ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T ××××－× × × × 法庭科学 生物检材中涕灭威 检验 气相色谱-质谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for aldicarb in biological samples—GC-MS and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、运城市公安局 、山西医科大学 。 本标准主要起草人： 王瑞花、 栾玉静、 王爱华、任昕昕、董颖、杜鸿雁 、张云峰、 黄健、刘彦军， 贠克明、尉志文 。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材 中涕灭威检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血、 尿、 肝、 肾 、 胃及胃内容 等）中涕灭威的气相色谱 -质谱 （ GC-MS） 定性检验方法和液相色谱 -质谱（LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中涕灭威的定性分析和定量分析 。其他可疑 样品中涕灭威的定性分 析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对生物检材进行提取、净化及浓缩 ，采用气相 色谱-质谱法定性 ，液相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、 质谱特征离子碎片峰 和相对丰度 比作为定 性判断依据 ；以峰面积为依据， 用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水 ，液相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有 说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 甲醇； b) 5%甲醇溶液： 移取 5mL甲醇，加水稀释至 100mL； c) 乙腈（色谱纯） ； d) 乙酸乙酯 ； e) 二氯甲烷 ； f) 甲酸（色谱纯） ； g) 甲酸铵（色谱纯） ； h) 2%氨水溶液： 移取 2mL氨水，加水稀释至 100mL； i) 标准溶液 ： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据涕灭威标准物质的纯度， 称取适量 ，6用甲醇配制 1.0mg/mL 涕灭威标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液； GA/T × × × × —× × × × 2 2） 0.1mg/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的涕灭威标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用其 他浓度的标准 工作溶液均由 0.1mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB固相萃取 柱或等效固相萃取柱 ，使用前 依次用甲醇 、水活化； 注： Oasis® HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 d) 一次性注射器 ； e) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 沉淀蛋白 移取血液等液体检材样品 1.0mL~2.0mL或称取铰碎的 肝脏等固体检材样品 1.0g~2.0g 于具盖离心管 中，加入乙腈 2.0mL~4.0mL，振荡 10min，8000r /min离心 30min，取上清液 经0.22μm的有机系微孔滤膜 过滤，供 LC-MS分析。 7.1.1.2 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL~2.0mL或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g~2.0g 于具盖离心管 中，加入无水乙醇 100μL，乙酸乙酯 /二氯甲烷 （体积比 2:1）混合溶剂 6mL，振荡 10min，8000r/min 离心 10min，分离有机相， 重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 40℃浓缩至干，残留物用 甲醇 200L溶解， 作为检材样品提取液供 GC-MS分析或用 0.22μm的有机系微孔滤膜过滤， 供 LC-MS分析。 7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL， 或称取绞碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中，用 4倍体积 2%氨水溶液稀释， 振荡 10min，8000r/min 离心 20min，取上清液转移至已活化好的固 相萃取柱中，依次 用水 3mL、甲醇 3mL淋洗，弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，GA/T × × × × —× × × × 3 用二氯甲烷 3mL洗脱，收集洗脱液并 置于浓缩器上浓缩至干，残留物用甲醇 200L溶解，作为检材样品 提取液供 GC-MS分析或用 0.22μm的有机系微孔滤膜过滤 ，供 LC-MS分析。 7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 涕灭威标准物质，作为添加样品（ GC-MS添加样品的浓度为 1.0µ g/mL(g) ，LC-MS 添加样品的浓度为 10ng/mL(g) ），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调 整： a) 色谱柱： HP-5柱（30m× 0.25mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱 ； 注： HP-5柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100℃保持 2min，以 40℃/min速率升至 280℃，保持 17.5min； c) 柱流量：1mL/min； d) 进样口温度： 280℃； e) 传输线温度： 230℃； f) 离子源温度： 230℃ g) 载气：高纯氮； h) 进样方式 ：分流进样 ，分流比 10：1； i) 扫描方式 ：全扫描（ SCA N），质量扫描范围 40amu~450amu 。 7.1.2.1.2 液相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T 3柱，(2.1mm×50mm，1.7μm)或等效色谱柱； 注： ACQUITY UPLC HSS T 3柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：A：乙腈， B：5mmol/L甲酸铵0.1%甲酸水溶液； c) 洗脱方式：梯度洗脱 ，梯度见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B ---- 0.5 10% 90% 1.5 0.5 40% 60% 2.0 0.5 40% 60% 2.2 0.5 10% 90% 3.5 0.5 10% 90% d) 柱温： 35℃； e) 流速： 0.5mL/min； f) 离子源：电喷雾 电离源（ESI）； g) 检测方式：正离子； GA/T × × × × —× × × × 4 h) 扫描方式：多反应离子监测 （MRM）； i) 雾化气、脱溶剂气：氮气； j) 碰撞气：氩气； k) 离子源温度： 150℃； l) 雾化温度： 350℃； m) 毛细管电压： 3.0kV； n) MS参考条件 （定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量 ）条件见表 2。 表2 MS参考条件