ICS 13.310 A 92 法庭科学 生物检材中 百草枯检验 液相色谱-质谱法 Forensic sciences —Examination method s for paraquat in biological samples—LC-MS ICS 13.310 CCS A 92 GA 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA/T × × × × －× × × × ×××× -××-××实施 ×××× -××-××发布 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位：滨州市公安局、公安部物证鉴定中心、广东省公安厅刑事技术中心、广州市公安 局刑事技术所、郑州市公安局物证鉴定所、山西省公安厅、大连市公安局刑侦支队刑事科学技术室、浙 江省公安厅刑侦总队、广西壮族自治区公安厅刑侦总队、中国刑事警察学院、湖北省司法鉴定中心。 本文件主要起草人：吴洪振、王玮、王秉晨、王秀娟、高颖、王文卓、郝伟、于忠山、张亮、孙立 敏、孔维刚、张高勤、王彬、宣宇、乔文涛、朱昱、孙杰燕。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中百草枯 检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材（ 血液、胃组织、肝脏）中百草枯的液相色谱 -质谱（ LC-MS）定 性定量分析方法。 本文件适用于法庭科学生物检材（血液、胃组织 、肝脏）中百草枯的定性定量分析。其他 检材可参 照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照， 按平行操作的要求， 对生物检材 中的百草枯 进行提取、 净化及浓缩， 采用液相色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子作为定性判断依据；以峰面积为依据，采 用外标法进行定量。 5 试剂和材料 5.1试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水 。分析中使用的试剂均为色谱纯，试剂包括： a) 乙腈； b) 甲酸； c) 甲酸铵； d) 含0.8%（V/V） 甲酸的 250mmol/L 甲酸铵溶液： 称取 15.75g甲酸铵和 8mL甲酸，置于 1000mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀超声后备用； e) pH值8.0的氨水：移取 10µL浓氨水加水定容至 10mL； f) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备溶液：根据 百草枯标准物质的纯度 和盐型换算后，取适量，用 水 配制成 1.0mg/mL 百草枯标准物质储备溶液， 密封， -18℃以下保存，有效期 12个月。或 采用市售标准溶液； GA/T× × × × —× × × × 2 2) 标准物质 工作溶液：移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶 液，用水配制成浓度为 100ng/mL的 标准工作 溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 3个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶 液均由 1.0mg/mL 标准物质储备溶液配制 得到。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 有机微孔滤膜： 0.22µ m； c) 固相萃取柱： Waters Oasis WCX 柱或等效柱 。 注：Waters Oasis WCX 柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）； b) 振荡器； c) 电子天平 ：分度值 d≤0.01mg； d) 离心机； e) 移液器； f) 超声波清洗器 。 7操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 蛋白沉淀 移取血液等液 体检材样品 1.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g于具盖离心管中，加入 乙腈 3.0mL，振荡 5min，不低于 8000r/min 离心 10min，取上清液， 经有机微孔滤膜过滤，作为检材样 品提取液， 供仪器检测 。 注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g于具盖离心管中。 加入 4 mL pH值8.0的氨水稀释， 振荡 5min，不低于 8000r/min 离心 30min，取上清液转移至已活化好的固相 萃取柱中（使用前依次用 3mL甲醇、 3mL水进行活化） ，用 3mL水、 3mL甲醇淋洗，用甲酸 /乙腈 /水 （体积比为 2:58:40）2mL洗脱，收集洗脱液，过 0.22μ m 的有机系微孔滤膜，作为检材样品提取液， 供仪器检测 。 注：检材样品取样量、缓冲液体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加标准物质工作溶液， 使百草枯 浓度为 10ng/mL (g)，作为添加样品 ，与检材样品平GA/T× × × × —× × × × 3 行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液 ，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -串联质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： Waters HILIC 柱（ 2.7um，2.1mm×100mm ）或其他等效柱； 注： HILIC为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温： 40℃； c） 流动相 A：含 0.8%（V/V）甲酸的 250mmol/L 甲酸铵溶液； d） 流动相 B：乙腈； e） 流速： 0.4 mL/min ； f） 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 20% 80% 0.3 60% 40% 4.0 60% 40% 5.0 20% 80% 6.5 20% 80% g） 扫描方式：正离子扫描； h） 检测方式：多反应检测（ MRM）； i） 电喷雾电压： 1000V； j） 离子源温度： 600℃； k） 碰撞气：氮气； l） 定性、定量离子对和锥孔电压、碰撞能量条件见表 2。 表2 定性、定量离子对和锥孔电压、碰撞能量条件 目标物 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 百草枯 186.2/171.0 186.2/171.0 65 30 186.2/155.1 50 40 7.1.2.2 进样 分别吸取 空白溶剂 、添加样品 提取液、空白样品 提取液、检材样品 提取液、标准物质工作溶液， 进 样量为 10μL，按7.1.2.1仪器条件 进行检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。 7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 GA/T× × × × —× × × × 4 移取血液等液体 检材样品 1.0mL两份，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g两份，按 7.1.1进 行操作，上清液经有机微孔滤膜过滤 后，置于浓缩器上 60℃浓缩至干，残留物用水 0.2mL溶解，得到 检材样品提取液 ，供仪器检测。 取与检材样品等量的相似基质空白样品 ，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液，供仪器检 测。 外标-单点校正法 ：取与检材样品等量的相似基质空白样品 两份，添加 百草枯标准物质工作溶液， 作为添加样品 ,与检材样品平行操作，得到添加样品提取液 ，供仪器检测 。添加样品中目标物含量 应在 检材样品中目标物含量的 （100±50）%范围内。 外标-校准曲线法 ：取与检材样品等量的相似基质空白样品，添加 百草枯标准物质工作溶液，配制 成浓度在 5ng/mL~100ng/mL 范围内的添加 样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器 检测。校准曲线应不少于 6个浓度点（包括空白样品）。检材样品中目标物的 含量应在校准曲线的线 性范围内。 7.2.2 仪器检测 7