ICS 13.310 A 92 GA 中 华人民 共和国 公共安 全 行业 标 准 GA/T ××××－×××× 法庭科学 疑似毒品中甲卡西酮、卡西酮、 4-甲基甲卡西酮检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for methcathinone,cathinone and mephedrone in suspected drugs —LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本部分按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC1 ） 提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心，福建省 公安厅。 本标准主要起草人：常颖，高利生，李航麒 ，郑珲，张春水，赵阳，贺剑锋，翟晚枫，黄星 ，刘克 林，李彭 ，赵彦彪，郑晓雨，杨虹贤， 徐鹏，钱振华等。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 疑似毒品中甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学领域疑似 毒品中甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮的液相色谱 -质谱 （LC-MS）定性检验方法和 定量检验方法。 本标准适用于 法庭科学领域疑似 毒品体外样品中甲卡西酮、 卡西酮和 4-甲基甲卡西酮的定性分析和 定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4883 —2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 JJF 1059.1 —2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 对疑似毒品样品中的 甲卡西酮（结构式参见 附录A中图A.1） 、卡西酮（结构式参见图 A.2）和 4- 甲基甲卡西酮（结构式参见图 A.3）进行提取 。采用液相色谱 -质谱检测，以保留时间 、质谱特征离子 碎片峰和离子丰度比 作为定性判断依据 ，用外标单点 法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 甲酸； d） 标准溶液： GA/T × × × × —× × × × 2 1） 标准物质 溶液：1.0mg/mL 甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮等三种 标准物质溶液； 2） 标准工作溶液： 分别移取甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮 等三种标准物质溶液适量 ， 用甲醇稀释，配制成 0.1μg/mL 的甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮标准工作溶液 。 5.2 材料 材料包括： a） 具盖离心管； b） 有机微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a） 液相色谱仪（ LC）：配有二极管阵列（ DAD）或紫外检测器（ UV）； b） 液相色谱 -质谱仪（ LC-MS）：配电喷雾离子源、 三重四极杆质量分析器 ； c） 电子天平：分度值 d：0.01mg； d） 离心机； e） 涡旋振荡器； f） 10mL、1mL和100μL移液器或移液管； g） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲醇，密封并振荡 10min，6000r/min 离心 5min，离心 后取出适量上清液稀释，用 0.22µm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 同时用 LC-MS分析标准工作溶液进行质量控制。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： C18柱（100mm× 2.1mm, 1.8 μm）或其他等效柱 ； b） 流动相： A：0.1%甲酸溶液，B：乙腈； c） 梯度程序： 见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min A B 0 90% 10% 2.8 90% 10% GA/T × × × × —× × × × 3 3.0 60% 40% 5.0 60% 40% 5.1 90% 10% d） 柱温： 35°C； e） 进样体积： 5µL； f） 流速： 0.3mL/min ； g） 离子源：电喷雾离子源（ ESI）； h） 检测方式：正离子模式； i） 扫描模式：多反应监测 MRM； j） 雾化气、干燥气和碰撞气：均为高纯氮气； k） 雾化气压力： 25 psi； l） 干燥气温度： 350℃； m） 干燥气流量： 10L/min； n） 定性定量离子和毛细管出口电压 Fragmentor ，碰撞能量（ CE）见表 2，相关图谱参见附录 B。 表2 质谱参考 条件 名称 定量离子对 定性离子对 毛细管出口电压 V 碰撞能量 eV 甲卡西酮 164.2＞131.1 164.2＞131.1 85 20 164.2＞77.2 50 卡西酮 150.1＞117.0 150.1＞117.0 80 25 150.1＞105.1 20 4-甲基甲卡西酮 178.2＞160.2 178.2＞160.2 85 10 178.2＞145.1 20 7.1.2.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、标准工作溶液和样品提取液适量 ，按 7.1.2.1条件进样分析。 7.1.3 记录 分别记录标准物质和 样品中目标物 的保留时间 、定性离子对 及离子丰度比 。 7.2 定量分析 7.2.1 含量范围预分析 预分析的目的在于要对样品中的 甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮含量进行初测，以计算准确定 量分析时所用样品的称量重量， 从而保证准确定量时样品溶液中目标物的最终浓度尽可能接近所使用标 准工作液的浓度。 如果样品溶液中目标化合物的浓度过高，可适当减少样品称量重量，或将样品提取液用甲醇稀释后 进行分析。 GA/T × × × × —× × × × 4 如果样品溶液中目标化合物的浓度过低，可适当增加样品称量重量，或将样品提取液挥干、定容后 进行分析。 按照公式（ 1）计算样品中目标组分的百分含量。 ()0 1 2 3 0201000C A V V V w A V m   + =  ………………………………（ 1） 式中： w—样品中甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的百分含量 ，用百分比（ %）表示； C0—标准工作液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的浓度，单位为 毫克每毫升（ mg/mL）； A—样品溶液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的色谱峰面积值； V1—样品溶液初次定容体积，单位为 毫升（ mL）； V2—从V1中移取样品溶液的体积，单位为 毫升（ mL）； V3—将V2稀释时加入甲醇的体积，单位为 毫升（ mL）； A0—标准工作液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的色谱峰面积值； m—用于测定的样品的称量重量，单位为 毫克（ mg）。 7.2.2 准确定量 分析 7.2.2.1 称量重量的计算 根据预分析中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数 （样品提取操作参数选择参见 附录 C），并按照公式（ 2）计算出样品称量重量 （m）。 0100C V Dm w= %………………………………… （2） 式中： m—称量重量，单位为 毫克（ mg）； C0—标准工作液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的浓度，单位为 毫克每毫升（ mg/mL）； V—初次定容体 积，单位为毫升（ mL）； D—稀释倍数； w—样品中甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的预分析百分含 量，用百分比（ %）表示。 7.2.2.2 样品提取 根据 7.2.2.1计算结果，平行称取样品 2份于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度，则平行 称取样品 6份），根据预分析含量范围，加入相应初次定容体积的甲醇。密封并振荡 10min，振荡均匀 后用 0.22µ m有机系微孔滤膜过滤 ；如果样品溶液需要稀释，移取 1mL样品提取液至另一试管中，按照稀 释倍数进行稀释定容，离心后取上清液 供LC-MS分析。 7.2.2.3 含量计算 按照公式（