ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中美沙酮检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for methadone in biological samples—LC-MS ××××-××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准由 起草单位： 公安部物证鉴定中心 、济南市公安局刑事技术科学研究所 。 本标准起草人： 栾玉静、王瑞花、董颖、王爱华、 任昕昕、 王芳琳、常靖、宋歌、董林沛、武继锋、 宋蕊。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材 中美沙酮检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血、 尿、 肝、 肾、 胃及胃内容等 ）中美沙酮 的液相色谱 -质谱（LC-MS） 检验方法。 本标准适用 于法庭科学 生物检材中美沙酮的定性 分析和定量分析。其他可疑样品中美沙酮的 定性分 析和定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方 法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相 色谱 -质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度 比作为定性判断依据；以峰面积为依 据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水， 除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试 剂包括： a) 甲醇（色谱纯） ； b) 乙腈（色谱纯） ； c) 0.1mol/L HCl溶液：移取浓盐酸 8.3mL，加水稀释至 1000mL； d) 5mmol/L 甲酸铵溶液（pH值3.5）：称取甲酸铵 0.315g，加水溶解 并稀释至 1000mL，用甲酸 调pH值为 3.5； e) 氨水； f) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据美沙酮标准物质纯度和盐型换算后， 称取适量， 用甲醇配 制1.0mg/mL 美沙酮标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售 标准溶液； GA/T × × × × —× × × × 2 2） 10.0µg/mL标准工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混 匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用 其他浓度的标准工作溶液均 由1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 有机系微孔滤膜： 0.22µm； d) 混合型阳离子交换 （ Oasis® MCX） 固相萃取柱 或其他等效固相萃取柱， 依次用 1mL甲醇， 1mL 水活化。 注： Oasis® MCX固相萃取柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -质谱仪：配电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆或离子阱质量分析器； b) 电子天平； c) 离心机； d) 振荡器； e) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 固相萃取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中。加入 0.1mol/L HCl溶液 4.0mL，混匀， 8000r/min 离心 20min，取上清液转移至已活化好的 固相萃取 柱中，控制流速为 1mL /min，依次用水1mL、甲醇 1mL、乙腈 1mL淋洗，挤干水分或离心或真空抽固相 萃取柱 2min，用氨水 /乙腈（体积比 5:95）混合溶液1mL洗脱，收集洗脱液置于浓缩器上 50℃下浓缩至干， 残留物用 初始流动相 1.0mL溶解，经有机 系微孔滤膜过滤，供仪器分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无法取到 相似基质样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份 作为空白样品，一份添加 美沙酮标准物质 ，作为添加样品 （添加样品的浓度为 20ng/mL），与检材平行 操作 , 得到空白样品提取液和添加样品提取液供 仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 液相色谱 -质谱仪（离子阱质量分析器）条件 GA/T × × × × —× × × × 3 以下为参考 条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： C18色谱柱（ 2.1mm× 150mm ，3.5µm）或其他等效柱； b) 流动相：A：乙腈，B：5mmol/L甲酸铵溶液（ pH值3.5）； c) 洗脱方式：梯度洗脱 条件见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min A B ---- 10% 90% 3.0 90% 10% 8.0 90% 10% 11.0 10% 90% 19.0 10% 90% d) 进样量： 10µL； e) 柱温：30℃； f) 流速： 0.3mL/min ； g) 离子化模式： ESI+； h) 扫描方式： 正离子扫描 ，采用二级全扫，母离子 [M+H]+=310.2，定量子离子 m/z=264.9； i) 鞘气（氮气） ： 30arb； j) 辅助气（氮气） ： 10arb； k) 喷雾电压： 4.5kV； l) 毛细管电压： 4.0V； m) 毛细管温度： 290℃； n) 相对碰撞能： 35%。 7.1.2.1. 2 液相色谱 -质谱仪（三重四级杆质量分析器） 条件 以下为参考 条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C 18色谱柱 (2.1mm× 50mm,1.7 µm)或其他等效柱； 注： ACQUITY UPLC BEH C 18色谱柱为 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：A：乙腈，B：5mmol/L甲酸铵溶液（ pH值3.5）； c) 洗脱方式：梯度洗脱 条件见表 2； 表2 梯度洗脱条件 时间 min A B ---- 10% 90% 1.5 60% 40% 1.8 60% 40% 2.0 10% 90% 3.5 10% 90% d) 柱温：35℃； GA/T × × × × —× × × × 4 e) 流速： 0.6mL/min； f) 离子源：电喷雾电离（ ESI）； g) 检测方式：正离子 ； h) 毛细管电压： 2.8kV； i) 源温度：150℃； j) 雾化气流速： 1000L/h； k) 扫描模式：多反应离子监测（ MRM）； l) MS参考条件 （定量离子对、去簇电压、碰撞能 ）：见表 3。 表3 MS参考条件 中文名称 定量离子 对 定性离子 去簇电压 V 碰撞能量 eV 美沙酮 310.31＞105.04 310.31＞105.04 24 28 310.31＞265.18 14 7.1.2.2进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液 ，按 7.1.2.1分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～5.0mL，或称取铰碎的 肝脏等固体 检材样品 1.0g～5.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相 相似基质的空白样品 三份，其中两份 添加美沙酮标准物质 作为添加样品 （添加样品中目 标物含量应为检材样品中目标物含量的 (100±50)% ），另一份作为空白样品 ，与检材平行操作 ，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 检测。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1仪器条件 按7.1.2.1规定的条件分析 。 7.2.2.2 进样 分