ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中甲氰菊酯等 五种拟 除虫菊酯类农药及其代谢物 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for five pyrethroid pesticides including fenpropathrin and their metabolites in biological samples—LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1 ）提出并归口。 本标准起草单位：重庆市公安局物证鉴定中心 、公安部物证鉴定中心。 本标准主要起草人：王俊伟、 石银涛、任飞、王绘军、郑经、于忠山、何毅。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中甲氰菊酯等五 种拟除虫菊酯类农药及其代谢 物检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材 （血、尿、肝、肾 、胃及胃内容 等）中甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴 氰菊酯、氰戊菊酯 和氯菊酯及其共有代谢物 3-苯氧基苯甲酸 （3-PBA）的液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性 定量检验方法 。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中甲氰菊酯、氯氰菊酯、 溴氰菊酯 、氰戊菊酯 、氯菊酯和3-PBA 的定性分析 及定量分析 。其他可疑样品中 甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯 、氯菊酯和3-PBA 的定性分析和定量分析可参照 使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 毒物分析名词术语 中界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对生物检材进行提取、净化 及浓缩，采用液相 色谱-质谱法定性定量 ，以保留时间 、质谱特征离子 和相对丰度比作为定性判断依据 ；以峰面积为依据， 采用内标法进行定量分析 。 5 试剂和仪器 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 中规定的一级水。除非另有说明，在分 析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括 ： a) 甲醇（色谱纯） ； b) 乙腈（色谱纯） ； c) 5mmol/L 乙酸铵溶液：称取乙酸铵 0.385g，加水定容至 1000mL，混匀； d) 0.1mol/L 盐酸溶液 ：量取浓盐酸 9mL，加水定容至 1000mL，混匀； e) 乙酸乙酯 ； f) 无水乙醇 ； g) 标准溶液： GA/T× × × × —× × × × 2 1） 1.0mg/m L标准物质溶液 ：根据甲氰菊酯、 氯氰菊酯、 溴氰菊酯、 氰戊菊酯、 氯菊酯和 3-PBA 标准物质的纯度， 各称取适量， 分别用甲醇配制 1.0mg/mL 氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、 氰戊菊酯、氯菊酯和 3-PBA标准物质溶液 ，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用 市售标准溶液 ； 2） 10.0μg/mL混合标准工作 溶液：移取1.0mg/mL 甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、 氯菊酯和 3-PBA标准物质溶液各 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中 冷藏保存 。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液 均由10.0μg/mL 混合 标准溶液用甲醇稀释得到 ； 3） 1.0mg/mL 内标溶液：根据反式氯氰菊酯 -D6的纯度，称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 内标溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 12个月。或采用市售标准溶液； 4） 1.0μg/mL 内标工作液 取：移取 1.0mg/mL 内标溶液 0.1mL，用甲醇 稀释并定容值 10mL，配 制成浓度为 10.0μg/mL内标工作溶液 ，置冰箱中冷 藏保存有效期 6个月。实验中所用其他 浓度的内标工作溶液均由 1.0mg/mL 内标溶液用甲醇稀释得到 。 注：特殊情况下可使用对照溶 液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括 ： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管； c) 有机系微孔滤膜 ：0.22µ m。 6 仪器与设备 仪器与设备包括 ： a) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾（ ESI）离子源 和三重四极杆质量分析器； b) 电子天平； c) 离心机； d) 振荡器； e) 移液器； f) 浓缩器； g) 超声波清洗器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0 mL，或称取铰碎（或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0g于具盖离心 管中，添加 100ng反式氯氰菊酯 -D6，用0.1m ol/L盐酸调节 pH值至4，加入二氯甲烷 5mL，振荡 5min， 超声提取 10min，高速离心 5min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 ，置于浓缩器 上常温空气流下 浓缩至干， 残留物用甲醇 /水（体积比 4:1）200µ L溶解，用0.22µ m有机系微孔滤膜过 滤，作为检材样品提取液 供仪器分析。 注：检材样品取样量和二氯甲烷体积可根据实际情况调整。 GA/T× × × × —× × × × 3 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品 （若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 甲氰菊酯 、氯氰菊酯、溴氰 菊酯、氰戊菊酯 、氯菊酯和 3-PBA标准物质 ，作为 添加样品 （添加样品浓度为 5ng/mL(g )），与检材样品平行操作 ，得到空白样品提取液和添加样品提取 液供仪器分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 液相色谱-质谱条件 （适用于甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯液和 反式 氯氰菊酯 -D6检验） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同 样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： Zorbax RRHD Elipse Plus 18柱（ 2.1mm× 1 00mm，1.8μm）或等效色谱 柱； 注： Zorbax RRHD Elipse Plus18 柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并 不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 进样量： 1µL； c) 流速： 0.5mL/min； d) 流动相： A：甲醇；B：5mmol/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序见表 1； 表1 五种拟除虫菊酯类农药及 反式氯氰菊酯 -D6的梯度洗脱 条件 时间 min 5mmol/L 乙酸铵水溶液 甲醇 0.1 20% 80% 1.0 20% 80% 2.0 80% 20% 5.0 80% 20% 5.1 20% 80% 8.0 20% 80% e) 离子源：电喷雾离子源（ ESI）； f) 扫描方式：正离子扫描； g) 检测方式：多反应监测 （MRM）； h) 电喷雾电压： 5500V； i) 离子源温度： 600℃； j) 雾化气压力： 50 psi； k) 辅助加热气压力： 50 psi； l) 气帘气压力： 30 psi； m) MS参考条件 （离子对、碰撞电压、去簇电压、入口电压、出口电压等） ：见表 2。 GA/T× × × × —× × × × 4 表2 五种拟除虫菊酯类农药及 反式氯氰菊酯 -D6的MS参考条件 化合物 定性离子对 碰撞电压 V 去簇电压 V 入口电压 V 出口电压 V 甲氰菊酯 350.3>125.2* 16 70 13 13 350.3>97.2 44 氯氰菊酯 433.1>191.1* 20 35 8.6 17 433.1>127 45 溴氰菊酯 523.1>281* 7 70 7 25 523.1>199.2 17 氰戊菊酯 437.2>167.1* 21 52 8 19 437.2>125 56 氯菊酯 408.3>221.1* 15 70 10 20 408.3> 250.1 15 反式