够正常侵染玉米根系组 织并从内部向茎髓组 5.3接种前后的田间管理 鉴定接种前应 灌或在雨 种， 走遇干旱 行田间浇灌，鉴定圃 土壤相对湿度不 病害发生所需条件 6 病情调查 RAL 6.1 调查时间 在玉米进入乳 熟R 4)进行调查，同批次接种的材料应 天中完成调 6.2 调查方法 U 调查者以 吉至第三茎节 茎秆发生空、软或者 株。计数每份 材料的总株数和发病株数。 6.3病情分级 按式(1)计算各监 科的发 R (1) U 式中: 人 发病株率,单位 为百分季 Y 发病株数，单在 N- 调查总株数，单位 病情分级及相对应的植株发病株率描述见表1。 表1玉米对镰孢茎腐病抗性鉴定的病情级别划分 病情级别 描 述 1 发病株率 0%~5. 0% 3 发病株率5.1%~10.0% 5 发病株率10.1%~30.0% 7 发病株率30.1%~40.0% 9 发病株率40.1%~100% 7抗性评价 7. 1 鉴定有效性判别 2 NY/T 1248.7—2016 当设置的高感对照材料达到高感程度（9级），该批次鉴定视为有效。 7.2抗性评价标准 依据鉴定材料发病程度(病情级别)确定其抗性水平,划分标准见表2 表2玉米对镰孢茎腐抗性的评价标准 病情级别 抗 性 1 高度抗病Highlyresistant(高抗HR) 3 抗病Re 5 中度抗病Moderately resistant(中抗MR) 7 ceptible(感 9 7. 3 重复鉴定 鉴定材料者 7. 4 抗性评价 对初次 性以记载的最高病 依此结果对鉴定材 料进行抗性 S 8 鉴定结果 总表格 玉米抗镶 病鉴定结 年玉米抗镰孢茎腐病鉴定结果表 表3 编号 级别 抗性评价 注1:鉴定 注2:接种病 株编 注3:接种日其 鉴定技才 人（签字）： NY/T 1248. 7—2016 附录A （资料性附录） 玉米镰孢茎腐病病原菌 A.1学名和形态描述 A.1.1禾谷镰孢(无性态)/玉蜀黍赤霉菌(有性态) 无性态学名：Fusarium graminearum Schwabe 异名:Fusarium roseum Link 有性态学名：Gibberellar zeae（Schwein.)Petch 异名:Dothidea zeae(Schwein.)Schwein. Sphaeria zeae Schwein. 禾谷镰孢无性态特征：大型分生孢子呈镰刀状，有隔膜3个～7个，顶端钝圆或略微收缩，基部有明 显的足细胞,3隔～4隔的分生孢子大小为（25～40）μm×（2.5～4）μm，5隔～7隔的分生孢子大小为 （48～50）μm×（3～3.5）μm;小型分生孢子极少或无，无厚垣孢子。有性态特征：子囊壳卵圆状，直径 约140μm～250μm；子囊长棒状，（60～85）μm×（8～11）μm，内含8个子囊孢子，（19～24）μmX (3~4)μm。 A.1.2拟轮枝镰孢(无性态)/藤仓赤霉(有性态) 无性态学名:Fusarium verticillioides （Sacc.)Nirenberg 异名:Fusarium moniliforme Sheld. Oospora verticillioides Sacc. 有性态学名:Gibberella fujikuroi（Sawada)Wollew. 异名:Gibberella fujikuroi var. moniliformis(Wineland)Kuhlman Gibberella moniliformis Wineland Lisea fujikuroi Sawada 拟轮枝镰孢无性态特征：小型分生孢子念珠状串生，无色，单胞，（5～12）μm×（2～3）μm；大型分 生孢子较少，无色，镰刀状，略弯，两端尖，3分隔～5分隔，（15～60）μm×（2～5）μm。有性态特征：较少形 成，子囊壳球状，直径220μm～300μm；子囊长棒状，内含8个子囊孢子；子囊孢子大小（14～18）μm× (4.5~6) μm。 A.2镰孢菌/赤霉菌培养和保存 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potatodextroseagar,PDA)：马铃薯200g，葡萄糖20g琼脂18g～20g 水1000mL。此培养基用于病原菌的培养和保存,培养温度为25℃，保存温度为4℃。 A.3镰孢菌的扩大培养 玉米粒培养基：玉米粒浸泡12h,然后煮30min～40min,装入三角瓶或耐高温高压的聚丙烯塑料 麦粒培养基：浸泡麦粒至略涨，装人三角瓶中于121℃下灭菌1h,冷却后将在PDA上培养的病原 菌接入瓶中，25℃下培养。 4 NY/T 1248. 7—2016 A. 4 镰孢菌的分子鉴定 镰孢属和种的特异性分子检测：针对镰孢菌脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)中属和种 的特异性序列，用特异性引物进行扩增。镰孢属和种的特异性引物、扩增产物大小及扩增所需要的退火 温度见表A.1。 表A. 1 镰孢属、禾谷镰孢和拟轮枝镰孢的特异性引物 扩增片段 退火温度 检测真菌 引物 引物序列(5°-3') bp ℃ Fusarium spp. ItsF AACTCCCAAACCCCTGTGAACATA 431 89 ItsR TTTAACGGCGTGGCCGC F. graminearum Fg16NF ACAGATGACAAGATTCAGGCACA 280 57 Fg16NR TTCTTTGACATCTGTTCA