ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺和矮壮素检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for mepiquat and chlormequat in blood and urine samples—LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1 ）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 ，浙江省公安厅 ，司法部司法鉴定科学技术研究所 ，江西省 公安厅。 本标准起草人：王炯、 张云峰，傅得锋、宣宇、王洪宗。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺和 矮壮素检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺和矮壮素的液相色谱 -质谱（ LC-MS）检验方法。 本标准适用于 法庭科学 血液、尿液 中的缩节胺和矮壮素的定性分析和定量分析。其他可疑 样品中缩 节胺和矮壮素 的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 血液、尿液 样品样进行提取 及净化，采用液 相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和 相对丰度比作为定性判断依据； 以峰面 积为依据，采用外标法 进行定量分析 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符 合GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 乙腈（色谱纯）； b) 甲醇（色谱纯）； c) 甲酸（色谱纯） ； d) 甲酸铵（色谱纯）； e) 氨水； f) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL标准物质溶液：根据缩节胺和矮壮素标准物质的纯度 ，各称取适量， 分别用甲 醇配制 1.0mg/mL缩节胺和矮壮素标准物质溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准 溶液； 2) 0.1mg/mL 混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的缩节胺和矮壮素 标准物质溶液各 1.0mL， 用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用 其 他浓度的混合标准工作 溶液均由 0.1mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到 ； GA/T× × × × —× × × × 2 3) 10.0µ g/mL 缩节胺和矮壮素 单一标准工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 的缩节胺和矮壮素 标准物 质溶液各 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0µ g/mL 的单一标准工作 溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用 其他浓度的单一标准工作 溶液均由 10.0µ g /mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® WCX固相萃取柱 或其他等效固相萃取柱 ，使用前依次用 3mL甲醇、 3mL pH值为8的氨水活化 ； 注： Oasis® WCX柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 d) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 固相萃取装置 ； c) 离心机； d) 移液器； e) 振荡器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 固相萃取 准确移取血液、尿液检材样品1mL于具盖离心管中 ，用4倍体积 pH值为 8的氨水稀释，振荡 10min， 8000r /min离心 30min，上清液转移至已活化好的固相萃取柱中 ，控制上清液过柱流速为 0.5mL/min ，依 次用3mL水、 3mL甲醇淋洗， 弃去淋洗液 ，挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱2min，精密吸取 3mL 甲酸 /水/乙腈（体积比 2:50:48）混合溶液洗脱 ，收集洗脱液 ，用有机系微孔滤膜 过滤，作为检材样品提 取液，供仪器 分析。 7.1.1.2 质控样品的制备 取等量相似基质的空白样品 （若无相似基质空白 样品可用血液替代） 两份于具盖离心管中 ，一份作 为空白样品 ，一份添加 缩节胺或矮壮素 标准物质，作为添加样品 （添加样品浓 度为20ng/mL），与检材样 品平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 （液相色谱 -质谱条件） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： GA/T× × × × —× × × × 3 a) 色谱柱： BEH HILIC柱（2.1mm×50mm，1.7μm）或等效色谱柱 ； 注： BEH HILIC 柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效 产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温：30℃； c) 流动相： A：乙腈，B：5mmol/L甲酸铵水溶液（甲酸调 pH值至 3.5）； d) 洗脱方式：梯度洗脱， 梯度见表 1； e) 流速： 0.5mL/min； f) 进样体积： 2μL； 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B --- 0.5 90% 10% 1.5 0.5 50% 50% 2.2 0.5 50% 50% 2.5 0.5 90% 10% 4 0.5 90% 10% g) 离子源：电喷雾电离源（ ESI）； h) 检测方式 ：正离子； i) 扫描方式： 多反应离子监测（ MRM）； j) 雾化气、脱溶剂气：氮气； k) 碰撞气：氩气 ； l) 离子源温度： 150℃； m) 雾化气温度： 350℃； n) 脱溶剂气流量： 750L/hr； o) 锥孔气流量： 50L/hr； p) MS参考条件（定性离子、定量离子、锥孔电压、碰撞能） 见表 2。 表2 MS质谱条件 名称 定性离子 对 定量离子 对 锥孔电压 V 碰撞能 eV 矮壮素 122.0>58.8 122.0>58.8 34 18 122.0>62.9 18 缩节胺 114.0>58.0 114.0>98.2 44 20 114.0>98.2 20 7.1.3 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标 准工作溶液，按 7.1.2的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 GA/T× × × × —× × × × 4 7.2.1 样品提取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～5.0mL两份，按7.1.1进行操作。 另取等量 相似基质的空白样品 三份，其中两份分别添加 缩节胺和 矮壮素标准物质，作为添加样品 （添 加样品中目标物含量应为检材 样品中目标物含量的 (100± 50)% ），另一份 作为空白样品，与检材 样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按7.1.2规定的条件进行 。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2的分析条件每个样品进样分析 2～3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品 提取液平行进样 2～3次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样 添样添 样 VMAVMAW= ................................ ................................ ......... (1) 式中： W－检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （µ g/g）或微克每毫升（ µ g/mL）； A样－检材样品提取液 中目标物峰面积平均值； M添－添加样