ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1248.12—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第12部分：瘤黑粉病 Technical specification on evaluation of maize resistance to pests- Part 12:Common smut 2016-10-26 发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 1248. 12—2016 前創言 NY/T1248《玉米抗病虫性鉴定技术规范》拟分为13个部分： 第1部分：大斑病； 第2部分：小斑病； 第3部分：丝黑穗病； 第4部分：矮花叶病； 第5部分：玉米； 第6部分:腐霉茎腐病； 第7部分：镰孢茎腐病； 第8部分：镰孢穗腐病； 第9部分：纹枯病； 第10部分：弯孢叶斑病； 第11部分：灰斑病； 第12部分：瘤黑粉病； 第13部分：粗缩病。 本部分为NY/T1248的第12部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由农业部种子管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省农林科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心、中国农业科学 院作物科学研究所、吉林省农业科学院植物保护研究所、四川省农业科学院植物保护研究所。 本部分主要起草人：石洁、孙世贤、王晓鸣、晋齐鸣、李晓。 I NY/T 1248. 12—2016 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第12部分：瘤黑粉病 1范围 本部分规定了玉米抗瘤黑粉病鉴定技术方法和抗性评价标准。 本部分仅适用于栽培玉米（Zea mays L.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米 近缘种对瘤黑粉病抗性的田间鉴定和评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 瘤黑粉病 common smut 由玉蜀黍黑粉菌[Ustilagomaydis（DC.）Corda]侵染、引起植株叶片、叶鞘、苞叶、气生根、茎秆、 雄穗、雌穗等幼嫩部位产生大小不等的菌瘦为特征的玉米病害。 3瘤黑粉菌接种体制备 3.1病原物分离 对发病植株的菌瘘中的病菌进行形态学鉴定，确认为黑粉菌后，采集冬孢子，通过表面消毒后，置于 PDA平板培养基中进行分离，并对分离物进行纯化培养和致病性测定。 3.2病原物鉴定 3.2.1病原物种的鉴定 对用作抗病性鉴定接种体的病原物应进行种的鉴定，依据形态学特征确定病原物的种级分类地位 （参见附录A)。 3.2.2病原物遗传交配型的鉴定 采用不同的2个菌株在马铃薯蔗糖琼脂(Potato sucroseagar,PSA)培养基平板上混合培养，可产 生双核菌丝体的成对菌株视为不同遗传交配型 3.3接种体繁殖 接种体繁殖方法为：将保存的菌株转至马铃薯蔗糖液体培养基中，在27℃、180r/min条件下振荡 培养3d，即产生大量担孢子，可用于接种。 4抗病性鉴定圃 4.1鉴定圃设置 鉴定圃具备良好的自然发病环境，能够进行田间灌溉和排涝，或具备叶面喷雾设施。 4.2鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排列。鉴定选育品种时，每份材料种植2行，每15份品种设1组已知高 抗、高感对照材料（见附录B)；鉴定种质资源时，每份材料种植1行，每50份种质设1组已知高抗、高感 对照材料。鉴定小区两端应种植不少于2行的保护行。 4.3种植要求 鉴定材料播种时间与大田生产相同。鉴定小区行长5m，行距与植株密度根据各区域品种试验要 求确定，条播或穴播。对选育品种进行抗性鉴定时，双行留苗50株；对种质资源等材料进行抗性鉴定 NY/T 1248.12—2016 时，单行留苗≥25株。土壤肥力水平和耕作管理与大田生产相同。 5 接种 5.1 接种时期 接种时期为玉米6叶～7叶期。接种选择在上午或阴天时进行，同批次鉴定材料应在同一天完成。 5.2接种方法 采用注射法接种。将不同地点来源的2组不同遗传交配型的菌株分别繁殖后等体积混合，经过滤 后将担孢子悬浮液稀释至浓度为1.0×106个担孢了/ /mL的接种悬浮液，加入0.01%的吐温20（V/V）。 用连动注射器从幼苗茎侧方刺人接种，接种量为2mL/株 5.3接种时的田间管理 育期内不喷施农药。同一项农事 操作应在同一天内完成 6 病情调查 6.1 调查时间 在玉米进入灌浆后 查，同批次接种、生育进程相近的材料在同 调查 6.2调查方法 S S 逐株调查每份村 料，记 载长有菌瘦的发病植株数量，计算每份鉴定材料的 ARCH 6.3病情分级 A 田间病情分级 相对应 应的发病株率见表 1. nl 表 1 玉米瘤黑粉病病情分级 病情级别 述 1 3 5 7 9 A 抗性评价 7. 1 鉴定有效性判别 当设置的高感对照材料发病程度达到感病( 该批次鉴定 为有效 7. 2 ：抗性评价标准 依据鉴定材料群体发病程度(病情级 个标准见表2。 表 2玉米对瘤黑粉病抗性的评价标准 病情级别 抗 性 1 高度抗病Highlyresistant(高抗HR) 3 抗病Resistant(抗 R) 5 中度抗病Moderatelyresistant（中抗MR） 7 感病 Susceptible(感S) 9 高度感病Highlysusceptible（高感HS) 7.3重复鉴定 若鉴定材料初次鉴定时表现为高度抗病、抗病、中度抗病，应在第二年进行重复鉴定。 2 NY/T 1248. 12—2016 7. 4抗性评价 对初次鉴定结果和重复鉴定结果进行比较，以记载的最高病情级别为最终鉴定结果，并依此对鉴定 材料进行抗性评价（见附录B)。 NY/T 1248.12—2016 附录A (资料性附录） 玉米瘤黑粉病病原菌 A.1学名和形态描述 玉蜀黍黑粉菌[Ustilago maydis（DC.）Corda]。 玉蜀黍黑粉菌：冬孢子为二倍体细胞，球形或椭圆形，暗褐色，壁厚，壁表面有细刺状凸起，直径为 8μm～12μm。冬孢子萌发时，伴随减数分裂形成具有4个细胞的担子（又名先菌丝），随后每个细胞顶 生或侧生形成梭形、无色的担孢子。担孢子侵染玉米幼苗或老植株的生长组织，萌发后形成侵入丝或以 芽殖的方式生出次生担孢子，次生担孢子也能萌发形成侵入丝侵入寄主。担子、担孢子、侵入丝均为单 倍体。单倍体在PSA培养基上培养时形成酵母状菌落，白色、乳白色或褐色，表面有褶皱，边缘光滑，长 时间培养后，菌落表面出现纤细的绒毛状白色稀疏菌丝，为担孢子萌发后形成。玉蜀黍黑粉菌为异宗配 合真菌，不同遗传型的单倍体细胞融合形成双核菌丝，能在寄主体内迅速发育，刺激寄主组织形成不规 则肿瘤状菌瘘，然后通过细胞核融合，产生二倍体的冬孢子。 黑粉菌形态分类学论著见参考文献。 A.2瘤黑粉菌的培养和保存 马铃薯蔗糖琼脂培养基(Potato sucroseagar,PSA)：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂18g～20g，蒸馏 保存采用斜面试管，保存温度为一20℃，也可以加入10%甘油保存液后置于一80℃超低温冰箱中保存。 NY/T 1248. 12—2016 附录B (规范性附录) 鉴定结果汇总和对照用自交系 B.1鉴定结果汇总表格 玉米抗瘤黑粉病鉴定结果整理后填人鉴定结果表格，见表B.1。 表 B. 1 年玉米抗瘤黑粉病鉴定结果表 编号 品种/种质名称 来源 发病率(%) 抗性评价 注1：鉴定地点 注2:接种病原菌分离物编号 注3：接种日期 调查日期 鉴定技术负责人(签字)： B. 2 抗病对照自交系 齐319,对瘤黑粉病表现稳定的高度抗病（Highlyresistant,HR），选自美国玉米杂交种P78599。 B. 3 3感病对照自交系 掖478，对瘤黑粉病表现稳定的高度感病（Highlysusceptible,HS），选自玉米自交系U8112和沈 5003的组配后代。 5