ICS 13.310 CCS A 92 GA 法庭科学 生物检材中巴比妥等 46种 安眠镇静类药物筛选 第1部分：气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Screening methods for 46 hyponotics and sedatives including barbital in biological samples —Part1：GC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × －× × × × 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA/T × × × ×—× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 GA/T × × × ×《法庭科学 生物检材中巴比妥等 46种安眠镇静类药物筛选》分为 2个部分： ——第1部分：气相色谱 -质谱法； ——第2部分：液相色谱 -质谱法。 本文件为GA/T × × × ×的第1部分。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 浙江省公安厅 刑事侦查总队 、公安部物证鉴定中心、 上海市公安局物证鉴定中心、 广东省公安厅刑事技术中心、广西壮族自治区公安厅刑事侦查总队、中国人民公安大学、广州市公安局 刑事技术研究所、杭州市公安局刑事技术研究所 。 本文件主要起草人：傅得锋、孙剑聪、宣宇、于忠山、张云峰、张玉荣、梁晨、裴茂清、张亮、黄 克建、刘晓锋、何洪源、朱焕慧、应剑波 。 GA/T × × × ×—× × × × I 引 言 安眠镇静类药物是毒物分析中常见的一类药毒物，种类多、理化性质差异大。 GA/T ××××的本 部分规定了法庭科学生物检材（血 液、尿液）中巴比妥等 46种安眠镇静类药物的 气相色谱 -质谱筛选方 法，旨在提高分析效率、保证分析质量。 GA/T××××拟由两个部分组成： ——第1部分：气相色谱 -质谱法； ——第2部分：液相色谱 -质谱法。 GA/T × × × ×—× × × × 1 法庭科学 生物检材中巴比妥等 46种安眠镇静类药物筛选 第1部分：气相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材 （血液、尿液） 中巴比妥等 46种安眠镇静类药物的气相色谱 -质谱 （GC-MS）筛选方法。 本文件适用于法庭科学生物检材 （血液、尿液）中 巴比妥等 46种安眠镇静 类药物定性分析。其他检 材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对生物检材样品中 46种安眠镇静类药物 （详见 附录 A）进行提取、净化及浓缩 ，采用气相色谱 -质谱法分析，以保留时间、质谱特征离子和离子丰度 比作为定性判断依据 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇：色谱纯； b) 乙酸乙酯 ：色谱纯； c) 1.0mol/L氢氧化钠水溶液 :称取氢氧化钠 20.0g,加入一定量水溶解并稀释定容至 500mL； d）pH值6的磷酸盐缓冲溶液 ； e) 标准溶液： GA/T × × × ×—× × × × 2 1）标准物质储备液：根据巴比妥等 46种标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用甲醇分 别配制成 1.0mg/ mL的标准物质储备液 ，密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期 12个月。或采 用市售标准溶液； 2）标准物质工作溶液：移取巴比妥等 46种标准物质储备液各适量，用甲醇稀释，分别配制成 100µg/mL的标准物质工作溶液， 置于冰箱中冷冻保存，有效期 6个月；实验中所用其他浓度 的标准物质工作溶液均由标准物质储备液用甲醇稀释得到； 3）质控标准溶液：移取烯丙异丙巴比妥、丙 基解痉素（ SKF 525A）、地西泮 -D5、氯丙嗪 标准物 质储备液各适量，用甲醇稀释，分别配制成 10µ g/mL的质控标准溶液，置 于冰箱中冷冻保存， 有效期 6个月；实验中所 用其他浓度的质控标准溶液均由标准物质储备液用甲醇稀释得到。 注：可根据实际情况 适当调整质控标准溶液中药物的种类。 5.2 材料 材料包括： a) 固相萃取柱： Oasis® HLB、C18或其他等效固相萃取柱 ； 注：Oasis® HLB 柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 具盖离心管。 6 仪器与设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱联用仪 ：配有电子轰击源（ EI）； b) 电子天平：实际 分度值 d≤0.1mg； c) 离心机； d) 振荡器； e) 浓缩器； f) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 2mL，于具盖离心管中 ，用乙酸乙酯 5mL振荡提取约 3min，用离心机以 不 低于 6000r/min 离心 10min，分离有机相；剩余水相 加1.0mol/L氢氧化钠水溶液 0.5mL，重复提取一次， 合并有机相后在 60℃以下浓缩挥干，残留物用 200µL甲醇溶解， 离心后取 上清液，作为检材 样品提取液， 供仪器检测。 注：检材样品取样量、溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整 。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体样品 2mL，于具盖离心管中 ，再加pH值6的缓冲溶液 5mL，用超声波清洗器超 声5min， 用离心机以不低于 6000r/min 离心 5min， 取上清液过活化好的 固相萃取柱 （先依次用甲醇 3mL, 水3mL活化），样品流速控制在 0.5mL/min ～1.5mL/min 。样品过柱后， 用去离子水 5mL淋洗，挤干水GA/T × × × ×—× × × × 3 分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，经乙酸乙酯 6mL洗脱，控制流速为 0.5 mL/min～1.5mL/min，收 集洗脱液，在60℃以下浓缩挥干， 残留 物用 200µL甲醇溶解， 用离心机以不低于 6000r/min 离心 20min， 离心后取 上清液，作为检材样品提取液， 供仪器检测。 注：检材样品取样量、缓冲液体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3质控样品制备 取与检材样品等量的 相似基质 空白样品两份 于具盖离心管中 ，一份作为空白 样品，一份添加 质控标 准溶液，使烯丙异丙巴比妥浓度为 1µ g/mL、SKF 525A浓度为 1µ g/mL、地西泮 -D5浓度为 1µ g/mL、氯丙嗪 浓度为 5µ g/mL，作为添加样品 ，与检材样品平行操作，得到空 白样品提取液和添加样 品提取液 ，供仪 器检测。 注：质控样品添加浓度参照方法检出限。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 以下为气相色谱 -质谱仪参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS柱（ 30m× 0.25mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； 注： DB-5MS毛细色谱柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 80℃保持 3min，以20℃/min 速率升温至 280℃，保持 25min； c) 进样口温度 ：280℃； d) 传输线温度 ：280℃； e) 离子源温度 ：230℃； f) 载气：高纯氦气； g) 柱流量： 1mL/min； h) 溶剂延迟： 3min； i) 进样方式：分流进样，分流比 ：10:1； j) 质量扫描范围： 40amu～500amu； k) 扫描方式： 全扫描(Scan)； l）定性离子： 定性离子参见附录 B。 7.1.2.2 进样 分别吸取 空白溶剂、添加样品 提取液、 空白样品 提取液、检材样品 提取液、质控标准溶液， 按7.1.2.1 仪器条件 进行检测。 进样顺序和进样次数应确保结果有效。 若质控标准溶液不包含检材中检出的目标物， 需吸取相应目标物的标准工作溶液，按 7.1.2.1仪器条件进样分析。 8 结果评价 8.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物色谱峰保