SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1150—2015 代替SN/T1150—2002 南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Arabis mosaic virus 行业标准信息服务平台 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1150—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T1150—2002《南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法》。与SN/T1150—2002相比，主要 技术变化如下： 增加了RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法的内容。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华 人民共和国北京出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：吴际云、陈枝楠、郑耘、张伟锋、卢小雨、冯建军、王红英、龙海、李芳荣、胡运发、 邓琼、邓丛良。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -SN/T1150—2002。 行业标准信息服务平台 1 SN/T1150—2015 南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了南芥菜花叶病毒的生物学测定、血清学检测、免疫电镜、RT-PCR检疫鉴定方法。 本标准适用于进出境植物种子苗木等繁殖材料和植物产品中南芥莱花叶病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T28073南芥菜花叶病毒检疫鉴定方法 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样 3 基本信息 学名：Arabis mosaic virus 缩写：ArMV 分类地位：豇豆花叶病毒科（Comoviridae），线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。其他信息参见附录A。 4 原理和方法 依据ArMV鉴别寄主的症状、病毒形态、免疫学特性及分子生物学特性进行检测判定。 业标准信 5 仪器设备用具及设施 5.1 仪器设备 天平（感量1/10000g)、pH计、酶标仪、透射电子显微镜、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、 慧服务平台 恒温水浴锅、离心机、超低温冰箱等。 5.2用具 微量移液器、研钵、离心管、花盆、消毒土等。 5.3设施 植物隔离检疫温室。 6试剂 DAS-ELISA检测试剂（见附录B）、RT-PCR检测试剂（见附录C）、生物学测定试剂（见8.5）。免疫 1 SN/T 1150—2015 电镜检测试剂按照SN/T1840的规定执行，实时荧光RT-PCR检测试剂按照GB/T28073的规定 执行。 7样品制备 7.1种子类 抽样按照SN/T2122的规定执行 将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子）播于灭菌土中，于25℃左右生长并进行症状观察。待长出 3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（10株为1组）并编号。 7.2 苗木类 抽样按照SN/T2122的规定执行。 将苗木种植于隔离温室中，于25℃左右生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状 的分组检测，分组方法同7.1。 8检测方法 8.1DAS-ELISA检测 方法见附录B。 8.2 2免疫电镜检测 按照SN/T1840的规定执行。 8.3 3RT-PCR检测 方法见附录C。 8.4实时荧光RT-PCR检测 8.5 生物学测定 8.5.1接种 病叶加1：1(质量：体积)的磷酸盐缓冲液（0.1mol/L,pH7.2)于研钵中充分研碎，在待接种植物 叶片表面均匀酒上硅藻土，用手指蘸取研磨好的汁液轻轻涂抹于叶片表面 8.5.2鉴别寄主症状 对经DAS-ELISA检测出的阳性样品植株，采其叶片，加入适量样品提取缓冲液研磨后的汁液，在 “Prince”菜豆、矮牵牛和番杏等鉴别寄主植物。 昆诺藜（Chenopodiumquinoa）或苋色藜（C.amaranticolor）：接种后4d～6d接种叶出现局部褪绿 斑，然后出现系统褪绿斑驳。 黄瓜（Cucumissatiuus）：接种子叶5d～7d后出现局部褪绿斑或小型坏死环斑或黄斑，后出现系统 环线脉，畸形。 2