ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中林可霉素 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for lincomycin in biological samples—LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC179/SC1 ）提出并归口。 本标准由起草单位：公安部物证鉴定中心 、深圳市公安局。 本标准主要起草人： 张云峰、王芳琳、黄健、王炯、常靖、王瑞花、董颖、张蕾萍、侯小平、栾玉 静、杜鸿雁、崔冠峰、于忠山、何毅、李树辉。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中林可霉素 检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中林可霉素 的液相色谱 -质谱 （LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于法庭科学生物检材中 林可霉素 的定性分析和定量分析。其他可疑 样品中林可霉素 的 定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的 要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相 色谱 -质谱法定性定量， 以保留时间 、质谱特征离子 和离子丰度比作为定性判断依据； 以峰面积为依据， 采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 甲酸； d) 二氯甲烷； e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据林可霉素 标准物质的纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 林可霉素 标准物质溶液，置于冰箱中 冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液； 2) 10.0μg/mL标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的林可霉素 标准物质溶液 0.1mL，用甲醇 稀释 至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用其 他浓度的标 准工作溶液均由 10.0μg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 GA/T× × × × —× × × × 2 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m； d) 固相萃取柱： Oasis® HLB固相萃取 柱或其他等效固相萃取柱 ，使用前依次用 甲醇、水活化； 注： Oasis® HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 e) 一次性注射器 。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a） 液相色谱 -质谱仪： 配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b） 电子天平； c） 离心机； d） 振荡器； e） 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 0.5mL，或称取铰碎的 肝脏等固体检材样品 0.5g于具盖离心管中 ，加入二 氯甲烷 3mL，振荡 5min，8000r/min 离心 10min，分离有机相，置于浓缩器上 50℃浓缩至干，残留物用 1mL 初始流动相溶解 ，用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液 供仪器分析。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体检材样品 0.5mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品 0.5g于具盖离心管中 ，加3mL 水稀释，振荡 10min，8000r/min 离心 20min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中，控制上清液过 柱，流速为 1mL/min，依次用 3mL水、 3mL甲醇 /水（体积比 10:90）淋洗，抽干弃 去淋洗液，挤干水分或 离心或真空抽固相萃取 柱2min，用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液并 置于浓缩器上 50℃浓缩至干，残留物用 1mL初始流动相 溶解，用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液 供仪器分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加林可霉素标准物质，作为添加样品 （添加样品 的浓度为 5.0ng/mL(g) ），与检材样 品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （液相色谱 -质谱） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： GA/T× × × × —× × × × 3 a） 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T 3 C18，(2.1mm× 50mm ，1.7μm)或等效色谱柱； 注： ACQUITY UPLC HSS T 3 C18是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 流动相： A：甲醇，B：0.1%甲酸水溶液； c） 洗脱方式：梯度洗脱，梯度见表 1； d） 柱温： 35℃； e） 进样量： 2L； f） 流速： 0.6mL/min ； 表1 梯度洗脱条件 时间 min A B ---- 10% 90% 1.5 40% 60% 1.8 90% 10% 2.2 90% 10% 2.5 10% 90% 4.0 10% 90% g） 离子源： 电喷雾电离源 （ESI）； h） 检测方式：正离子； i） 毛细管电压： 3.5kV； j） 离子源温度： 150℃； k） 雾化气流速： 800L/h； l） 雾化气温度： 400℃； m） 扫描方式：多反应离子监测（ MRM）； n） MS参考条件（ 定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量条件 ）见表 2。 表2 MS参考条件 名 称 定量离子 对 定性离子 对 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 林可霉素 407.2＞126.1 407.2＞126.1 30 30 407.2＞359.2 20 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品 0.5mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 0.5g两份，按 7.1.1进行操作。 内标 -工作曲线法： 另取等量相似基质的空白样品六份， 一份作为空白样品，另外五份 添加不同浓 度的标准物质 （添加浓度应呈良好的线性关系，且 检材样品中目标物的含量应在线性范围内 ），作为添 加样品，与检材样品平行操作。 GA/T× × × × —× × × × 4 内标 -单点校正法： 另取等量相似基质的空白样品 两份，一份作为空白样品，另外一份 添加标准物 质（检材样品中目标物含量应为添加样品中目标物含量的 （100±50）%），作为添加样品，与检材样品 平行操作。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按7.1.2.1规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液或基质标准工作溶液及标准工作溶液，按 7.1.2.1的分析条件 每个样品进样分析 2～3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 7.2.3.1.1 外标-单点法 记录各样品提取液平行进样 2～3次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样 添样添 样 V M AV M AW= ................................ ................................ ........ (1) 式中： W－检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （µg/g）或微克每毫升（ µg/mL）； A样