ICS 13.310 A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA 法庭科学 毛发、 血液中四氢大麻酚和四氢 大麻酸检验 气相色谱 -质谱法 Forensic science s—Examination method s for tetrahydrocannabinol and tetrahydrocannabinol -9-carboxylicacid acid in hair and blood samples — GC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × －× × × × GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心、中国药品生物制品检定所 。 本标准主要起草人：张云峰、常靖、 崔巍、刘耀、南楠、朱军、于忠山、陈华、左宁 。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 毛发、血液中 四氢大麻酚和四氢大麻酸 检验 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 毛发、血液中四氢大麻酚 （Δ9-THC）和四氢大麻酸 （Δ9-THC -COOH）的气 相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定量 检验方法 。 本标准适用于 法庭科学 毛发、血液中四氢大麻酚 和四氢大麻酸的 定性分析和定量分析。其他可疑 样 品中四氢大麻酚 和四氢大麻酸 的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对毛发、血液进行提取、净化 、浓缩及衍生化 ， 采用气相色谱 -质谱法定性定量，以 目标物各组分衍生化产物的 保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对 丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法 或内标法 进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水 。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙酸乙酯 ； c) 正己烷； d) 乙酸； e) 生理盐水 ； f) 乙腈； g) 0.1%十二烷基硫酸钠水溶液； h) 1mol/L氢氧化钠溶液 ：称取 4.0g氢氧化钠，用 水溶解并稀释至100mL； GA/T × × × × —× × × × 2 i) 正己烷 /乙酸乙酯 (体积比9:1)混合溶剂 ； j) 衍生化试剂： 五氟丙醇（ PFPOH）或五氟丙酸酐（ PFPA）或其他合适的酰化衍生化试剂 ； k) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：采用市售标准溶液 ； 2） 10.0g/mL标准物质工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 的四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准物质溶液 各0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL的单一标准工作溶液， 密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 1月。实验中所用其他浓度单一标准工作溶液均由 10.0µg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到； 3） 1.0mg/mL 内标溶液：根据 甲芬那酸 内标物（或其他等效内标物）的纯度， 称取适量， 用 甲醇配制 1.0mg/mL 甲芬那酸 内标溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 2个月。或采用市 售标准溶液 ； 4） 10.0g/mL内标工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的甲芬那酸 内标物质溶液0.1mL，用甲醇稀释 至10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL的内标工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 1月。实验中所用其他浓度 内标工作溶液均 由10.0g/mL内标溶液用甲醇稀释得到 。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具塞玻璃试管 ； b) 具盖离心管 ； c) 一次性注射器 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击离子源（ EI）及负化学离子源 （NCI）； b) 电子天平； c) 振荡器； d) 离心机； e) 超声波清洗器； f) 移液器； g) 浓缩器； h) 烘箱。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 毛发样品 7.1.1.1.1 毛发清洗 GA/T × × × × —× × × × 3 称取毛发检材样品约 200mg，将毛发剪成长约 2cm碎段，置于小烧杯中，依次用 甲醇 10mL、水 10mL、甲醇 10mL各振荡清洗 2min，清洗 3次以上， 自然晾干，于干净 铝箔纸中密封后保存。同时， 收集最后 一次清洗毛发的甲醇溶液， 置于浓缩器上 45℃浓缩至干， 残留物按 7.1.1.1. 3进行衍生，供 GC 或GC-MS分析，结果呈阴性证明毛发外部无污染，否则重新清洗毛发，直至最后清洗溶液呈阴性。 7.1.1.1.2 液液提取 将晾干后的毛发检材样品 铰碎至 1mm～2mm左右（或用研磨仪研碎） ，称取 50mg置于玻璃试管中 （若采用内标法 ，则再加入内标 1.0g/mL甲芬那酸 30L，混匀），加入 1mol/L氢氧化钠 溶液 1mL，， 置于烘箱中 95℃加热，至毛发样品全部溶解。冷却 ，将样品转移至具盖离心管中 ，加入乙酸 1.0mL， 混匀，调pH值至3.5，8000r/min 离心 10min，取上清液， 加入正己烷 /乙酸乙酯 (体积比 9：1)混合溶剂 5mL，超声 5min，8000r/min 离心 10min，提取有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 。置于 浓缩器上 35℃浓缩至干，残留物按 7.1.1.1. 3进行衍生。 7.1.1.1.3 衍生化 取7.1.1.1.3中待衍生残留物， 加入 PFPA 100L或PFPOH 75L，置于烘箱中 70℃衍生化 30min。 冷却，在浓缩器上 35℃浓缩至干 ，用乙酸乙酯 50L溶解，作为检材样品衍生液供 GC-MS分析。 7.1.1.1.4 毛发质控样品制备 称取清洗晾干后的等量空白毛发 样品两份，一份作为空白样品 ，一份添加四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准物质 各100ng作为添加样品 ，与检材平行操作， 得到空白样品衍生液和添加样品衍生液供仪器 分析。 若采用内标法 ，可不做添加样品 ，空白样品 （不加内标）与检材平行操作，同时做内标物质 和标准 物质的衍生化，供仪器分析。 7.1.1.2 血液样品 7.1.1.2.1 血液提取 移取血液检材样品 1.0mL于具盖离心管中 ，（若采用内标法 ，则加入内标 1.0g/mL甲芬那酸 （ MFA） 50L，混匀），加乙腈 1mL，振荡 15min，8000r/min 离心 10min，取上清液， 加10%乙酸 0.4mL、生理 盐水 2mL，混匀后调 pH值至3.5，8000r/min 离心 10min，取上清液，加入有机相正己烷 /乙酸乙酯 混合 溶剂（体积比为 9:1）5mL，振荡 5min，8000r/min 离心 10min，取有机相 4.5mL并转移至玻璃试管中， 在浓缩器上 35℃下浓缩至 约1mL，定量转移至 玻璃试管中， 35℃下快速浓缩至干 。残留物需按7.1.1.2.2 进行衍生。 7.1.1.2.2 衍生化 在7.1.1.2.1的残留物中， 加入 PFPA 20µL和PFPOH 5µ L，置于烘箱中 70℃衍生化 30min，冷却， 在浓缩器上 35℃浓缩至干 ，用乙酸乙酯 50µ L溶解，作为检材样品衍生液供 GC-MS分析。 7.1.1.2.3 血液质控样品制备 取等量空白血液 两份于具盖离心管中 ，一份作为空白样品， 一份添加 四氢大麻酚和四氢大麻酸 标准 物质作为添加样品 （添加样品的浓度为 50ng/mL），与检材平行 操作，得到空白样 品衍生液和添加样品 衍生液供仪器分析。 若采用内标法 ，可不做添加样品 ，空白样品 （不加内标）与检材平行操作，同时做内标物质 和标准 物质的衍生化，供仪器分析。 GA/T × × × × —× × × × 4 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等实际情况进行调整： a) 离子源：电子轰击离子源（ EI）或负化学离子源（ NCI）； b) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱柱 （30m× 0.25mm× 0.25 m）或等效色谱柱 ； 注：DB-5MS为Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的