ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材 中噻嗪酮 检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination m ethods for buprofezin in biological samples—GC-MS and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × ×—× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC179/SCI ）归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、重庆市公安局 、广州市公安局 、司法部司法鉴定科学技术 研究所。 本标准主要起草人： 杜鸿雁、 董颖、张蕾萍、 于忠山、何毅、王芳琳 、王俊伟、邢若葵、刘伟 、沈 敏。GA/T × × × ×—× × × × 1 法庭科学 生物检材中噻嗪酮检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱方法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容 等）中噻嗪酮的气相色谱 -质谱 （ GC-MS） 和液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中噻嗪酮的定性分析和定量分析。 其他可疑 样品中噻嗪酮的定性分 析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 1 22 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相 色谱 -质谱法、液相色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和相对丰度比作为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水， 液相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试 剂均为分析纯，试剂包括： a) 甲醇（色谱纯）； b) 乙酸乙酯； c) 乙腈（色谱纯）； d) 丙酮； e) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据噻嗪酮标准物质的纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 噻嗪酮标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 12个月。或采用市售标准溶液 ； 2) 10.0μg/mL标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的噻嗪酮标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0µ g/mL 的标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 1个月。实验中所用其他浓度的标准工作 溶液均由 10μg/mL 标准物质溶液用甲醇 稀释得到。 GA/T × × × ×—× × × × 2 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱 ：C18中性混合柱 ，使用前用甲醇 、水活化； d) 一次性注射器 ； e) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四 极杆质量分析器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材 1.0mL～3.0mL，或称取铰碎的 肝脏等固体检材 样品 1.0g～3.0g于具盖离心管 中，加入乙酸乙酯 6.0mL～8.0mL，振荡 10min，8000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次，合 并两次提取的有机相，置于浓缩器上 60℃浓缩至干，残留物用 甲醇溶解 （供 GC-MS分析时，用 100µ L 溶解；供LC-MS分析时，用 500µ L溶解，并用有机系微孔滤膜过滤 ），作为检材样品提取液 ，供仪器分 析。如需净化， 残留液按7.1.1.3操作。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中，用4倍体积水稀释 ，振荡 10min，8000r/min 离心 25min，取上清液转移至已活化好的 C18中性混合 柱，控制上清液过柱流速为 0.5mL/min ，依次用1mL水、 1mL甲醇 /水(体积比 5:95)淋洗 2次，抽干弃去淋 洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱2min，用1mL乙酸乙酯洗脱 2次，收集洗脱液并 置于浓缩器 上45℃浓缩至干，残留物用 甲醇溶解（供 GC-MS分析时，用 100µL溶解；供LC-MS分析时，用 500µ L溶 解，并用有机系微孔滤膜过滤 ），作为检材样品提取液 ，供仪器分析。如需净化，残留液按 7.1.1.3操作。 7.1.1.3 样品净化（中性氧化铝柱净化法） 净化过程 包括： GA/T × × × ×—× × × × 3 a) 装柱：取一次性塑料吸管，将顶部剪开，在底部塞上少许脱脂棉， 依次加入无水硫酸钠 2g～ 3g、中性氧化铝 2g～5g、无水硫酸钠 2g～3g； b) 净化：2mL甲醇过柱（预洗柱子），弃去洗液，将样品提取液转移至净化柱上，用 2mL乙酸 乙酯洗脱两次，收集洗脱液并 置于浓缩器上 45℃浓缩至干， 残留物用甲醇溶解（供 GC-MS分 析时，用 100µ L溶解；供LC-MS分析时，用 500µ L溶解，并用有机系微孔滤膜过滤），作为 检材样品提取液，供仪器分析。 7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加噻嗪酮添加样品（ GC-MS添加样品的浓度为 0.5µg/mL(g)，LC-MS添加样品的浓 度为 0.1ng/mL(g)），与检材样品平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱 柱（ 30m× 0.25mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； 注：DB-5MS柱是Agelient公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100℃保持 2min，以 30℃/min速率升至 280℃，保持 17min； c) 柱流速：1mL/min； d) 进样口温度： 280℃； e) 传输线温度 ：230℃ f) 离子源温度： 210℃； g) 载气：高纯氮； h) 进样方式：分流进样，分流比： 10:1； i) 采用全扫描（ SCAN）模式检测，质量扫描范围 40amu~5 50amu。 7.1.2.1.2 液相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： Shim -pack XR -ODSIII柱（ 75mm× 2.0mm, 1.6 µm）或等效色谱柱； 注： Shim -pack XR -ODSIII柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品 具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：A：水，B：甲醇； c) 洗脱方式 ：梯度洗脱，洗脱程序见表 1； d) 流速 : 0.4mL/min； e) 进样体积： 5µ L; f) 检测方式 ：正离子扫描 (ESI+)； g) 扫描方式 ：多反应监测 (MRM); h) 离子源电压 ：5500V; i) 离子源温度： 650℃； j) 离子源气 1：50psi； k) 离子源气 2：45psi； GA/T × × × ×—× × × × 4 l) MS参考条件 （检测离子对 、去簇电压 、碰撞能、碰撞室出口电压 ）见表 2。 表1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 50% 50% 0.5 50% 50% 1.5 10% 90% 2.5 10% 90% 5 50% 50% 表2 MS质谱条件 名称 定量离