ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材 中2,4-D等四种苯氧 羧酸类除草剂 检验 气相色谱和气相色谱 - 质谱法 Forensic science s—Examination m ethods for four phenoxyacid herbicides including 2,4 -D in biological samples —GC and GC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：北京市公安司法鉴定中心（一）、广州市公安局刑警支队技术所。 本标准主要起草人：辛国斌、刘娟、乔静、张大明、袁增平。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中 2,4-D等四种苯氧羧酸类除草剂检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定 了法庭科学 生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中 2,4-D (2,4 -二氯苯氧乙酸、 2,4-滴)、2,4-DP（2-（2,4-二氯苯氧） -丙酸、 2,4-滴丙酸）、 MCPA（4-氯-2-甲基 -苯氧乙酸、 2甲4氯） 和MCPP（2-（4-氯-2-甲基 -苯氧） -丙酸、 2甲4氯苯氧丙酸） 4种苯氧羧酸类除草剂的气相色谱（ GC） 定量检验方法 和气相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定量检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中 2,4-D、2,4-DP、MCPP和MCPA的定性分析和定量分析。其他可 疑样品中 2,4-D、2,4-DP、MCPP和MCPA的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化 及衍生化，采用 气 相色谱 -质谱法进行 定性定量 、气相色谱法 进行定量检测 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰 度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a） 正丁醇； b） 乙醚； c） 环己烷； d） 甲醇； e） 丙酮； f） 二氯丙醇（ 1,3-二氯丙 -2-醇） ； g） 98%硫酸； h） 氯化钠； GA/T × × × × —× × × × 2 i） 盐酸溶液： 1) 4 mol/L盐酸：取 盐酸（浓度为 36%~38%）84mL，加水稀释至 250mL； 2) 1mol/L盐酸：取 4 mol/L盐酸 25 mL，加水稀释至 100mL； 3) 0.1mol/L 盐酸：取 1 mol/L盐酸 10 mL，加水稀释至 100mL； j） 1mol/L碳酸氢钠： 称取碳酸氢钠 42g，在搅拌情况下缓慢加水 100mL，至完全溶解 后，用水 稀释至 500mL； k） 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据 2,4-D、2,4-DP、 MCPP和MCPA标准物质的纯度， 各称 取适量， 分别用甲醇配制 1.0mg/mL2,4 -D、2,4-DP、 MCPP、MCPA标准物质溶液，置于 冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液 ； 2) 10.0µ g/mL 2,4-D、2,4-DP、 MCPP、MCPA单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的2,4-D、 2,4-DP、MCPP、MCPA标准物质溶液各 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，配制成浓 度为 10.0µ g/mL 的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验 中所用其他浓度单一标准工作溶液均由 1.0 mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到； 3) 0.1mg/mL混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的2,4-D、2,4-DP、MCPP、MCPA标准物 质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个 月。实验中所用 其他浓度的混合标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得 到； 4) 1.0mg/mL 内标溶液：根据内标 DCPA（2,4-二氯苯乙酸）标准物质的纯度，用甲醇配制 1.0mg/mL DCPA 内标物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准 溶液； 5) 0.1mg/mL 内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 的内标 DCPA标准溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 3个月。实验中所用 其他浓度的内标 溶液均由 1.0mg/ mL内标溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b） GDX401 大孔树脂： (80~100 )目，用甲醇淋洗去除杂质后晾干备用； c） 一次性注射器 ； d) 脱脂棉。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 气相色谱仪：配有 电子捕获检测器 （ECD）； c) 电子天平 ； d) 离心机； e) 振荡器； f) 氮吹仪； g) 水浴锅； GA/T × × × × —× × × × 3 h) pH试纸：范围 1~14。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中（若采用内标法，则加入 内标 DCPA溶液，使内标浓度为 0.5µ g/mL，混匀），用4mol/L盐酸调 pH值至2以下，加入氯化钠至饱和，再加入乙醚 5mL，振荡 2min，8000r/min 离心 3min，分离有机相； 重复提取一次，合并两次提取的有机相 ，按7.1.1.4进行衍生化操作。 7.1.1.2 丙酮/水混合溶剂提取 移取血液等液体 检材样品 5.0mL～10.0mL，或称取铰碎的 固体检材样品5.0g～10.0g，（若采用内标 法，则加入内标 DCPA溶液，使内标浓度为 0.5µ g/mL，混匀），用丙酮 /水混合溶剂（体积比 4:1）50mL～ 100mL浸泡 3h以上（或超声 1h以上），8000r/min 离心 3min，分离上清液，置于水浴锅上 50℃浓缩至 2mL 左右，离心，取 上清液移至离心管中， 用4mol/L盐酸调 pH值至2以下，加入氯化钠至饱和，再加入乙醚 5mL，振荡 2min，8000r/min 离心 3min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 ，按7.1.1.4 进行衍生化操作。 7.1.1.3 固相萃取 取GDX401 大孔树脂0.3cm3放入下端放有脱脂棉的注射器管（或小层析柱）中，加入 0.5mL甲醇 活化树脂，然后用水洗去甲醇 ，作为固相萃取柱 备用。 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取 铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中（若采用内标法，则加入内标 DCPA溶液，使内标浓度为 0.5µ g/mL ，混匀），用0.1moL/L 盐酸 5mL稀释，振荡 2min，8000r/min 离心 3min，取上清液转移至已活化好的 固相萃取柱中，控制上清液 过柱流速 为0.5mL/min ，用 0.1moL/L盐酸 5mL淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽 固相 萃取柱2min，用5mL乙醚洗脱， 控制流速为 1mL/min，收集洗脱液， 按7.1.1.4进行衍生化操作 。 7.1.1.4 衍生化（正丁基或二氯丙基） 根据实验需要，将 7.1.1.1~7.1.1.3中任意一种 待衍生化样品在 40℃下氮气流吹干 ，加入正丁醇（ 二 氯丙醇）40µ L和硫酸 10µ L，密封，于室温反应 30min（二氯丙基衍生化于 80℃水浴中反应 90min）， 再加入环己烷 0.3mL和水0.5mL， 振荡 2min，8000r/min 离心 3min，分离有机相，在有机相中加入 1moL/L 碳酸氢钠溶液 0.5mL，振荡 2min，8000r/min 离心 3min，分离有机相，