ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 血液、尿液 中百草枯 检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for paraquat in bloo d and urine samples—GC and GC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：中国刑事警察学院 。 本标准起草人： 张婷、朱昱、陈学国、宋辉、邢丽梅、姜兆林、邹宁、齐宝坤 。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 血液、尿液 中百草枯 检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 血液、尿液中百草枯的气相色谱（ GC）和气相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定 量检验方法。 本标准适用于 法庭科学 血液、尿液中百草枯的定性分析和定量分析。其他可疑 样品中百草枯的定性 分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求 ，对生物检材进行提取、净化 、衍生化，采用气 相色谱法 或气相色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断 依据；以峰面积为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 环己烷； b) 6%高氯酸水溶液：取 72%高氯酸溶液 10mL，加入水110mL混匀； c) 饱和氢氧化钠溶液 ； d) 20%硼氢化钠溶液：称取硼氢化钠固体 2.0g，加水 8.0mL溶解并混匀 （现用现配 ）； e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL标准物质溶液：根据百草枯标准物质的纯度， 称取适量， 用水配制 1.0mg/mL 百草枯标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月； 2) 0.1mg/mL标准工作 溶液：移取 1.0mg/mL 的百草枯标准 物质溶液 1.0mL，用水稀释并定 容至 10mL，配制成 0.1mg/mL 百草枯标准 物质工作溶液， 置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。实验中所用 其他浓度标准工作溶液均由 0.1mg/mL标准物质溶液用 水稀释得到 ； GA/T × × × × —× × × × 2 3) 1.0mg/mL内标溶液：根据 乙基百草枯 内标物质的纯度，称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 内标物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 12个月； 4) 0.1mg/mL内标工作溶液： 移取 1.0mg/mL的乙基百草枯 内标溶液 1.0mL，用水稀释并 定容 至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 6个月。实验中所用其他浓度的内 标溶液均由 0.1mg/mL内标溶液用甲醇稀释得到 ； 5) 0.1mg/m L基质标准 溶液：取与检材基质相同的空白样品 ，按7.1.1.1样品提取方式 提取， 得上清液，用上清液配制 成0.1mg/mL百草枯基质标准物质 溶液。现配现用 。其他浓度的 基质标准物质溶液 由0.1mg/mL基质标准溶液 用上清液稀释得到 ； 6) 0.1mg/mL 基质内标溶液：取与检材基质相同的空白样品，按 7.1.1.1样品提取方式提取， 得上清液，用上清液配制 成0.1mg/mL 乙基百草枯基质 内标物质溶液 。现配现用 。其他浓 度的基质 内标物质 溶液由 0.1mg/mL 基质内标 溶液用上清液稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) pH试纸：范围 1~14； 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪 ：配有氮磷检测器（ NPD）； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 水浴锅； g) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 沉淀蛋白 取血样或尿液检材样品 1.0mL于具盖离心管中 （若采用内标法，则加入内标 乙基百草枯 溶液，使内 标浓度为 0.5µg/mL，混匀） ，加入 6%高氯酸溶液 1.0mL（若为尿液样品，不添加 6%高氯酸溶液） ，振 荡30s，8000r/min离心 3min，分离上清液，按 7.1.1.2进行衍生化操作 。 7.1.1.2 衍生化 取7.1.1.1上清液，加入饱和氢 氧化钠溶液 0.1mL，调节 pH值大于等于 12，再加入 20% 硼氢化钠溶液 0.5 mL，于室温反应 30min，加入环己烷 0.5mL，振荡 30s，8000r/min 离心 3min，取上清液， 作为检材样 品衍生液， 供GC-MS分析。 GA/T × × × × —× × × × 3 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加百草枯标准物质， 作为添加样品（ 血液添加样品的浓度为 0.5µ g/mL，尿液添加样品的浓度为 0.2µ g/mL），与检材样品平行 操作，得到空白样品衍生液 和添加样品衍生液，同时对 基质标准溶液 衍生，得到基质标准溶液 衍生液， 供仪器分析。 若采用内标法，不做添加样品，空白样品（不加内标）与检材平行操作，同时对 基质标准溶液 和基 质内标溶液 衍生化， 得到空白样品、 基质标准溶液 及基质内标溶液 衍生液，供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱 1：DB-5毛细色谱柱 （30m×0.32mm×0.25μm）或等效色谱柱 ； b) 色谱柱 2：HP-50+毛细色谱柱 （30m×0.32mm×0.25μm）或等效色谱柱 ； 注： DB-5和HP-50+都是Aglient公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对 该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 柱温： 100℃ 保持 1min，以 20℃/min 的速率升温至 280℃，保持 5min； d) 检测器温度： 290℃； e) 进样口温度： 260℃； f) 载气：高纯氮 ； g) 流速：2.0mL/min ； h) 进样方式：不分流， 1min 后分流，分流比 5:1。 7.1.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同 样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： RTX -5MS 毛细色谱柱 （30m×0.32mm×0.25μm）或等效色谱柱 ； 注： RTX -5MS柱是 Restek公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 100℃ 保持 1 min，以 20℃/min 的速率升温至 280℃，保持 5 min； c) 进样口温度： 260℃； d) 传输线温度： 260℃； e) 离子源温度： 200℃； f) 载气：高纯氦 ; g) 流速 1.0mL/min； h) 扫描范围： 50amu～200amu； i) 进样方式：不分流， 1min 后分流，分流比 5:1； j) 百草枯及内标物质 衍生物的特征离子见表 1。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白 、添加样品及 基质标准溶液的衍生液（若采用内标法， 分别吸取检材、空白 、 基质内标溶液及基质标准溶液 的衍生液），按 7.1.2.1的分析条件进样分析。 GA/T × × × × —× × × × 4 表1 百草枯及乙基百草枯衍生物的特征离子 检材 衍生物 特征离子 尿液 百草枯衍生物 m/z 96*，m/z 192*，m/z 194，m/z 148*，m/z150 乙基百草枯衍生物 m/z 110*，m/z 162*，m/z164 , m/z 220*, m/z 222 血液 百草枯衍生物 m/z 96*，m/z 192，m/z 194*，m/z 148，m/z150*