ICS 13.310 CCS A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T ×××× —×××× 法庭科学 毛发中地西泮等 18种苯二氮䓬 类药物检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for 18 benzodiazepines including diazepam in hair samples —LC-MS ×××× - ××- × × 实施 ×××× - ××- ×× 发布 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ） 提出并归口 。 本文件起草单位：司法鉴定科学研究院。 本文件主要起草人： 向平、沈敏、刘伟、严慧、沈保华、卓先义、吴何坚 。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 毛发中地西泮等 18种苯二氮䓬类药物检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学领域 毛发中地西泮等 18种苯二氮䓬类药物的液相色谱 -串联质谱（ LC- MS/MS）检验方法。 本文件适用于法庭科学领域 毛发中地西泮等 18种苯二氮䓬类药物 的定性定量分析。其他 富含角蛋 白的检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对毛发检材中 地西泮等 18种苯二氮 䓬类药物 （详见附录 A）进行提取后，采用液相色谱 -串联质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰 度比作为定性判断依据；以峰面积作为依据， 采用外标法 或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 甲酸； d) 乙酸胺； e) 丙酮：分析纯； f) 二氯甲烷：分析纯； g) 20mmol/L 乙酸铵和 0.1%甲酸缓冲液：分别称取 1.54g乙酸铵和 1.84g甲酸，加水溶解稀释 并 定容至1000mL； h) pH值9.2的硼砂缓冲液：称取 3.80g硼砂 (Na 2B4O7· 10H 2O)，加水稀释 并定容至1000mL； i) 标准物质溶液： GA/T × × × × —× × × × 2 1) 1.0m g/mL单一标准物质储备 溶液： 根据 18种苯二氮䓬类药物标准物质的纯度和盐型换算 后，各称取适量，用甲醇分别配制成 1.0mg/mL 单一标准物质储备 溶液，混匀，密封， 置 于冰箱中冷冻保存 ，有效期 12个月。或采用市售单一标准溶液，特殊情况下可使用对照 溶液代替标准溶液； 2) 10μg/mL 单一标准物质工作溶液：移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶液，用甲醇配制成浓度 为10μg/mL的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 3个月。实验中 所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 10μg/mL 标准物质工作溶液逐级稀释得到； 3) 10μg/mL 混合标准物质工作溶液：分 别移取 1.0mg/mL 的单一标准物质储备液，用甲醇配 制成浓度为 10μg/mL 的混合标准物质工作溶液，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效 期3个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 10μg/mL 混合标准物质工作溶 液用甲醇 逐级稀释 得到； 4) 0.1mg/mL 内标标准物质储备 溶液：市售 0.1mg/mL 地西泮 -D5的甲醇溶液，置于 冰箱中冷 冻保存，有效期 12个月； 5) 20ng/mL 内标标准工作溶液：移取 0.1mg/mL 内标标准物质储备溶液 ，用甲醇配制成浓度 为20ng/mL 的内标标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存 ，有效期 3个月； 6) 20ng/mL 质控标准工作溶液：分别 移取氯硝西泮、三唑仑的 10μg/mL 单一标准物质工作 溶液，用甲醇配制成浓度为 20ng/mL 的质控标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存 ， 有效期 3个月。 5.2 材料 材料包括： a) 具塞玻璃试管； b) 容量瓶； c) 不锈钢医用剪刀。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配电喷雾离子源 (ESI)； b) 电子分析天平：实际分度值 d≤0.01mg； c) 离心机； d) 冷冻研磨机； e) 振荡器； f) 超声波清洗器； g) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 检材样品制备 7.1.1.1.1 毛发样品洗涤 GA/T × × × × —× × × × 3 毛发样品依次用适量的水和丙酮分别振荡洗涤各 2次，清洗后的毛发晾干后剪成约 1mm段。或根 据毛发样品情况和检验目的，使用不锈钢医用剪刀对毛发样品进行分段处理，再将分段后的毛发分别处 理。 7.1.1.1.2 毛发样品粉碎 将剪碎的头发段装入冷冻研磨机粉碎。 7.1.1.1.3 样品提取 称取 20.0mg研磨后的毛发粉末 1份，置于 10mL玻璃试管中，加入 pH值9.2的硼砂缓冲液 2mL， 超声 1h。取出后加入内标标准工作溶液 20μL，混匀，再加入 3mL二氯甲烷，振荡 1min，2500r/min 离 心3min， 移取有机层在浓缩器上 45℃下浓缩至干。 残留物加入 100μ L乙腈复溶， 作为检材样品提取液， 供仪器检测。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量空白毛发样品两份于玻璃试管中，一份作为空白样品，一份添加质控标准 工作溶液，使其中 的浓度均为 20pg/mg，作为质控样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和 质控样品提取液， 供仪器检测。 7.1.1.3 添加样品制备 若检材样品中出现可疑苯二氮 䓬类药物， 取空白毛发样品两份于玻璃试管中，一份作为空白样品， 一份添加 检材样品中出现的可疑苯二氮䓬类药物 单一标准工作溶液 ，作为添加样品，与检材样品平行操 作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -串联质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： Allure PFP Propyl (2.1mm ×100mm，5μm)液相色谱柱或其 他等效柱。 注：Allure PFP Propyl 液相色谱柱 为Restek公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相： A：乙腈， B：20mmol/L 乙酸胺和 0.1%甲酸缓冲液；洗脱梯度如表 1所示； 表1梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 5% 95% 3 60% 40% 7 80% 20% 20 80% 20% 20.5 5% 95% 30 5% 95% c) 流速： 0.2mL/min ； d) 柱温：（ 25± 5）℃； GA/T × × × × —× × × × 4 e) 扫描方式：正离子扫描； f) 检测方式：多反应监测（ MRM）； g) 离子源电压： 5500V； h) 碰撞气（ CAD）、气帘气（ CUR）、雾化气（ GS1）、辅助气（ GS2）：高纯氮气； i) 去簇电压（ DP）、碰撞能量（ CE）、质谱 定性离子对、定量离子对见表 2。 表2 质谱定性 离子对、定量离子对和去簇电压及碰撞 能量条件 目标物 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 地西泮 285.1 193.3* 60 45 285.1 154.1 60 36 奥沙西泮 287.2 241.2* 50 31 287.2 269.3 50 36 去甲西泮 271.2 140.2* 60 36 271.2 208.1 60 36 替马西泮 301.2 255.2* 70 36 301.2 283.1 70 19 氯硝西泮 316.2 27