ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材 中扑尔敏 检验 气相色谱 和气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for chlorpheniramine in biological sampl es—GC and GC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位： 北京市公安局法医检验鉴定中心 、公安部物证鉴定中心 。 本标准起草人：乔静、杨士云、常洪发、张大明 、于忠山、何毅、王芳琳 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中扑尔敏检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材 （血、尿、肝、肾 、胃及胃内容 等）中扑尔敏的气相色谱（ GC） 定量检验方法和 气相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中扑尔敏的定性 分析和定量分析 。其他可疑样品中扑尔敏的定性分 析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本 文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本 文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格 和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、净化及浓缩 后，采用气 相色谱 -质谱法定性定量，气相色谱法 定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和 相对丰度比作为定性 判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 三氯甲烷； d) 异丙醇； e) 氨水； f) 1.0mol/L氢氧化钠 溶液：称取 氢氧化钠 固体 4.0g，加入一定量的水溶解并 稀释至100mL； g) 磷酸盐缓冲液： 称取磷酸二氢钠 （NaH 2PO 4· 2H 2O）6.0g，加入水450mL，用 1.0mol/L NaOH溶 液调节至pH=10.0± 0.1 后，定容至 500mL； h) 氨水 /三氯甲烷 /异丙醇（体积比为 2:78:20）混合溶剂； GA/T× × × × —× × × × 2 i) 甲醇 /乙腈（体积比为 15:85）混合溶剂 ； j) 固体碳酸盐缓冲剂：碳酸钠和碳酸氢钠按 1:1比例混匀； k) 无水硫酸钠； l) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶 液：根据扑尔 敏标准物质纯度 和盐型换算后 ，称取适量， 用甲醇配 制1.0mg/mL 扑尔敏标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标 准溶液； 2) 0.1mg/mL标准工作 溶液：移取1.0mg/m L的扑尔敏标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，密封，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 6个月。实验中所用其他 浓度的标准工作溶 液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 固相萃取柱 ：C18固相萃取柱或其他等效固相萃 取柱，使用前依次用甲醇 5.0mL及水 5.0mL淋 洗，保持柱面湿润 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱联用仪：配电子轰击源（ EI）； b) 气相色谱仪 ：配火焰离子化检测器（ FID）； c) pH计； d) 振荡器； e) 电子天平 ； f) 浓缩器； g) 离心机。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中。 加入甲醇 /乙腈混合溶剂 8.0mL，振荡 5min，8000r/min 离心10min，分离有机相；重复提取一 次，合并两次提取的有机相，用 无水硫酸钠（ 15.0g）脱水后，置于浓缩器上浓缩至干， 残留物用甲醇 100µ L溶解，供仪器分析。 7.1.1.2 固相萃取 GA/T× × × × —× × × × 3 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中。加入磷酸盐缓冲液 6.0mL（尿液中 仅加1g固体碳酸盐缓冲剂） ，混匀，超声 15min，8000r/min 离 心20min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中 ，控制流速为 0.5mL/min ，再用水 6mL淋洗，控制流 速为5.0mL/min ；挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min， 用氨水 /三氯甲烷 /异丙醇（体积比： 2/78/20） 混合溶剂 6mL洗脱，收集洗脱液 ，并置于浓缩器上 50℃下浓缩至干， 残留物用100µ L甲醇溶解，供仪器 分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加扑尔敏标准物质，作为添加样品，添加样品的浓度为 1.0µ g/mL (g)，与检材样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （气相色谱 -质谱仪条件 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱柱 （30m× 0.25mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； 注： DB-5MS毛细色谱柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 150℃保持 1min，以10℃/min 速率升温至 280℃，保持 20min； c) 进样口温度： 280℃； d) 传输线温度： 260℃； e) 载气：氦气； f) 电子轰击能量： 70eV； g) 离子源温度： 250℃； h) 倍增器电压：自动调谐值； i) 扫描方式：全扫描（ SCAN）； j) 溶剂延迟： 3min； k) 柱流量： 1mL/min； l) 进样方式：分流进样 ，分流比： 10:1； m) 质量范围： 40amu～450amu。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1的分析条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g两份，按 7.1.1进行操作。 GA/T× × × × —× × × × 4 另取等量相同基质的空白样品三份，其中两份添加扑尔敏标准物质作为添加样品（添加样品中目标 物含量应为检材样品中目标物含量的 (100± 50)% ），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作 ，得 到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器： FID； b) 色谱柱： DB-5毛细色谱柱 (30m× 0.25mm× 0.25µ m )或等效色谱柱； 注： DB-5毛细色谱柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 150℃保持 1min，以10℃/min 速率升温至 280℃，保持 20min； d) 进样口温度： 280℃； e) 检测器温度： 280℃； f) 载气：氮气； g) 进样方式：分流进样； h) 分流比： 10:1； i) 柱流量： 1mL/min。 7.2.2.1. 2 气相色谱 -质谱条件 按7.1.2 .1规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液， 按7