ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 毛发、 血液中吗啡和单乙酰吗啡 检验 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences—Examination methods for morphine and acetylmorphine in hair and blood samples —GC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T ××××—×××× I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1）提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心、 中国人民公安大学 、重庆市公安局物证鉴定中心、上海市 公安局刑事科学技术研究管理中心。 本标准主要起草人：张云峰、 常靖、刘耀、孟品佳、朱军、于忠山、崔巍、王俊伟、张玉荣、王绘 军、张潮、张松、张忠、罗敬峰、王立 春。GA/T ××××—×××× 1 法庭科学 毛发、血液中吗啡 和单乙酰吗啡 检验 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学毛发、血液中 吗啡和单乙酰吗啡 的气相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定量 检验 方法。 本标准适用于 法庭科学 毛发、血液中吗啡和 单乙酰吗啡 的定性分析和定量分析。 其他可疑 样品中吗 啡和单乙酰吗啡 的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对毛发、血液样品进行提取、净化、浓缩 及衍 生化，采用气相色谱 -质谱法定性定量， 以目标物各组分 或各目标物的 衍生化产物的 保留时间 、质谱特 征离子碎片峰 和相对丰度比 作为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试 剂均为分析纯，试剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 甲酸； d) 三氯甲烷 ； e) 异丙醇； f) 正庚烷； g) 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 （pH值6.0）： 1) 0.2mol/L 磷酸二氢钾 溶液：称取 2.72g KH 2PO 4，用水溶液并稀释至 100mL； 2) 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液 ：称取 0.8g 氢氧化钠 ，用水溶解并 稀释至100mL； GA/T ××××—×××× 2 3) 0.1mol/L 磷酸二氢钾（ KH 2PO4）缓冲液（pH值6.0）：量取 10mL 0.2 mol/L 磷酸二氢钾 溶液与 1.0mL 0.2 mol/L 氢氧化钠 溶液，混匀，加水 9mL，混匀，用0.1m ol/L 氢氧化钠 溶液或 0.1 mol/L HCl 溶液调 pH值至 6.0； h) 0.5mol/L Tris 缓冲液（pH值6.2）； i) N-甲基 -双三氟乙酰胺（ MBTFA）； j) N-甲基 -N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺（ MSTFA）； k) N-O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（ BSTFA）； l) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液： 根据吗啡和单乙酰吗啡 标准物质的纯度和盐型换算后， 称取适 量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 吗啡和单乙酰吗啡 标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 6个月。或采用市售标准溶液； 2） 0.05mg/mL 单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 吗啡或单乙酰吗啡 标准物质溶液 各0.5mL， 用甲醇稀释并定容至 10mL，得到浓度 为0.05mg/mL吗啡和单乙酰吗啡的 单一标准工作溶 液，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 3个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作 溶液均由 0.05mg/mL 标准工作液用甲醇稀释得到； 3） 1.0mg/mL 内标溶液： 根据 吗啡 -D3内标或乙基吗啡 内标物的纯度和盐型换算后， 称取适量 ， 用甲醇配制 1.0mg/mL 吗啡 -D3或乙基吗啡 内标溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个 月。或采用市售标准溶液； 4） 0.05mg/mL 内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 内标溶液 0.5mL，用甲醇稀释并定容至 10mL， 得到浓度为 0.05mg/mL吗啡 -D3或乙基吗啡的内标工作溶液 ，置于冰箱中冷藏保存。有效 期3个月。实验中所用其他浓度的 内标溶液均由 0.05mg/mL 内标工作溶液用甲醇稀释得 到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管 ； c) 烧杯； d) 固相萃取柱： Oasis® MCX固相萃取 柱或其他等效固相萃取柱 ，使用前 依次用甲醇 、pH值6.0 的磷酸盐缓冲液 活化。 注： Oasis®MCX柱是 Wate rs公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击 源（ EI）； b) 离心机； c) 电子天平； d) 振荡器； e) 研磨仪； f) 移液器； GA/T ××××—×××× 3 g) 超声波清洗器； h) 浓缩器； i) 烘箱； j) 微波炉。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 毛发样品 7.1.1.1.1 毛发清洗 称取毛发检材样品 约200mg，剪成长度约为2cm的碎段，置 于小烧杯中，依 次用甲醇 10mL、水 10mL、甲醇 10mL振荡清洗 2min，清洗 3次以上， 自然晾干，于干净铝箔纸内密封后冷藏保存。同时， 收集最后 一次清洗毛发的甲醇溶液， 置于浓缩器上浓缩至干， 残留物按 7.1.1.1.5进行衍生，供 GC-MS 分析，结果呈阴性证明毛发外部无污染，否则重新清洗毛发，直至最后清洗溶液呈阴性。 7.1.1.1. 2 毛发水解 将晾干后的毛发样品用研磨仪研碎， 铰碎至 1mm～2mm左右，称取 50mg，（若采用内标法，则 加入 0.05mg/mL 吗啡 -D3或乙基吗啡内标物 工作溶液 2µ L，混匀），加入甲醇 1mL，60℃下超声水解 2h。 7.1.1.1.3 液液提取 取7.1.1.1.5水解后的毛发冷却至室温， 调pH值9.0， 加入三氯甲烷 /异丙醇 /正庚烷（体积比 50:17:33） 混合溶剂 8mL，混匀，超声 10min，8000r/min 离心 10min，分离有机相， 置于浓缩器上 45℃浓缩至干 ， 残留物按 7.1.1.1.5进行衍生。 7.1.1.1.4 固相萃取 取7.1.1.1.5水解后的毛发冷却至室温 ，加入 pH值6.0的磷酸盐缓冲液 3mL，8000r/min 离心 10min， 取上清液 转移至活化好的固相萃取柱中 ，控制流速 为0.5mL/min 过柱，依次用水 1mL、0.1mol/L 盐酸 溶液 1mL、甲醇 1mL淋洗，弃去淋洗液， 挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，用二氯甲烷 /异 丙醇 /氨水（体积比 为80:20:5）混合溶剂 3mL洗脱，收集洗脱液并 置于浓缩器上浓缩至干 ，残留物 按 7.1.1.1.5进行衍生。 7.1.1.1.5 衍生化 取7.1.1.1.3和7.1.1.1.4中待衍生残留物 ，加乙酸乙酯 80µ L，MBTFA或MSTFA20µ L ，混匀， 在微 波炉功率为 450W下加热 2min（或于60℃烘箱中加热 30min），冷却至室温 ，作为检材样品衍生液， 供 GC-MS分析。 7.1.1.1.6 毛发质控样品制备 取清洗晾干后的等量空白毛发 两份于具盖离心管中 ，一份作为空白样品 ，一份添加吗啡、单乙酰吗 啡标准物质作为添加样品（添加样品的浓度为 2ng/mg），作为添加样品与 检材平行操作，得到空白样GA/T ××××—×××× 4 品衍生液和添加样品衍生液供仪器分析。 若采用内标法，可不做添加样品，空白样品（不加内标）与检材平行操作，同时 做内标物质 和标准 物质的衍生化， 供仪器分析。 7.1.1.2 血液提取 7.1.1.2.1 液液萃取 移取血液检材样品 1.0mL于具盖离心管 中，（若采用内标法，则加入 内标吗啡 -D3或乙基吗啡内标 物工作溶液 ，使其浓度为 100ng/mL，混匀），加入 0.1mol/LpH 值6.0磷酸盐缓冲液