中华人民共和国国家生态环境标准 HJ 1190—2021 水质 灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌 黑色变种）的鉴定 生物学检测法 Water quality —Identification of biological indicator ( Bacillus subtilis var. niger ) for sterilization —Biological detection method 本电子版为正式标准文本，由生态环境部环境标准研究所审校排版。 2021-09-17 发布 2022-04-01实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 1190—2021 i 目 次 前 言 ................................................................ ................................ ................................................................ . ii 1 适用范围 ................................ ................................................................ ................................ ........................ 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ................................................................ ............. 1 3 术语和定义 ................................ ................................................................ ................................ .................... 1 4 方法原理 ................................ ................................................................ ................................ ........................ 2 5 试剂和材料 ................................ ................................................................ ................................ .................... 2 6 仪器和设备 ................................ ................................................................ ................................ .................... 2 7 样品 ................................................................ ................................ ................................ ................................ 3 8 分析步骤 ................................ ................................................................ ................................ ........................ 3 9 结果与报告 ................................ ................................................................ ................................ .................... 6 10 灵敏性和特异性 ................................ ................................ ................................................................ ........... 6 11 质量保证和质量控制 ................................ ................................ ................................................................ ... 6 12 废物处置 ................................ ................................................................ ................................ ...................... 7 附录 A（规范性附录） 培养基和染色液 ................................ ................................................................ ....... 8 附录 B（规范性附录） 培养基和染色液使用说明及结果观察 ................................................................ . 14 HJ 1190—2021 ii 前 言 为贯彻《中华人民共和国环境保护法》 《中华人民共和国水污染防治法》 ，防治生态环境污染，改善 生态环境质量，规范水中灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定方法，制定本标准。 本标准规定了鉴定水中灭菌 生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的 生物学方法，用于微生物实验 室灭菌效果的 评价。 本标准的附录 A和附录 B为规范性附录。 本标准为首次发布。 本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。 本标准主要起草单位：上海市环境监测中心。 本标准验证单位：浙江省生态环境监测中心、江苏省常州环境监测中心、华东师范大学、上海市松 江区环境监测站、上海市长宁区环境监测站和上海市青浦区环境监测站。 本标准生态环境部 2021年9月17日批准。 本标准自 2022年4月1日起实施。 本标准由生态环境部解释。 HJ 1190—2021 1 水质 灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定 生物学检测法 警告：检测人员应采取必要的生物安全防护措施（包括但不仅限于一次性手套、口罩、防护服、防 护眼镜、鞋套等防护用品）；检测时应做好无菌防护，在无菌操作设备内进行。 1 适用范围 本标准规定了鉴定水中 灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的 生物学方法。 本标准适用于微生物实验室灭菌效果的评价 。 2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。 凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 《消毒技术规范》 （ 原卫生部 卫法监发〔 2002〕282号） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 枯草芽孢杆菌黑色变种 Bacillus subtilis var. niger 也称萎缩芽孢杆菌（ Bacillus atrophaeus ） ，在含酪氨酸的培养基上形成黑色素的革兰氏阳性芽孢杆 菌。作为灭菌效果评价试验的指示菌种。 3.2 灭菌 sterilization 用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物、芽孢和朊病毒蛋白，使之达到无 菌保障水平。常用的灭菌方法有化学试剂灭菌（如环氧乙烷、甲醛 等） 、射线灭菌（如 γ射线、电子束 辐射等） 、湿热灭菌、干热灭菌和过滤除菌等。 3.3 生物指示物 biological indicator 含有对特定灭菌过程具有一定耐受力的活微生物的生物制品。 注：生物指示物为特定灭菌过程是否满足杀灭指定数量微生物的必须条件提供信息，并规定该过程的置信水平。 HJ 1190—2021 2 4 方法原理 经灭菌处置后含枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的 水样通过孔径为 0.45 μm的滤膜过滤， 细菌和芽孢被 截留在滤膜上，然后将滤膜置