SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1617—2017 代替SN/T1617—2005 可可肿枝病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Cacao swollen shoot virus 行业标准信息服务平台 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1617—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1617—2005《可可肿枝病毒检测方法》，与SN/T1617—2005相比，主要技术变 化如下： 完善了原标准的检测方法，增加实时荧光PCR检测方法； 一完善了原标准的基因组内容； 删除了原标准中的免疫诱捕PCR方法，增加了PCR方法； 一修改了原标准中结果判断； 修改了原标准中附录。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国中山出入境检验检疫局、中华人民共 和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局 本标准主要起草人：魏梅生、陈定虎、相宁、李桂芬、吴翠萍、郭京泽 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1617—2005。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 1617—2017 可可肿枝病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了可可肿枝病毒的检测方法。 本标准适用于进境植物材料中可可肿枝病毒的检疫检测。 2 可可肿枝病毒基本信息 学名：Cacao suwollen shootvirus 缩写:CSSV 中文名：可可肿枝病毒 异名:Theobroma virus 1;Marmor theobromae;Theobromavirus inflans 。 分类地位：花椰菜花叶病毒科（Caulimoviridae）；杆菌状DNA病毒属（Badnavirus）。 CSSV的其他信息参见附录A。 3 方法原理 CSSV的蛋白和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据。根据CSSV与抗体之间的特异性反应,对 植物样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）；依据CSSV的基因组特征建立PCR、实时 荧光PCR；通过这些方法的有效组合，判断样品是否带有CSSV。 4仪器、用具及试剂 4.1 仪器设备 酶联检测仪、天平（感量0.001g）PCR仪、电泳仪、实时荧光PCR仪、电泳槽、紫外透射仪、隔离温 你准信 室、榨汁机、水浴锅等。 4.2 2用具 可调移液器（200μL、20μL、2uL）、可调移液器头、酶联板、离心管、指型管、研钵等 服务平台 4.3试剂 酶联测定试剂（见附录B)、聚合酶链式反应检测试剂（见附录C)。 5检测方法 5.1 双抗体夹心酶联免疫吸附测定 见附录B。 1 SN/T 1617—2017 5.2 聚合酶链式反应(PCR)检测 见附录C。 5.3 实时荧光PCR检测 见附录D。 5.4 生物学测定 参见附录E。 6结果判定 样品检测流程及结果判定按下述原则进行 若DAS-ELISA检测结果为阳性时： PCR的检测结果为阳性，则判定样品携带CSSV； 或采用实时荧光PCR进行检测，若检测结果为阳性，则判定样品携带CSSV。 若DAS-ELISA检测结果为阴性时： PCR的检测结果为阴性，则判定样品不携带CSSV； 检测结果为阳性，则对产物进行测序，测定的序列为CSSV序列，则判定样品携带CSSV。 必要时可进行生物学传毒测定，并进行复验。 7 样品保存与复核 7.1 样品保存 鉴于可可肿枝病毒为检疫性有害生物，应做好以下准备，并在一周内接受复核。 7.2 结果记录与资料保存 完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和 实验人员的签字。生物学测定需有鉴别寄主的症状照片，酶联测定需有酶联板反应的照片和原始数据， PCR检测需有电泳结果照片，实时荧光PCR检测应有荧光曲线图 7.3复核 由指定的单位或人员负责。主要考察实验记录、照片等资料的完整性和真实性，必要时进行复核 实验。