ICS 13.310 A 92 法庭科学 唾液中苯丙胺 等四种苯丙胺类 毒品和氯胺酮 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for ketamine and four amphetamines including amphetamine in saliva samples—LC-MS GA 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 ICS 13.310 A 92 GA GA/T × × × × －× × × × 中华人民共和国公安部 发布 ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 GA ××××—×××× I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国 刑事技术 标准化技术委员会 毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准负责起草单位：公安部物证鉴定中心 、上海市公安局交通警察总队 。 本标准参加起草单位： 山东省分析测试中心 、司法鉴定科学 研究院、山西医科大学 、国家道路交通 安全产品质量监督检验中心、深圳威尔电器有限公司、广州万孚生物技术股份有限公司、浙江省台州市 公安局交通警察局 。 本标准主要起草人： 张云峰、 侯心一、 陈跃、卓先义、施妍、 崔冠峰、 任昕昕、贠克明、尉志文、 王芳琳、于忠山 、向平、陆宇、李毅、陈勇、刘晓云 。 GA ××××—×××× 1 法庭科学 唾液中苯丙胺等四种 苯丙胺类 毒品和氯胺酮 检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 唾液中甲基苯丙胺 （MA）、苯丙胺（AM）、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺 （MDMA）、3,4-亚甲二氧基苯丙胺（ MDA）和氯胺酮 的液相色谱 -质谱（LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 唾液中 MA、AM、MDMA、MDA和氯胺酮的定性分析和定量分析。 其他 可疑样品中 MA、AM、MDMA、MDA和氯胺酮的定性分析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对唾液样品进行提取、净化及浓缩 ，采用液相 色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、 质谱特征离子和 离子丰度比作为定性判断依据； 以峰面积为依据 ， 采用外标法或内标法 进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 分析纯，试 剂包括： a) 乙腈（色谱纯） ； b) 甲醇（色谱纯） ； c) 甲酸（色谱纯） ； d) 乙醚（色谱纯） ； e) 乙酸胺（色谱纯） ； f) 0.1%甲酸水溶液； g) 1%氢氧化钠溶液； h) 硼砂缓冲液 （pH 值9.2）； i) 20mmol/L 乙酸铵和 0.1%甲酸缓冲液：称取 1.54g乙酸铵置于 1000mL容量瓶中， 加入 1.0mL 甲酸溶液， 加水定容 溶解并稀释至 1000mL； j) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液： 根据标准物质纯度和盐型换算后 ，各称取适量， 分别用甲醇配制GA ××××—×××× 2 1.0mg/mL MA、AM、MDMA、MDA和氯胺酮标准物质溶液，置于冰箱中 冷藏保存。有效 期12个月。或采用市售标准溶液； 2) 10.0µg/mL混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的MA、AM、MDMA、MDA和氯胺酮标准 物质溶液各 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个 月。实验中所用其 他浓度的混合标准工作溶液均由 10.0µg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得 到； 3) 10.0µg/mL单一标准工作溶液： 分别移取 1.0mg/mL 的甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDMA、MDA 和氯胺酮标准物质溶液各 0.1mL，分别用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏 保存。有效期 3个月。实验中所用其 他浓度的单一标准工作溶液均由 10.0µg/mL标准物质 溶液用甲醇稀释得到 ； 4) 1.0mg/mL 内标溶液：根据内标物 甲基苯丙胺 -D5（或甲氧那明 ）的纯度和盐型换算后，用 甲醇配制 1.0mg/mL 内标溶液，混匀，密封， 置于冰箱中冷藏保存 。有效期 12个月。或采 用市售内标溶液； 5) 10.0µg/mL内标工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的内标溶液 0.1mL， 用甲醇定容至 10mL， 混匀， 密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用其 他浓度的内标工作溶液均由 10.0µg/mL内标溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括 ： a) 唾液采集管 ； b) 具盖离心管； c) 有机系微孔滤膜： 0.22µm。 6 仪器与设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源 （ESI）和三重四极杆质量分析器 。 b) 振荡器； c) 电子天平 ； d) 离心机； e) 恒温水浴锅 ； f) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 蛋白沉淀 移取唾液检材样品 ，8000r/min离心 30min，取上清液 100μL于具盖离心管中 （若采用内标法，则 加入 1µ g/mL甲基苯丙胺 -D5或甲氧那明 内标工作溶液10µL，使内标浓度为 0.1µ g/mL，混匀），加入 乙腈 400μL，振荡 15min，3000r/min 离心 15min，用0.22µ m的有机系微孔 滤膜过滤， 作为检材样品提 取液供仪器分析。 7.1.1.2 液液萃取 GA ××××—×××× 3 移取唾液检材样品 ，8000r/min 离心 30min，取上清液 200μL于具盖离心管中 （若采用内标法，则 加入 1µ g/mL甲基苯丙胺 -d5或甲氧那明 内标工作溶液10µ L，使内标浓度为 0.1µ g/mL，混匀） ，加入 50L0.1%氢氧化钠溶液 及1mL硼砂缓冲液，混匀后再加入 3mL乙醚，涡旋 1min，2500r /min离心 3min， 移取有机 相置于60℃水浴下挥干。 残留物用 乙腈 /含20mmol/L 乙酸胺和0.1%甲酸的缓冲液（ 体积比 70:30）混合溶液 200μL复溶，作为检材样品提取液供 仪器分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量离心后的 空白唾液样品两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加 苯丙胺类和氯 胺酮标准物质 ，作为添加样品 （添加样品的浓度为 2ng/mL），与检材样品平行操作，得到空白样品提 取液和添加样品提取液供 LC-MS分析。 若采用内标法，不做添加样品，空白样品（不加内标）与检材平行操作， 得到空白样品提取液 ，供 LC-MS分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱参考条件一 ： 1) 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T3 C18柱，(2.1mm× 100mm，1.7μm)或等效色谱柱； 注：ACQUITY UPLC HSS T 3 C18柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2) 流动相： A：乙腈， B：0.1%甲酸水溶液； 3) 柱温： 35℃； 4) 流速： 0.5mL/min； 5) 洗脱方式：梯度洗脱，梯度见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min A B ---- 10% 90% 0.3 10% 90% 1.5 30% 70% 2.0 50% 50% 2.5 90% 10% 3.0 90% 10% 3.1 10% 90% 4.0 10% 90% 6) 离子源：电喷雾电离源 （ESI）； 7) 检测方式： 正离子； 8) 扫描方式： 多反应离子监测（MRM）； 9) 毛细管电压： 3.00kV； 10) 离子源温度： 150℃； 11) 脱溶剂气温度： 350℃； 12) 脱溶剂气流量： 700L/h； 13) 锥孔气流量： 50L/h； 14) MS参考条件 （定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量等 ）见表 2。 GA ××××—×××× 4 表2 MS参考条件 名 称 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV