HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T ××××—×××× 法庭科学 琥珀胆碱 和琥珀单胆碱检验 液相色谱 -质谱和红外光谱 法 Forensic sciences —Examination methods for succinycholine and succinymonocholine—LC-MS and IR ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 江苏省公安厅物证鉴定中心、公安部物证鉴定中心、广西壮族自治区公安厅刑 事侦查总队、福建省公安厅刑事技术总队、湖南省公安 厅物证鉴定中心、江西省公安厅刑警总队、广 东省公安厅刑事技术中心、广州市公安局刑事技术所。 本文件主要起草人： 王学虎、张前上、王瑞花、刘晓 锋、林葭、 晏晓军、刘勇孜、裴茂清、孙立 敏。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 琥珀胆碱 和琥珀单胆碱 检验 液相色谱 -质谱和红外光谱 法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材（血、肌肉组织）中 琥珀胆碱和琥珀单胆碱的液相色谱 -质谱 （LC-MS）和体外固体样品中 氯化琥珀胆碱和 氯化琥珀单胆碱的红外光谱 （IR）检验方法 。 本文件适用于法庭科学 生物检材（血、肌肉组织） 中琥珀胆碱 和琥珀单胆碱 定性定量分析 和固体样 品中氯化琥珀胆碱与氯化琥珀单胆碱的定性分析 。其他非生物检材可参照适用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 液相色谱 -质谱法 4.1 原理 以空白样 品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材 进行提取、 浓缩，采用液相色谱 - 三重四极杆串联质谱或液相色谱 -高分辨质谱检测，用外标法进行定量 。 4.2 试剂和材料 4.2.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a) 乙腈； b) 甲醇； c) 含0.2%甲酸（v/v）的20.0mmol/L 乙酸铵溶液：称取 1540 .0mg乙酸铵，加入 100mL水溶解， 添加 2.0mL甲酸，定容至 1000mL； d) 初始流动相：取 含0.2%甲酸（v/v）的20.0mmol/L 乙酸铵溶液 10mL与乙腈 90mL混匀； e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备液：根据 氯化琥珀胆碱、氯化琥珀单胆碱 标准物质的纯度和盐型 换算后，各称取适量，用 水分别配制成 1.0mg/mL 琥珀胆碱、琥珀单胆碱 单一标准物质储GA/T× × × × —× × × × 2 备液，密封，于塑料试管中 -18℃以下保存，有效期 6个月。或采用市售标准溶液； 2) 1.0µ g/mL混合标准工作 溶液：分别移取 1.0mg/mL 琥珀胆碱、 琥珀单胆碱标准物质储备 液， 用水配制成浓度为 1.0µ g/mL混合标准工作 溶液，密封，于塑料试管中 0℃~4℃保存，有 效期 3个月； 3) 0.01µg/mL混合标准工作 溶液：移取 1.0µ g/mL混合标准工作溶液适量，用去离子水稀释 ， 配制成0.01µg/mL溶液，现配现用 。实验中所用其他浓度的混合标准 工作溶液均由 1.0µg/mL混合标准工作溶液配制得到 ，现配现用。 4.2.2 材料 材料包括 ： a) 微孔有机滤膜 ：0.22µm； b) 塑料离心管； c) 带塑料内衬的进样瓶 。 4.3 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 液相色谱 -三重四极杆串联 质谱仪，配有电喷雾离子源 （ESI）； b) 液相色谱 -四极杆飞行时间 质谱仪，配有电喷雾离子源 （ESI）； c) 电子天平：定性检验实际 分度值 d≤0.1mg，定量检验 实际分度值 d≤0.01mg； d) 超声仪； e) 离心机； f) 浓缩器； g) 移液器。 4.4 操作方法 4.4.1 定性分析 4.4.1.1 样品前处理 4.4.1.1.1 沉淀蛋白法 移取血液 检材样品 0.5mL，或称取铰碎 或匀浆的肌肉组织检材样品 0.5g于具盖离心管中 ，加入乙 腈1.5mL，振荡 5min，不低于 4000r/min离心 5min，取上清液置于浓缩器上 50℃浓缩至干，残留物用 0.25mL初始流动相 溶解，经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量、提取溶剂体 积、定容体积 以及是否浓缩 可根据实际情况调整。 4.4.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白 样品，一份添加 1.0µg/mL混合标 准物质工作溶液 ，使琥珀胆碱、琥珀单胆碱 浓度为 0.01µ g/mL(g) ，作为添加样品 ，与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液和添加样品提取液 ，供仪器分析。 4.4.1.2 仪器检测 4.4.1.2.1 液相色谱 -三重四极杆 串联质谱 仪条件 GA/T× × × × —× × × × 3 以下为参考仪器及条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： Agilent HILI C Plus (2.1mm×100mm,3.5μm) 色谱柱或其他等效柱； 注：Agilent HILIC Plus 为美国安捷伦公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相： 流动相 A：含0.2%甲酸（v/v）的 20mmol/L 乙酸铵溶液；流动相 B：乙腈； c) 柱温： 40℃； d) 流速： 0.6mL/min ； e) 进样量： 5L； f) 洗脱方式：梯度洗脱 ，梯度洗脱程序 见表1； 表1 梯度洗脱程序 时间 min 流动相A 流动相B 1.0 10% 90% 6.0 65% 35% 6.1 95% 5% 8.0 95% 5% 8.1 10% 90% 11.0 10% 90% g) 扫描方式 ：电喷雾电离源（ ESI），正离子 扫描； h) 检测模式：多反应离子监测（ MRM）； i) 碰撞气：氩气； j) 雾化气：氮气 3L/min； k) 接口温度： 300℃； l) 加热块温度： 400℃； m) 加热气：氮气 10 L/min； n) 干燥气：氮气 10 L/min； o) 脱溶剂管 （DL）温度： 250℃； p) 琥珀单胆碱和琥珀胆碱的多反应离子监 测参数见 表2。 表2 琥珀胆碱 和琥珀单胆 碱的多反应离子 监测参数 目标物 前体离子 m/z 二级质谱特征离子 m/z Q1 Pre偏差 V 碰撞能量 V Q3 Pre偏差 V 琥珀胆碱 145.1 115.6* -30 -14 -12 93.6 -30 -16 -21 琥珀单胆碱 204.1 99.0* -10 -24 -19 55.0 -10 -37 -24 注：*表示定量离子。 4.4.1.2.2 液相色谱 -四极杆飞行时间 质谱仪条件 以下为参考仪器及条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整。 a) 色谱柱： Agilent HILIC Plus (2.1mm×100mm,3.5μm) 色谱柱或其他等效柱； GA/T× × × × —× × × × 4 注：Agilent HILIC Plus 为安捷伦公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相： 流动相 A：含0.2%甲酸（v/v）的 20mmol/L 乙酸铵溶液；流动相 B：乙腈； c) 柱温： 40℃； d) 流速： 0.6mL/min ； e) 进样量： 5L； f) 洗脱方式：梯度洗脱 ，梯度洗脱程序 见表 1； g) 扫描方式 ：电喷雾电离源（ ESI），正离子监测 模式； h) 检测方式：多反应 离子监测（ MRM）； i) 扫描范围： 50 amu ~3