HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T ×××× —×××× 法庭科学 生物检材中氟乙酸根离子检 验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for fluoroacetate ion s in biological samples—LC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 广东省公安厅刑事技术中心、 公安部物证鉴定中心、 福建省公安厅刑事技术总队、 黑龙江省公安厅刑事技术总队、广州市公安局刑事技术所、济南市公安局刑警支队刑科所、济宁市公安 局刑事科学技术研究所、中国刑事警察学院 。 本文件主要起草人： 张亮、裴茂清、 冷泠、施文兵、胡浩浪、王宾、徐若沦、黄健、李航麒、叶树 海、王涛、孙立敏、赵绪龙、杨崇俊、朱昱 。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中氟乙酸根离子检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材 （血液、尿液、肝脏 ）中氟乙酸根离子 的液相色谱 -质谱（ LC-MS） 定性定量分析方法 。 本文件适用于法庭科学生物检材 （血液、尿液、肝脏 ）中氟乙酸根离子 的定性定量分析。其他 检材 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相 色谱 -三重四极杆串联质谱或液相色谱 -高分辨质谱检测 ，用外标法进行定量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均色谱纯，试剂 包括： a) 乙腈； b) 甲醇； c) 浓氨水； d) 乙酸铵； e) 10mmol/L 乙酸铵溶液：称取 乙酸铵 0.77g，加水溶解稀释至 1000mL，用氨水调pH至8； f) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备溶液：根据氟乙酸钠标准物质的纯度和盐型换算后，称 取适量， 用甲醇配制成氟乙酸根离子标准物质储备溶液， 密封， -18℃以下保存，有效期 12个月； 2) 标准物质 工作溶液：移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶 液，用乙腈配制成浓度为 1.0μg/mL 的标准物质工作溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 3个月。实验中所用其他浓度的标准 物质工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质储备溶液配制 得到。 GA/T × × × × —× × × × 2 5.2材料 材料包括 ： a) 具盖离心管 ； b) 微孔滤膜： 0.22µ m或0.45µm。 6 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 液相色谱 -三重四极 杆串联质谱仪：配有电喷雾离子源 ； b) 液相色谱 -高分辨质谱仪：配有电喷雾离子源 ； c) 离心机； d) 涡旋混合器； e) 移液器； f) 电子天平 ：定性检验实际 分度值 d≤0.1mg，定量检验实际分度值 d≤0.01mg。 7操作方法 7.1定性分析 7.1.1样品前处理 7.1.1.1蛋白沉淀 移取血液等液体检材样品 0.2mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 0.2g于具盖离心管中 ，加入 乙腈 0.4mL，振荡 1min，不低于 3000 r/min离心 3min，取上清液， 经微孔滤膜过滤，作为检材样品提 取液，供仪器检测。 必要时可将滤液用初始流动相稀释或挥干后用初始流动相溶解。 注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加标准物质工作溶液， 使氟乙酸根离子 浓度为 35.0ng/mL(g)，作为添加样品 ，与检 材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液 ，供仪器检测。 7.1.2仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱：PFP（3.0mm×100mm，2.7µm）色谱柱 或其他等效柱； 注：PFP色谱柱是 安捷伦公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 40℃； c) 流动相 A：10mmol/L 乙酸铵溶液（pH值8）； d) 流动相 B：乙腈； e) 流速： 0.3mL/min； f) 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1； GA/T × × × × —× × × × 3 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 2% 98% 2 2% 98% 2.1 5% 95% 6 5% 95% 6.1 50% 50% 8 90% 10% 8.1 2% 98% 11 2% 98% g) 流速： 0.3mL/min ； h) 离子源：电喷雾离子源； i) 检测模式：负离子模式； j) 四极杆串接飞行时间质谱（高分辨） 参数： 1) 干燥气温度： 200℃； 2) 干燥气流速： 8L/min； 3) 雾化气压力： 35psi； 4) 鞘气温度： 300℃； 5) 鞘气流速： 8L/min； 6) 毛细管电压： 3000V； 7) 喷嘴电压： 500V； 8) 毛细管出口电压： 100V； 9) 锥孔电压： 65V； 10) 八极杆射频电压： 750V； 11) 二级碰撞电压 ：5V； 12) 一级质谱特征离子 ：m/z 77.0044*；二级质谱特征离子 ：m/z 33.0146、m/z 56.9982； 注：*表示定量离子 。 k) 三重四极杆质谱（低分辨）参数： 1) 喷雾电压： 3000V； 2) 鞘气： 45Arb； 3) 辅助气： 10Arb； 4) 离子传输管温度： 250℃； 5) 雾化器温度： 250℃； 6) 扫描模式： MRM； 7) 二级碰撞电压 ：5V； 8）一级质谱特征离子 ：m/z 77；二级质谱特征离子 ：m/z 33、m/z 57*； 注：*表示定量离子 。 7.1.2.2进样 分别吸取 空白溶剂、添加样品 提取液、空白样品 提取液、检材样品 提取液、标准物质工作溶液， 按 7.1.2.1仪器条件 进行检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。 GA/T × × × × —× × × × 4 7.2定量分析 7.2.1样品前处理 移取血液等液体 检材样品 0.2mL两份，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 0.2g两份，按7.1.1进行操 作，得到检材样品提取液 ，供仪器检测 。 取与检材样品等量的相似基质空白样品， 与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液 ， 供仪器检测 。 取与检材样品等量的相似基质空白样品 两份， 添加氟乙酸根离子 标准物质工作溶液 ， 作为添加样品， 与检材样品平行操作，得到添加样品提取液 ，供仪器检测 。添加样品中目标物含量应 在检材样品中目标 物含量的（ 100± 50）%范围内。 7.2.2仪器检测 7.2.2.1仪器条件 同7.1.2.1。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液 ，按 7.1.2.1仪器条件 进样分析 。每份 检材样品提取液和添加样品提取液各 进样分析 2～3次。 7.2.3计算 7.2.3.1 计算含量 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算检材样 品中目标物的 含量。 ω=A×ω' A'……...................................................................... ( 1) 式中： ω—检材样品中目标物的含量； A—检材样品 提取液中目标物的峰面积 的平均值 ； A′—添加样品 提取液中目标物的峰面积 的平均值 ； ω′—添加样品中目标物的 含量。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 7.2.3.1中计算得到的检材样品中目标物的含量，