ICS 11.020 CCS C 50 WS 中华人民共和国 卫生行业标准 WS/T 805—2022 临床微生物检验基本技术 标准 Basic t echnical standard for clinical microbiology laboratory 2022 - 11 - 02发布 2023 - 05 - 01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 WS/T 805 —2022 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定 义 ................................ ................................ ......... 1 4 无菌操作及消毒灭菌技术要求 ................................ ......................... 2 5 标本处理及制片技术要求 ................................ ............................. 3 6 染色技术要求 ................................ ................................ ....... 4 7 显微镜检查技术要求 ................................ ................................ . 4 8 接种技术要求 ................................ ................................ ....... 5 9 培养技术要求 ................................ ................................ ....... 7 10 鉴定技术要求 ................................ ................................ ...... 8 11 分子检测技术要求 ................................ ................................ . 11 12 免疫学检测技术要求 ................................ ............................... 12 13 质量保证 ................................ ................................ ......... 12 参考文献 ................................ ................................ ............. 15 WS/T 805 —2022 II 前言 本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询， 由国家卫生 健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委医政司负责业务管理、法规司 负责统筹管理。 本标准起草单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院、中国人民解放军总医院、北京医院 /国 家卫生健康委临床检验中心、 中国医学科学院北京 协和医院 、北京大学人民医院、安 徽省立医院。 本标准主要起草人：沈定霞、孙自镛、胡继红、徐英春、胡云建、王辉、马筱玲、简翠。 WS/T 805 —2022 1 临床微生物检验基本技术标准 1 范围 本标准规定了医学实验室在临床微生物检验领域的基本技术要求。 本标准适用于开展临床微生物检验的医学实验室。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 标准。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 WS/T 442 临床实验室生物安全指南 WS/T 639 抗菌药物敏感性试验的技术要求 WS/T 497 侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 标准。 3.1 消毒 disinfection 杀灭或清除物体上活的病原微生物的方法。 3.2 灭菌 sterilization 杀灭物体上所有微生物（包括细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物）的方法。 3.3 无菌 asepsis 指不存在活菌。 3.4 无菌操作 aseptic operation 防止微生物进入人体或无菌物品、 无菌区域的操作。 3.5 接种 inoculation 将目标微生物转移至适于生长繁殖的人工培养基或活的生物体内的方法。 3.6 荧光淬灭 fluorescence quenching 指由于荧光分子与其他分子发生作用而出现的光度降低、发光时间缩短乃至停止发光的现象。 3.7 WS/T 805 —2022 2 一套血培养 a set of blood culture 从同一个穿刺点采集的血液，通常分别注入一个需氧血培养瓶和一个厌氧血培养瓶进行血培养。 3.8 微生物培养 microbial culture 利用人工培养基和适宜的培养 条件（如温度、气体环境等） ，使微生物生长繁殖的技术。 3.9 细菌鉴定 identification of bacteria 以细菌系统分类学为原则，通过一系列的方法，将未知细菌归到一定种属的过程。 4 无菌操作及消毒灭菌技术要求 4.1 无菌操作技术要求 对各类标本进行采集、接种等过程及对已生长的微生物进行血清凝集、鉴定和药敏试验等操作时需 要进行无菌操作。无菌操作技术要求包括： a) 接触培养标本的所有器材必须经过灭菌处理； b) 稀释标本或制备菌液的液体必须经过灭菌处理； c) 用于微生物培养的各类培养基在使用前应保证无 菌生长； d) 接种标本或转种 菌株应将接种环 (针)加热灭菌，或使用一次性无菌接种环（针）； e) 打开容器挑取标本或培养物后，应尽快盖回盖子，防止他们被污染或造成交叉污染； f) 用加样器和吸头从试管中吸取体液标本或菌液时，应注意加样器勿接触管壁。 4.2 消毒灭菌技术要求 临床微生物实验室常用的消毒与灭菌技术及要求见表 1。 表1 临床微生物实验室常用的消毒与灭菌技术及要求 待消毒灭菌对象 化学法消毒与灭菌技术 物理法消毒与灭菌技术 工作台面和地面 一般采用含有效氯 400 mg/L～700 mg/L的消毒液， 作用30 min； 经血传播病原体、结核 分枝杆菌等，采用含有效氯 2000 mg/L的消毒液，作用 >60 min。 紫外灯辐照强度应不低于 70 µW/cm2，安装 紫外灯的数量≥ 1.5 W/m3，照射时间≥ 30 min。 实验室空气 无人状态下： 1）3％过氧化氢，或 5000 mg/L 过氧乙酸，或 500 mg/L二氧化氯等喷雾； 2）15％过氧乙酸水溶液（ 7 mL/m3）或二氧化氯（ 10 mg/m3～20 mg/m3）或臭氧（ 20 mg/m3）熏蒸。 无人状态下，紫外灯消毒：紫外灯辐照强 度应不低于 70 µW/cm2，安装紫外灯的数量 ≥1.5 W/m3，照射时间≥ 30 min。有人状态 下，采用循环风紫外线空气消毒器或静电 吸附式空气消毒器，遵循产品使用说明。 仪器表面、内壁 用70％酒精擦拭（适用时）。 / 玻璃器材 玻璃器材用含有效氯 1000 mg/L 的含氯消毒剂或 70％酒精浸泡后清水冲洗，过 3遍蒸馏水，干燥后 包装高压。 高压蒸汽灭菌： 121 ℃ 15 min～30 min。 配制的培养基 / 大部分培养基经 121 ℃ 15 min高压蒸汽 灭菌， 含葡萄糖培养基 115 ℃ 15 min；XLD 培养基经煮沸 10 min；SS培养基煮沸 1 min～2 min； 显色培养基 100 ℃ 15 min。 检测后标本 / 高压蒸汽灭菌 121 ℃ 20 min。 培养物 / 高压蒸汽灭菌 121 ℃ 20 min。 WS/T 805 —2022 3 5 标本处理及制片技术要求 5.1 标本处理的技术要求 微生物实验室根