ICS 13.310 CCS A 92 GA 法庭科学 生物检材中巴比妥等 46种 安眠镇静类药物筛选 第2部分：液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Screening methods for 46 hypnotics and sedatives including b arbital in biological samples —Part2：LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × －× × × × 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA/T × × × ×—× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 GA/T × × × ×《法庭科学 生物检材中巴比妥等 46种安眠镇静类药物筛选》分为 2个部分： ——第1部分：气相色谱 -质谱法； ——第2部分：液相色谱 -质谱法。 本文件为GA/T × × × ×的第 2部分。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 浙江省公安厅 刑事侦查总队 、公安部物证鉴定中心、 上海市公安局物证鉴定中心、 广东省公安厅刑事技术中心、广西壮族自治区公安厅刑事侦查总队、中国人民公安大学、广州市公安局 刑事技术研究所、杭州市公安局刑事技术研究所。 本文件主要起草人：傅得锋、孙剑聪、宣宇、于忠山、张云峰、张玉荣、梁晨、裴茂清、张亮、黄 克建、刘晓锋、何洪源、朱焕慧、应剑波。 GA/T × × × ×—× × × × I 引 言 安眠镇静类药物是毒物分析中常见的一类药毒物，种类多、理化性质差异大。 GA/T ××××的本 部分规定了法庭科学生物检材（血液、尿液）中巴 比妥等 46种安眠镇静类药物的 液相色谱 -质谱筛选方 法，旨在提高分析效率、保证分析质量。 GA/T××××拟由两个部分组成： ——第1部分：气相色谱 -质谱法； ——第2部分：液相色谱 -质谱法。 GA/T × × × ×—× × × × 1 法庭科学 生物检材中 巴比妥等46种安眠镇静类药物 筛选 第2部分：液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材 （血液、尿液 ）中巴比妥等 46种安眠镇静类药物的液相色谱 -质谱 （LC-MS）筛选方法。 本文件适用于法庭科学生物检材 （血液、尿液 ）中巴比妥等 46种安眠镇静类药物的 定性分析。 其他 检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品为对照， 按平行操作的要求， 对生物检材中 46种安眠镇静类药物 （详见附录 A）进行提取、净化及浓缩，采用 液相色谱 -串联质谱分析 ，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰 度比作为定性判断依据 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇：色谱纯； b) 乙腈：色谱纯； c) 乙酸乙酯 ：色谱纯； d) 甲酸：色谱纯； e) 乙酸铵； f) 1.0mol/L氢氧化钠水溶液 :称取氢氧化钠 20.0g,加入一定量水溶解并稀释定容至 500mL； g) pH值6的磷酸盐缓冲溶液 ； h) pH值9.2的硼砂缓冲溶液 ； i) 0.1%甲酸溶液（以配制 500mL为例）：量取500μL甲酸置于 500mL容量瓶中，加 水定容至刻度； GA/T × × × ×—× × × × 2 j) 1mmol/L 乙酸铵溶液（ 以配制 500mL为例）：称取 38.5mg乙酸铵置于 500mL容量瓶中，加 水 定容至刻度 ； k) 标准溶液： 1) 标准物质储备液：根据 巴比妥等46种标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用甲醇 分别配制成 1.0mg/mL 的标准物质储备液，密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期 12个月。 或采用市售标准溶液 ; 2) 标准物质工作溶液：移取巴比妥等标准物质储备液各适量，用甲醇或乙腈稀释，分 别配制 成100ng/ mL的标准物质工作溶 液，置于冰箱中冷冻保存，有效期 6个月；实验中所用其他 浓度的标准物质工作溶液均由标准物质储备液用甲醇稀释得到； 3) 质控标准溶液：移取烯丙异丙巴比妥、丙基解痉素 （SKF525A ）、地西泮 -D5、氯丙嗪标 准物质储备液各适量，用甲醇稀释，分别配制成 10µ g/mL的质控标准储备溶液，置于冰箱 中冷冻保存，有效期 6个月；实验中所用其他浓度的质控标准溶液均由标准物质储备液用 甲醇稀释得到。 注：可根据实际情况适当调整质控标准溶液中化合物的种类。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 固相萃取柱 ：HLB、C18或其他等效固相萃取柱 ； 注：Oasis® HLB 柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 有机系微孔滤膜： 0.22μm。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪： 配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； b) 液相色谱 -高分辨质谱仪： 配有电喷雾离子源（ ESI）和高分辨质量分析器； c) 电子天平：实际 分度值 d≤0.1mg； d) 振荡器； e) 离心机； f) 移液器； g) 浓缩器； h) 水浴锅。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1沉淀蛋白 移取血液等液体检材样品 0.2mL，于具盖离心管中，加入 0.4mL乙腈，涡旋 1min、用离心机以不低 于6000r/min 离心 3min，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤，取上清液 作为检材样品提取液 ，供仪器检测。 注：检材样品取样量、提取溶剂体积可根据实际情况调整。 GA/T × × × ×—× × × × 3 7.1.1.2 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1mL，于具盖离心管中， 加pH值6磷酸盐缓冲 溶液 2mL，用乙酸乙酯 5mL 振荡提取约 3min，离心后 分离有机相；再将离心后的待测样品加 pH值9.2的硼砂缓冲溶液 2mL，用乙酸 乙酯 5mL振荡提取约 3min，离心后分离有机相，合并有机相后在 60℃以下浓缩挥干，残留物用 500µ L甲 醇溶解，高速离心后，用 0.22μm的有机微孔滤膜过滤，取上清液 作为检材样品提取液 ，供仪器检测。 注：检材样品取样量、 缓冲溶液体积、 提取溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材 样品 1mL，于具盖离心管中，加 pH值6的磷酸缓冲溶液 5mL，混匀，高速离心， 取上清液过活化好的 固相萃取柱（先依次用甲醇 3mL,水3mL活化），样品流速控制在 0.5mL/min ～ 1.5mL/min ，样品过柱后， 用去离子水 5mL淋洗，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，经乙酸乙 酯6mL洗脱，控制流速为 0.5 mL/min～1.5mL/min，收集洗脱液， 在60℃以下浓缩挥干， 残留物用 500µ L 甲醇溶解，高速离心后，用 0.22μm的有机微孔滤膜过滤，取上清液作为检材样品提取液 ，供仪器检测。 注：检材样品取样量、缓冲溶液体积、洗脱溶剂体积及定容体积可 根据实际情况调整。 7.1.1.4 质控样品制备 取与检材样品等量的相似基质空白样品两份，一份作为空白样品，一份添加质控标准溶液 ，使 SKF 525A含量为 5ng/mL、地西泮 -D5含量为 10ng/mL、氯丙嗪含量为 20ng/mL、烯丙异丙巴比妥 含量为 50ng/mL，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。 注：质控样品添加浓度可参照方法检出限。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1液相色谱－串联质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行 调整： a) 色谱柱： Shim -pack GISS C 18（2.1× 100mm ，1.9μm）或等效色谱柱； 注： Shim -pack GISS 毛细色谱柱是 岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温：