中华人民共和国公安部 发布 ×××× -××-××实施 ××××-××-××发布 布 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦 酸检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for glyphosate and aminomethyl phosphonic acid in biological samples—LC-MS GA/T × × × × －× × × × GA 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 ICS 13.310 CCS A 92 GA/T ×××× —×××× I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本文件起草单位：贵州省公安厅物证鉴定中心、公安部物证鉴定中心、北京市公安局刑侦总队、中 国刑事警察学院、 广东省公安厅刑事技术中心、 湖北省公安司法鉴定中心、 重庆市公安局物证鉴定中心、 广州市公安局刑事技术所、滨州市公安局物证检验鉴定中心、大连市刑侦支队。 本文件主要起草人：王立雄、田仁奎、陈实、高明顺、张卓、兰昭荣、杨英勇、黄健、 赵霞、朱昱、 张亮、张银华、郭浩、孙立敏、吴洪振、王彬。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材 （血液、尿液、 胃组织、 肝脏等）中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸 的液相色谱 -质谱（ LC-MS）的定性定量方法。 本文件适用于法庭科学生物检材 （血液、尿液、 胃组织、 肝脏等）中草甘膦和氨甲基膦酸的定性定 量分析。其他可疑样品可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 名词术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相 色谱 -质谱法定性定量， 以保留时间、 质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据； 以峰面积为依据， 采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水 。除另有说明外， 在分析中使用的试剂均 为色谱纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 乙酸铵； d) 5%氨水：取5mL氨水（优级纯），加水溶解稀释并定容至 100mL； e) 5%氨水 5mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵 0.386g并移取 50mL氨水，加水溶解稀释 并定容至 1000mL； f) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 单一标准物质储备溶液：根据 草甘膦、氨甲基膦酸 标准物质的纯度和盐型换算 后，各称取适量，用 水分别配制成 1.0mg/mL 草甘膦、氨甲基膦酸 标准物质储备溶液，密GA/T× × × × —× × × × 2 封， 0℃~4℃保存，有效期 6个月。或采用市售标准溶液； 2) 单一标准物质 工作溶液： 移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶 液，用水配制成浓度为 100µg/mL 的单一标准工作 溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 3个月。实验中所用其他浓度的单一 标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质储备溶液配制 得到； 3) 混合标准物质 工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 草甘膦、氨甲基膦酸 标准物质储备溶液 ，用 水配制成浓度为 100µg/mL的混合标准物质工作 溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 3个 月。实验中所用其他浓度的 混合标准物质工作溶液均由 1.0mg/mL 单一标准物质储备溶液 配制得到。 5.2材料 材料包括： a) GCB/PSA 固相萃取柱： CNW®CNWBOND GCB/PSA 柱或等效固相萃取柱； 注：CNW®CNWBOND GCB/PSA 柱是 CNW公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) NH 2固相萃取柱： Agela Cleanert® NH 2柱或等效固相萃取柱； 注：Agela Cleanert ® NH 2柱是 Agela公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 具盖离心管； d) 具塞玻璃试管； e) 有机系微孔滤膜： 0.22µm。 6 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 （ESI）和三重四 极杆质量分析器； b) 电子天平： 分度值 d≤0.01mg； c) 铰碎机； d) 移液器； e) 离心机； f) 振荡器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 固相萃取 移取尿液 1.0mL于具盖离心管中，加入 2mL水稀释，得到 3mL尿液稀释液。 移取血液 1.0mL或称取铰碎的胃组织、肝脏等固体检材样品 1.0g于具盖离心管中，加入 5mL乙腈 /水（体积比为 80:20） ，振荡 5min，10000 r/min以上离心 5min，取上清液 转移至具塞玻璃试管 ，置于浓 缩器上 70℃浓缩至约0.5mL，加水稀释至 3mL,得到稀释液。 将稀释液转移至 GCB/PSA 固相萃取柱 （使用前依次用甲醇 3mL、水 3mL进行活化 ），过柱流速为GA/T× × × × —× × × × 3 1mL/min，用 1mL水淋洗，收集过柱液和 淋洗液并转移至 NH 2固相萃取柱 （使用前依次用甲醇 3mL、 水3mL进行活化 ），过柱流速 为1mL/min，依次用 3mL水、 3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液， 挤干水分或 离心或真空抽固相萃取柱 2min，用2mL5%氨水溶液洗脱， 洗脱液过柱流速 为0.5mL/min~ 1.0mL/min， 洗脱液收集至具塞玻璃试管 ，置于浓缩器上 70℃浓缩至干，残留物用 0.3mL乙腈 /水（体积比为 20:80） 溶解，经有机微孔过滤膜过滤， 作为检材样品提取液 ，供仪器检测。 注：检材样品取样量、 稀释体积、乙腈 /水（体积比为 80:20）体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2质控样品制备 取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白 样品，一份添加 草甘膦、氨甲基膦 酸混合标准物质 工作溶液（尿液、 血液 添加样品的浓度为 0.1μg/mL，胃组织添加样品的浓度为 0.2μg/g， 肝脏添加样品浓度为 0.5μg/g），作为添加样品 ，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品 提取液，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -串联质谱仪条件 以下为参考仪器及条件，可根据不同品牌仪器和不同检材等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： Asahipak NH2P -50 2D液相色谱柱（ 2.0mm ×150mm，5μm）或其他等效柱； 注： Asahipak NH2P -50 2D是Shodex公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 35℃； c) 流动相 A: 乙腈，流动相 B：5%氨水 5mmol/L乙酸铵溶液； d) 流速： 0.25mL/min ； e) 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0.0 80% 20% 2.00 80% 20% 2.01 20% 80% 4.50 20% 80% 4.51 0% 100% 5.50 0% 100% 5.51 80% 20% 8.00 80% 20% f) 扫描方式：负离子扫描 (ESI﹣)； g) 检测方式 :多反应监测 （MRM）； h) 喷雾电压： -4500V； i) 离子源温度： 550℃； j) 气帘气压力： 30psi； k) 雾化气压力： 55psi； l) 辅助气压力： 55psi； GA/T× × × × —× × × × 4 m) 碰撞气：氮气； n) 定性、定量离子对 、去簇电压和碰撞能量条件 见表 2。 表2 定性、定量离子对 、去簇电压和碰撞能量条件