ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国 公共安全 行业标准 GA/T ××××－×××× 法庭科学 疑似毒品中溴西泮等五种苯骈二 氮杂䓬类毒品检验 液相色谱和液相色谱 - 质谱法 Forensic sciences —Examinationg methods for five benzodiazepines including bromozepam in suspected drugs —LC and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × ×—× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC1 ） 提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、天津市公安局 。 本标准主要起草人： 高利生、张春水 、郑珲、翟晚枫、 王群、常颖、赵阳、 贺剑锋、 刘克林、黄星、 王一、王 蔚昕、赵彦彪、李彭 、杨虹贤、郑晓雨 。 GA/T × × × ×—× × × × 1 法庭科学 疑似毒品中 溴西泮等 五种苯骈二氮杂䓬类 毒品检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学领域疑似毒品中 苯骈二氮杂䓬类 （溴西泮、 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑和三 唑仑）的 液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性检验方法和液相色谱（ LC）定量检验方法。 本标准适用于法庭科学 领域疑似毒品中 苯骈二氮杂䓬类 （溴西泮、 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑和三 唑仑）的定性分析和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4883 —2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 JJF 1059.1 —2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 对疑似毒品样品中的 溴西泮（氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑 或三唑仑）进行提取 。采用液相色谱 -质 谱检测，以保留时间 、质谱特征离子碎片峰 和离子丰度比作为定性判断依据； 采用液相色谱检测， 用标 准曲线法进行定量分析 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 标准溶液 ： 1） 标准物质 溶液：1.0mg/mL 溴西泮（氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑 或三唑仑）标准物质溶液 ； GA/T × × × ×—× × × × 2 2） 标准工作溶液按实验需求分为以下三类： ——定性用标准工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑 仑）标准物质溶液 适量，用甲醇稀释，配制成 1ng/mL的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、 艾司唑仑或三唑仑） 标准工作溶液 。其余浓度定性用标准工作溶液，按实验需求由 1.0mg/mL 的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑仑） 标准物质溶液稀释配 制； ——外标法用标准工作溶液 ：使用 1.0mg/mL 溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑 仑）标准物质溶液 ，用甲醇 逐级稀释，配制成 0.2mg/mL 、0.1mg/mL 、0.02mg/mL 、 0.01mg/mL 、0.002mg/mL 的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑仑）标准工作 溶液； ——内标法用标准工作溶液 ：称取ω-溴苯乙酮 500mg，用甲醇定容到 50mL容量瓶中，配 制成 10mg/mL ω-溴苯乙酮内标储备溶液（置于冰箱中保存，有效期 12个月）。使用 时用甲醇稀释，配制成 0.2mg/mL ω-溴苯乙酮溶液。 内标法用标准工作溶液制备方法 参见附录 A中表 A.1，移取相应体积的 1.0mg/mL溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑 或三唑仑） 标准物质溶液 、0.2mg/mL ω-溴苯乙酮 溶液至 1mL容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，得到终浓度分别为 0.2mg/mL 、0.1 mg/mL、0.02mg/mL 、0.01mg/mL 、 0.002mg/mL 的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑仑） 标准工作溶液。 5.2 材料 材料包括： a） 具盖离心管； b） 有机系微孔滤膜 ：0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a） 液相色谱仪（ LC）：配有二极管阵列 （DAD）或紫外检测器 （UV）； b） 液相色谱 -质谱仪(LC-MS）：配有电喷雾离子源 、三重四极杆质量分析器 ； c） 电子天平： 分度值 d：0.01mg； d） 高速离心机； e） 涡旋振荡器； f） 超声清洗仪； g） 10mL和1mL移液器或移液管； h） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品制备 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲醇， 6000r/min 离心 5min，离心后取出适量上清液稀 释，用 0.22µ m的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 GA/T × × × ×—× × × × 3 同时用LC-MS分析定性用标准工作溶液 进行质量控制。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 进样体积： 2 µL； b） 色谱柱： poroshell 120 C 18 （3.0mm×50mm×2.7μm ）或其他等效柱 ； 注：poroshell 120 C 18柱为Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c） 流动相：A：水， B：甲醇； d） 梯度程序： 见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 50% 50% 5 5% 95% 5.5 5% 95% e） 流速： 0.3mL/min ； f） 离子源：电喷雾离子源； g） 扫描方式：正离子模式； h） 毛细管电压： 4000V； i） 干燥气： 10mL/min； j） 干燥气温度： 350℃； k） 雾化气： 25psi； l） 后处理时间（平衡时间） ： 3min； m） 后处理流速： 0.4mL/min ； n） 定性离子对和 Fragmentor 电压、碰撞能量 (CE)：见表 2。 表 2 质谱参考 条件 名称 母离子 子离子 Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV 溴西泮 316.0 182.0 120 36 209.0 28 氯氮䓬 300.1 227.1 110 26 241.0 18 地西泮 285.1 193.1 125 36 154.0 28 艾司唑仑 295.1 267.0 125 27 205.0 40 三唑仑 343.0 308.0 150 30 315.0 30 GA/T × × × ×—× × × × 4 7.1.2.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、定性用标准工作溶液和样品提取液适量，按 7.1.2.1条件进样分析。 7.1.3 记录 分别记录标准物质和 样品中目标物 的保留时间 、定性离子对 及离子丰度比。 7.2 定量分析 7.2.1 外标法 7.2.1.1 标准工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1条件分析 外标法用标准工作溶液 ，以溶液中目标物的峰面积值为纵坐标，目标物浓度 为横坐标， 绘制成线性范围为 0.002mg/mL～0.2mg/mL的溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑仑） 标准工作曲线。 7.2.1.2 标准工作曲线监测 采用浓度为 0.01mg/mL和0.2mg/mL的外标法用 标准物质溶液作为监测样品，建立标准工作曲线时， 每个监测样品各分析 10次，计算 溴西泮（ 氯氮䓬、地西泮、艾司唑仑或三唑仑） 峰面积的平均值及标准 偏差（ SD）。每次检验前先分析监测样品， 监测样品的结果在平均值 ± 3SD之间，标准工作曲线有效； 监测样品的结果超出平均值 ± 3SD，应重新绘制标准工作曲线。 7.2.1.3 样品提取 平行称取样 品2份各约 10mg于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度， 则平行称取样品 6份） ， 加入 10mL甲醇， 6000r/min 离心 5min，离心后取出适量上清液稀释，用 0.22µ m的有机系 微孔滤膜过滤 ， 供LC-DAD或LC-UV分析。可根据实验情况调整样