HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中克百威等7种氨 基甲酸酯类杀虫剂 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for seven carbamate insecticides including carbofuran in biological samples—LC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 辽宁省公安厅刑事技术总队、 广西省厅物证鉴定中心、广东省厅刑事技术中心、 深圳市公安局刑科所 、公安部物证鉴定中心 。 本文件主要起草人： 吴迪、李杰敏、黄丽、赵海雨、黄克建、李鹏、李树辉 、王瑞花 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中 克百威等7种氨基甲酸酯类杀虫剂检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学 生物检材 （血液、尿液 ）中克百威、 灭多威、 甲萘威、异丙威、涕 灭威、残 杀威、抗蚜威 的液相色谱 -质谱定性定量分析 方法。 本文件适用于法庭科学 生物检材 （血液、尿液 ）中克百威、 灭多威、 甲萘威、异丙威、涕灭威、残 杀威、抗蚜威 的定性定量分析 。其他检材可参照 使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 对生物检材中7种氨基甲酸酯类农药（基本 信息参见附录 A）进行提取、净化及浓缩， 采用液相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、质谱特征离 子对和离子对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法 进行定量分析 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明， 在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 三氯甲烷 ； b) 乙酸乙酯 ； c) 乙腈：色谱纯 ； d) 甲酸：色谱纯 ； e) 0.1%甲酸溶液：移取 0.5mL甲酸用水定容至 500mL； f) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备液：根据 克百威、 灭多威、 甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威、 抗蚜威标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用 乙腈分别配制成 1.0mg/mL 标准物 质储备液， 密封， -18℃以下保存，有效期 3个月。或采用市售标准溶液； GA/T× × × × —× × × × 2 2) 单一标准物质工作溶液： 分别移取1.0mg /mL的克百威、灭多威、甲萘威、异丙威、涕灭 威、残杀威、抗蚜威 标准物质储备 液，用乙腈配制成浓度为 10µg/mL的单一标准工作 溶 液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 1个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 1.0mg /mL标准物质储备 液配制得到； 3) 混合物质标准工作溶液：分别移取 1.0mg /mL的克百威等7种标准物质 储备溶液，用乙 腈配制成浓度为 1µg/mL的混合标准物质工作 溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 1个月 。实验中所用其他浓度的 混合标准物质工作溶液均由 1.0mg /mL标准物质 储备液配制得 到。 5.2 材料 材料包括 ： a) 具盖离心管 ； b) 有机微孔滤膜： 0.22µ m； c) 固相萃取柱： WONDASEP NH 2（200mg/3mL ）柱或等效固相萃取柱 。 注：WONDASEP NH 2柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 液相色谱 -串联质谱仪： 配有电喷雾离子源（ ESI）； b) 振荡器； c) 电子天平 ：分度值 d≤0.01mg； d) 离心机； e) 移液器； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液或尿液 0.2mL置于具盖离心管中，加入乙酸乙酯 0.8mL，振荡5min，不低于 8000r/min 离 心3min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 ，置于浓缩器上 60℃浓缩至干，残留物 用乙腈 0.2mL溶解，经有机微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量、混合溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液或尿液 0.2mL置于具盖离心管中， 加入 0.8mL水振荡5min， 不低于 8000r/min 离心 3min， 取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中（使用前用 2mL三氯甲烷 活化），上清液过柱流速不超过 1mL/min，用 0.5m L三氯甲烷 洗脱，洗脱液过柱流速不超过 1mL/min，收集洗脱液，置于浓缩器上 60℃ 浓缩至干，残留物用 乙腈 0.2mL溶解，经有机微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液，供仪器检测。 7.1.1.3 沉淀蛋白 GA/T× × × × —× × × × 3 移取血液或尿液 0.2mL置于具盖离心管中，加入 0.8mL乙腈，振荡 5min，不低于 8000 r/min离心 3min，取上清液， 经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.4 质控样品制备 移取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白 样品，一份 分别添加灭多威、甲 萘威和涕灭威 的单一标准物质 工作溶液 ，按7.1.1.1操作时使灭多威浓度为 0.1ng/mL，甲萘威浓度为 0.5ng/mL，涕灭威 浓度为 2ng/mL，按7.1.1. 2和7.1.1. 3操作时使灭多威 浓度为 0.5ng/mL，甲萘威 浓度 为1ng/mL，涕灭威 浓度为 2ng/mL，作为添加样品 ，与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液和添加 样品提取液 ，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 液相色谱 -串联质谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： RaptorTMAR C 18 （100 mm×2.1mm ，2.7µm）或其他等效柱； 注： RaptorTMAR C 18为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对 该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 35℃； c) 流动相 A：0.1%甲酸溶液； d) 流动相 B：乙腈； e) 流速： 0.2mL/min ； f) 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1； 表1梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0.0 20% 80% 1 40% 60% 4 60% 40% 4.2 20% 80% 5 20% 80% g) 扫描方式：正离子扫描； h) 监测方式：多反应监测 （MRM）； i) 电喷雾电压： 4500V； j) 雾化气压力： 50psi； k) 气帘气压力 ：35 psi； l) 辅助气压力 ：50psi m) 离子源温度： 450℃； n) 定性、定量离子对和去簇电压、碰撞能量条件见表 2。 GA/T× × × × —× × × × 4 表2定性、定量离子对和锥孔 电压、碰撞能量条 件 目标物 定量离子对 定性离子对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 灭多威 163.1/88.1 163.1/88.1 32 14 163.1/106.1 32 13 抗蚜威 239.2/182.1 239.2/182.1 33 21 239.2/72.0 33 20 涕灭威 208.1/116.2 208.1/116.2 30 12 208.1/89.2 30 26 残杀威 210.1/16