ICS 13.130 A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T XXXX -XXXX 法庭科学 生物检材中氯胺酮检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods fo r ketamine in biological samples—GC and GC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心 、北京市公安司法鉴定中心（一） 。 本标准起草人 ：王芳琳、张蕾萍 、于忠山、何毅、乔静。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材 中氯胺酮 检验 气相色谱 和气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材 （尿、肝、肾 、胃及胃内容 等）中氯胺酮的气相色谱（ GC）定量 检验方法 和气相色谱 -质谱（ GC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材 中氯胺酮的定性 分析和定量分析 。其他可疑样品中氯胺酮的定性分 析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本 文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本 文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、 净化及浓缩 ，采用气相 色谱法定量、气相色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度 比作为定性判 断依据； 以峰面积为定量依据，用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水， 在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括 ： a) 乙醚； b) 三氯甲烷 ； c) 甲醇； d) 1mol /L盐酸：量取 8.3mL浓盐酸， 用水稀释至 100mL； e) 1mol /L氢氧化钠 ：称取氢氧化钠 40.0g，加水溶 解并稀释至1000mL； f) 标准溶液： GA/T × × × × —× × × × 2 1) 1.0mg/mL标准物质溶液 ：根据氯胺酮标准物质的纯度和盐型换算后，称取适量，用甲醇配制 成1.0mg/mL氯胺酮标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶 液； 2) 10.0μg/mL标准工作 溶液：移取 1.0mg/mL 的氯胺酮标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释 至10mL， 混匀， 配制成浓度为 10.0µ g/mL 的标准工作溶液， 密封，置于冰箱中 冷藏保存。 有效期 3个月。 实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL标准工作溶液用甲醇稀释得到 ； 3) 1.0mg/mL内标溶液：根据内标物普罗地芬（ SKF 525A，或其他合适内标物 ）的纯度和盐型换算 后，称取适量，用甲醇配制成 1.0mg/mL内标溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或 采用市售 内标溶液 ； 4) 10.0μg /mL内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 的内标溶液 0.1mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释 至10mL，混匀，配制成浓度为 10.0µ g/mL 的内标溶液 ，密封， 置于冰箱中冷藏保存。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的内标 工作溶液均由 1.0mg/mL 内标溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪：配有氮磷检测器（ NPD）或电子捕获检测器（ ECD）； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 离心机； d) 振荡器； e) 浓缩器； f) 电子天平； g) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取尿液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝 脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中。加入1mol/L氢氧化钠溶液调 pH值至 9～10，再加入乙醚或三氯甲烷 5.0mL～10.0mL提取， 振荡 10min，8000r /min离心 10 min，分离有机相，重复提取一次，合并两次提取的有机相， 置于浓缩 器上 50℃下浓缩至干 ，残留物用甲醇 50µ L～100µ L溶解，作为检材样品提取液 供GC-MS分析，如需 净化，残留物 按7.1.1.2操作。 GA/T × × × × —× × × × 3 7.1.1.2 样品净化 （酸碱反提 ） 在7.1.1.1提取的残留物中， 加入水 1mL、200µ L 1mol/L盐酸溶液，振荡2min，8000r/min 离心 2min， 移取水相，在水相中加入 环己烷， 振荡 5min， 8000r/min 离心 2min，弃去环 己烷，水相中加入 1 mol/L 的氢氧化钠 溶液调 pH值至 9～10，再加入乙醚或三氯甲烷 6.0mL，振荡10min，8000r/min 离心 10min， 分离有机相，置于浓缩器上 50℃下浓缩至干 。残留物用 甲醇 50µ L～100µ L溶解，作为检材样品提取液 供GC-MS分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中 ，一份作 为空白样品，一份添加 氯胺酮标准物质作为添加样品 （添加样品浓度为 1.0μg/mL(g) ），混匀，与检材 平行操作 ，得到空白样品提取液和 添加样品提取液，供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （气相色谱 -质谱） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱柱 （30m×0.25mm×0.25m）或等效色谱柱 ； 注：DB-5MS为Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程 ：100℃保持 2min，以30℃/min速率升温至 280℃，保持 17min； c) 进样口温度： 280℃； d) 传输线温度： 230℃； e) 离子源温度： 200℃； f) 进样方式：分流进样，分流比 5:1～50:1； g) 载气：氦气； h) 柱流量： 1mL /min～2mL /min； i) 质量扫描范围： 40amu～450amu； j) 扫描方式： 全扫描（ SCAN）。 7.1.2.2 进样 分别吸取 检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1分析条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取尿液等液体样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的 肝脏等固体样品 1.0g～2.0g两份（若采用内标法 ， 则添加内标 SKF 525A 1.0µ g，混匀），按7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份添加 氯胺酮标准物质作为添加样品（添加样品中目标 物含量应为检材样品中目标物含量的 (100±30)% ，若采用内标法 ，还需添加内标 SKF 525A 1.0µ g， 混匀）， 另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供 GC-MS分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 GA/T × × × × —× × × × 4 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器： NPD或ECD； b) 色谱柱： DB-1毛细色谱柱 （30m×0.32mm×0.25m）或等效色谱柱 ； 注：DB-1为Agilent公司产品的商品名称， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 180℃保持 1min，以 10℃/min速率升温至 280℃，保持 10min； d) 进样口温度： 280℃； e) 检测器温度： 300℃； f) 载气：氮气； g) 进样方式：分流进样； h) 分流比： 5:1～50:1； i) 柱流量： 1mL /min～2mL /min。 7.2.2.1. 2 气相色谱 -质谱条件 按7.1.2.1规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材