ICS 65.020.30 B 43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1234—2018 代替NY/T1234—2006 生冷冻精液生产技术规程 Technical code of practice for bovine frozen semen production 2018-12-19发布 2019-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T1234—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替NY/T1234—2006《牛冷冻精液生产技术规程》。与NY/T1234—2006相比，除编辑 性修改外主要技术变化如下： 修改了标准英文名称； 一调整了部分术语和定义； 修改了器械设备准备，增加了对仪器设备的要求； 修改了稀释液配制，增加了稀释液配方、抗生素使用方法等内容； 修改了采精，进一步优化了采精方法； 修改了精液处理，采用了称重法测量精液、精液添加抗生素等方法； 修改了精液冷冻，删除了运用大口径液氮罐和自制的冷冻箱冷冻精液的方法； 删除了原标准“11冻精包装”“12冻精储存”“13冻精运输”。按照GB/T30396《牛冷冻 精液包装、标签、储存和运输》的规定执行。 修改了附录A，新标准附录A是器具清洗和消毒； 修改了附录B，增加了稀释液配方二和配方三，新标准附录B是稀释液配制； 新标准附录D是原标准附录A的内容，增加了细管上所印标识的字体、字号、粗细、位置等 规定； 新标准附录E是原标准附录B的内容，修改了公牛站代号，添加了新增的种公牛站； 增加了附录F，精液生产记录表。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：南京农业大学、全国畜牧总站、农业农村部种质资源检测中心、农业农村部科技发 展中心、农业农村部牛冷冻精液质量监督检验测试中心（北京）。 本标准主要起草人：陆汉希、孙飞舟、王根林、刘丑生、李姣、刘鹏程、黄文佳、李慧、王振云、张晓霞。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -NY/T1234—2006。 NY/T1234—2018 牛冷冻精液生产技术规程 1范围 本标准规定了牛冷冻精液生产的基本要求、稀释液配制、采精、精液处理、精液冷冻、冻精活力检查 冻精包装、标签、储存及记录。 本标准适用于牛冷冻精液生产， 2 规范性引用文件 PUB 件。凡是不注日期的引用文件， GB4143牛冷冻精液 GB/T30396 冷 冻精液包 者存和运输 3 术语和定义 TA 文件 3. 1 采精器 semen 环境条 模拟母牛阴道 牛的采精工具由外壳内胎、漏斗， 集精管等组成 3. 2 采精semenc collectior 用人工模拟且有 有自然交配感的工具，以获得公生精液的 3. 3 采精量 volume per ejaculate 公牛一次采精时排出的精 3. 4 精子密度 sperm 每单位体积精液中的精 子数目。单位 3.5 细管 straw 用于分装精液的聚乙烯复合材料的塑料管。 3. 6 细管冷冻精液 strawfrozensemen 细管装精液经液氮冷冻所形成的产品，简称“细管精液”或“冻精” 4 基本要求 4.1仪器设备 4.1.1仪器设备的配置应满足牛冷冻精液生产的要求。 4.1.2仪器设备运行正常，定期进行维护保养。 4.1.3计量器械（如温度计、天平、量筒、移液器）、恒温箱、水浴箱、显微镜恒温载物台的压力容器等应 1 NY/T1234—2018 按照规定时间进行检定或校准。 4.1.4仪器设备由操作人员按照相关使用说明书进行操作。 4.2器具清洗和消毒 所用器具应保持使用前后的清洁卫生，不同材质的器具应采用不同的清洗和消毒方法见附录A。 5稀释液配制 5.1要求 所有化学试剂为化学纯以上；使用来源于非疫区无疫病鸡场的新鲜鸡蛋；稀释液溶剂为双重蒸馏水 或超纯水。稀释液配方参见附录B。 5.2卵黄的取用 鸡蛋使用前先用温水洗净，再用75%酒精棉球对蛋壳表面进行消毒，待酒精挥发尽后用蛋清分离 器取出完整的卵黄后用灭菌的注射器穿过卵黄膜抽取卵黄；也可在鸡蛋腰正中线处敲开一裂纹，将鸡蛋 一分两半，2个蛋壳交替倾倒，除去蛋清，然后将卵黄倒在灭菌纸（卫生纸、滤纸）上滚动，除去卵黄膜上 残留的蛋清后将卵黄挤入洁净的烧杯中待用。 5.3方法 准确称量化学试剂，加超纯水定容、溶解、灭菌，取一定量的溶液加人卵黄和抗生素搅拌均匀后待 用，盛装稀释液的容器应做明显标记。以配制配方二第一液（参见附录B)为例。 示例： 准确称取柠檬酸钠2.9g，倒人100mL的量筒内，加超纯水50mL左右，用玻棒搅拌，溶解后定容至100mL，混匀后 过滤于三角烧瓶或盐水瓶中，扎好（塞紧）瓶口，置62℃～65℃水浴锅中30min以上。取冷却后的2.9%柠檬酸钠80 mL、卵黄20mL、适量的抗生素，加人三角烧瓶中，用磁力搅拌器搅拌均匀后即可使用，或放入3℃～5℃的冰箱内待用， 但放置时间不得超过24h。 注：使用商品化的专用稀释液，按使用说明添加卵黄、超纯水或双重蒸馏水配成稀释液。 6采精 6.1采精场所应保持安静，地面防滑并保持清洁卫生，有护栏等安全保护设施。 6.2台牛应选择健壮、性情温顺、无疫病的母牛或公牛，体表、外阴、臀部应确保清洁卫生，并保定于牢 固的采精架内。 6.3种公牛体表应清洁卫生，刷刨外阴，阴毛过长时应适度修剪。包皮确需冲洗的，冲洗干净30min 后才可进行采精操作。 6.4将采精用具有规则地摆放在操作台上，采精器润滑剂（凡士林与液体石蜡1：1)，每次用前用水浴 煮沸消毒后置于62℃～65℃水浴锅内待用。 注：可使用商品化的专用润滑剂。 6.5采精器用75%的酒精棉球擦拭消毒，无消毒剂残留后注人38℃左右温水约500mL，并用消毒纱 布将采精器口包裹好，放置于44℃～46℃的恒温箱内。采精前将采精器从恒温箱中取出，集精管可套 一个装有35℃温水的平底塑料瓶，套上保护套，从活塞孔打气使采精器口呈三角形状，内胎的前2/3均 匀涂擦适量润滑剂。青年公牛用光面内胎的采精器，成年公牛可用纹状面内胎的采精器。采精时，采精 器内温度控制在38℃～40℃之间，根据季节和不同的牛，温度可做适当调整，最高不得超过43℃。 6.6公牛靠近台牛时，应采取控制措施，不让公牛立即爬跨，使其充分排泄副性腺后进行2次3次空 爬，等待3min～5min后采精，空爬时不使阴茎触及台牛。性欲不强的公牛采取观摩、引诱、被爬跨和更 换台牛、地点等措施。 2 NY/T1234—2018 向下方，双手配合将阴茎引人采精器口内，公牛往前一冲完成采精动作。采精器紧随公牛阴茎移动，当 阴茎缩回后立即将采精器口斜向上方，打开活塞，取下集精管，迅速从传递窗口送至精液处理室。安装 好的采精器只能使用一次，不得重复使用。 上），采精充分（集精管内泡沫丰富，精液量大且稠密）的公牛不宜连续采精2回。 6.9采精结束后应及时清扫冲洗干净场地。 7精液处理 7.1准备 凡是接触精液的器血均应放在32℃～37℃恒温箱中，稀释液放在32℃～35℃恒温水浴箱中备用。 盛装稀释精液的稀释瓶应做明显标记 7.2外观检查 RD 主要观察精液的色泽 况下 ，精液为乳白色或微 黄，略有腥味。 7.3采精量测定 RE 7.3.1称重 将盛有精液 #的集 精管置 先称取。 精液量按式 ........(.) 式中： L- 一精液量 M—装有精 P—集精管 C 7.3.2目测 直接读取集精 校准合 7.4精子密度测定 使用精子密度测 7.5精子活力评定 取精液和稀释精液 载玻片 温装置的相差显微 镜上评定活力，用百分率或相应数值表宗例如80% 0.8。 7.6精液评价及处理 外观正常、密度大于等于6X10%个/mL、活力大于等于65%、畸形 小于等于15%的精液进行后 续处理，可加入一定量的复合抗生素（进行性控冷冻精液生产的 必须添加），参见附录C。 7.7稀释、灌装、平衡、标识 7.7.1稀释液量确定 根据精液的密度、活力、采精量等确定应加稀释液量。 7.7.2一种稀释液法 取一个已盛有30mL稀释液经34℃水浴预先加温的稀释瓶，对精液进行稀释并混匀，在34℃水浴 中暂存10min后加稀释液至最终稀释量。再按如下方法之一操作： a）先灌装后平衡。放置10min后，即可在20℃以下常温实验室操作台上进行精液的灌装、封口 和标识。灌装后的细管放人不透明的塑料盒内，每盒以盛放300支为宜。把塑料盒放入3℃～ 5℃低温柜中平衡3h～4h，评定活力。 NY/T1234—2018 b） 先平衡后灌装。加完稀释液后，用水杯盛适量的34℃水，把稀释瓶放人后送3℃～5℃低温柜 内降温平衡。2h后水杯中加冰块，促使其快速降温至3℃～5℃（细管亦应降至3℃～5℃)，评 定活力。在低温柜中进行细管灌装、封口和标识。 7.7.3两种稀释液法 把精液倒人34℃预先加温的稀释瓶中，用5mL34℃的第一液加人集精管，摇晃数下；然后倒入稀 释瓶中，剩余的第一液缓慢地加入稀释瓶中，摇匀，评定活力。第一液量的计算见式（2）。用水杯盛适量 的34℃水，把稀释瓶放入后送3℃～5℃低温柜内降温平衡。与此同时，把第二液一并放入低温柜。2h 后水杯中加冰块，促使其快速降温至3℃～5℃时加入第二液，第二液量的计算见式（3）。加人第二液摇 匀后再平衡0.5h以上，评定活力。在低温柜中进行细管灌装、封口和标识。 Y=[(Q+J)/2]-J..... ...(2) 式中： Y——第一液量，单位为毫升（mL)； Q一应加稀释液量，单位为毫升（mL)； J精液量，单位为毫升（