HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T 187－× × × × 代替 GA/T 1 87-1998 法庭科学 生物检材 中敌敌畏和敌百虫检 验 气相色谱-质谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for dichlorvos and trichlorfon in biological samples —GC-MS and LC -MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T 187—× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 GA/T 187 —1998《中毒检材中敌敌畏、 敌百虫的定性及定量分析方法》 ， 与 GA/T 187 — 1998相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： ——修改了标准名称（见封面， 1998年版的封面）； ——修改了范围的有关内容（见第 1章， 1998年版的第 1章） ——增加了液相色谱定性定量分析方法（见第 1章~第8章）； ——修改了规范性引用文件的有关内容（见第 2章， 1998年版的第 2章） ——修改了气相色谱法的原理（见第 4章， 1998年版的第 4章）； ——修改了气相色谱法的试剂（见第 5章， 1998年版的第 5章）； ——修改了气相色谱法的仪器 与器材（见第 6章， 1998年版的第 6章）； ——修改了气相色谱法的定性定量分析（见第 7章， 1998年版的第 7章）； ——删除了薄层色谱法的有关内容（见 1998年版的第 11章~第16章）； ——删除了化学快速检验法的有关内容（见 1998年版的第 17章）； ——修改了附录 A的有关内容（见附录 A，1998年版的附录 A）； ——增加了附录 B的有关内容（见附录 B）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 17 9/SC 1） 提出并归口。 本文件起草单位： 公安部物证鉴定中心 、濮阳市 公安局。 本文件主要起草人： 董林沛、 任昕昕、王瑞花、张梦娟、王爱华、常靖 、于忠山、张云峰、魏春明 。 本标准的历次版本发布情况为： —— GA/T 187 —1998。 GA/T 187—× × × × 1 法庭科学 生物检材 中敌敌畏和敌百虫检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学 领域生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容 等）中敌敌畏的气相色谱 -质谱 （GC-MS）定性检验方法 和敌敌畏、敌百虫的液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量 检验方法 。 本文件适用于法庭科学 领域生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容 等）中敌敌畏的气相色谱 -质谱 定性分析和敌敌畏 、敌百虫 的液相色谱 -质谱定性定量分析。 其他检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品做对照，按平行操作的要求，对生物检材样品进行提取、净化及浓缩，采用 气相色谱 -质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据 ；采用液相色谱 -质 谱法检测 ，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据，以峰面积为依据，采用外 标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱法实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水 ，液相色谱 -质谱法实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括 ： a) 乙酸乙酯 ； b) 二氯甲烷 ； c) 乙腈（色谱纯） ； d) 甲醇； e) 盐酸溶液 ：移取盐酸 （含量 36%~38%）1mL溶于水中 ，并定容至 100mL； f) 0.1%甲酸溶液 ：移取甲酸（色谱纯） 1mL溶于水中 ，并定容至 1000mL； g) 标准溶液； GA/T 187—× × × × 2 1) 1.0mg/mL 标准物质 储备液：根据敌敌畏和敌百虫标准物质的纯度，称取适量，分别 用甲醇配制 1.0mg/mL 敌敌畏和敌百虫标准物质溶液， 密封， 0℃~4℃保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液； 2) 10.0µ g /mL单一标准工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 的敌敌畏和敌百虫 标准物质 储备液各 0.1mL，分别用甲醇配制成浓度为 10.0µ g/mL 的单一标准工作溶液 ，密封，0℃~4℃ 保存。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 10.0µ g /mL标 准工作溶液用甲醇 配制得到。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB柱或等效固相萃取柱； 注： Oasis® HLB 柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 d) 一次性注射器 ； e) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； c) 电子天平 ：分度值d≤0.01mg； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等 固体检材样品 1.0g于具盖离心管中 ， 加入乙酸乙酯 4.0mL，振荡 5min，以不低于 8000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次，合并两 次提取的有机相，置于浓缩器上 45℃浓缩至干，残留物用 甲醇 0.2mL溶解，作为检材样品提取液 ，供GC- MS分析或经0.22μm的有机系微孔滤膜过滤 后，作为检材样品提取液 ，供 LC-MS分析。 注：检材样品取样量、提取溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 蛋白沉淀 移取血液等液体检材样品 0.5mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等 固体检材样品 0.5g于具盖离心管中 ，GA/T 187—× × × × 3 加入 1.5mL乙腈，振荡 10min，用离心机 以不低于 8000r/min 离心 10min，取上清液 经0.22μ m的有机系 微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液 ，供LC-MS分析。 注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等 固体检材样品 1.0g于具盖离心管中， 加入 4mL1%盐酸溶液稀释，振荡 10min，以不低于 8000r/min 离心 10min。取上清液转移至已活化好的固 相萃取柱中 （使用前依次用甲醇、水进行活化） ，上清液过柱流速 不超过 0.5mL/min ，依次用水 1mL、甲 醇/水溶液 (体积比 5:95) 1mL淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，用乙酸 乙酯或二氯甲烷 3mL洗脱，洗脱液流速不超过 0.5mL/min 。收集洗脱液并置于浓缩器上 45℃浓缩至干， 残留物用甲醇 0.2mL溶解，作为检材样品提取液 ，供GC-MS分析或用 0.22μm的有机系微孔滤膜过滤 后， 作为检材样品提取液， 供LC-MS分析。 注：检材样品取样量、定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 单一标准工作溶液 ，使敌敌畏浓度为 1.0µ g/mL （g）（用于 GC-MS分析）或 使敌 百虫、敌敌畏浓度 为20ng/mL（g）（用于 LC-MS分析）， 作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空 白样品提取液和添加样品提取液 ，供仪器检测 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和 不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱柱 （30m×