<ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中地芬尼多 检验 气相色谱和 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for diphenidol in biological samples—GC and GC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：中国人民公安大学、公安部物证鉴定中心、山西医科大学。 本标准主要起草人：何洪源、于忠山、廉洁、贠克明、尉志文。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中地芬尼多 检验 气相色谱和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物 检材（血、尿、肝、肾 、胃及胃内容等 ）中地芬尼多的气相色谱（ GC） 检验方法和 气相色谱 -质谱（ GC-MS）检验方法。 本标准适用于 法庭科学生物 检材中地芬尼多 的定性分析和定量分析 。其他可疑样品 中地芬尼多的 定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 对生物检材 进行提取、净化及浓缩后， 采用气 相色谱法定量、气相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间 、质谱特征离子碎片峰 和相对丰度 比作为定性 判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 无水乙醇； b) 甲醇； c) 二氯甲烷； d) 乙酸乙酯； e) 磷酸二氢钠； f) 磷酸氢二钠； g) 硼砂； h) 氢氧化钠； i) 磷酸盐缓冲液（ pH值6）：取磷酸氢二钠（ Na2HPO 4· 12H 2O）试剂 8.812g，磷酸二氢钠 （NaH 2PO 4· 2H 2O）试剂 27.37g，加入 200mL水溶解，稀释至 1000mL； GA/T× × × × —× × × × 2 j) 硼砂 -氢氧化钠缓冲液（ pH值10）：取硼砂（ Na2B4O7· 10H 2O）试剂 2.38g, 氢氧化钠试剂 0.86g, 加入 100mL水溶解，并用 水稀释至 500mL； k) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL标准物质溶液：根据地芬尼多标准物质的纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 地芬尼多标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标 准溶液； 2) 0.1mg/mL 标准工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的地芬尼多标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用 其他浓度的标准 工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到； 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB固相萃取柱或 其他等效固相萃取柱 ，使用前依次用甲醇 、水活化。 注： Oasis® HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 气相色谱仪：配有氮磷检测器（ NPD）； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 移液器； d) 电子天平； e) 超声振荡器； f) 振荡器； g) 离心机； h) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中，加入乙酸乙酯或二氯甲烷 5.0mL～10.0mL，振荡 5min，8000r/min 离心 10min，分离有机相 ，重复 提取一次， 合并两次提取的有机相， 置于浓缩器上 50℃浓缩至干， 残留物用无水乙醇 50µ L～100µ L溶解， 作为检材样品提取液供仪器分析 。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中，加入 pH值6的磷酸缓冲液 5mL～10mL，混匀，超声 15min，8000r/min 离心 20min，取上清GA/T× × × × —× × × × 3 液转移至活化好的固相萃取柱中， 控制上清液过柱流速为 0.5mL/min ，再以 3mL 5% 甲醇 /水(体积比 5:95) 淋洗；用 4mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液置于 50℃浓缩仪上吹干， 残留物用50µ L～100µ L无水乙醇 溶 解，供仪器分析。 7.1.1.3 质控样品 制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加地芬尼多标准物质， 作为添加样品，添加样品的浓度为 1.0µ g/mL(g) ，与检材样品 平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （气相色谱 -质谱） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS柱（ 30m× 0.32mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； 注： DB-5MS柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100℃保持 2min，以 15℃/min 速率升温至 280℃，保持 17min； c) 进样口温度： 280℃； d) 传输线温度： 230℃； e) 离子源温度： 200℃； f) 载气：高纯氦气； g) 柱流量： 1mL/min～2mL/min； h) 分流比： 5:1～50:1； i) 质量扫描范围： 40amu～450amu； j) 扫描方式：全扫描（ Scan）。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白 和添加样品提取液 及标准工作溶液，按 7.1.2.1的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL～5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～5.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加 地芬尼多 标准物质作为添加样品（添加样品 中目标物含量应为检材样品中目标物含量的 (100± 50)% ） ， 另一份作为空白样品， 与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-1柱（ 30m× 0.32mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； GA/T× × × × —× × × × 4 注： DB-1柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 200℃保持 1min，以 10℃/min 速率升温至 280℃，保持 10min； c) 进样口温度： 280℃； d) 检测器温度： 300℃； e) 载气：氮气； f) 分流比： 5:1～50:1； g) 柱流量： 1.0mL/min ～2.0mL/min 。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 按7.1.2.1规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液 及标准工作溶液，按 7.2.2.1的