ICS11.080 CCSC59WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T798—2022 消毒剂消毒效果定性试验标准应用稀释法 Qualitativetestingstandardondisinfectioneffectofdisinfectant——usedilution method 2022-01-24发布 2022-06-01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会发布ＷS/T798—2022 I目  次 前言.....................................................................................................................................................................II 1范围.................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................................1 3术语和定义.....................................................................................................................................................1 4试验材料.........................................................................................................................................................1 5染菌载体的制备.............................................................................................................................................2 6中和剂鉴定试验.............................................................................................................................................3 7杀菌试验.........................................................................................................................................................5 8结果判定.........................................................................................................................................................5 9注意事项.........................................................................................................................................................6 附录A（规范性附录）培养基和试剂............................................................................................................7ＷS/T798—2022 II前  言 本标准由国家卫生健康标准委员会消毒标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由中国疾病预防 控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委综合监督局负责业务管理、法规司负责统筹管理。 本标准起草单位：北京市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、 中国人民解放军疾病预防控制中心。 本标准主要起草人：佟颖、于礼、沈瑾、魏秋华、王劲、韩杰、安伟、肖潇、高迪。ＷS/T798—2022 1消毒剂消毒效果定性试验标准应用稀释法 1范围 本标准规定了消毒剂消毒效果定性试验应用稀释法的试验材料、染菌载体的制备、中和剂鉴定试验、 杀菌试验、结果判定和注意事项。 本标准适用于消毒剂对光滑硬质物体表面的实验室定性消毒效果评价。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 标准。 WS/T683消毒试验用微生物要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 应用稀释法usedilutionmethod 采用定性方法评价消毒剂对不锈钢圆筒载体上试验微生物杀灭效果的检测方法。 4试验材料 4.1试验微生物 4.1.1金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表，试验菌种为 ATCC6538。 4.1.2铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)作为医院感染中常见分离的细菌繁殖体的代表，试验 菌种为ATCC15442。 4.1.3肠炎沙门菌(Salmonellaenterica)，试验菌种为ATCC10708。 4.2培养基 4.2.1传代培养基 营养肉汤或合成肉汤培养基，用于细菌传代培养，见附录A。 4.2.2中和试验培养基 4.2.2.1基础培养液：营养肉汤或液体硫乙醇培养基，作为中和试验的基础培养基，见附录A。ＷS/T798—2022 24.2.2.2中和剂培养液：根据消毒剂有效成分选择相应中和剂加入基础培养基液中制备成为中和剂培 养液，中和剂培养液需经中和剂鉴定试验验证合格后方可使用。 4.2.3其他培养基 胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），用于染菌载体的菌落计数，见附录A.5。 4.3其他试剂和材料 4.3.1磷酸盐缓冲液(见附录A.6)。 4.3.2标准硬水(见附录A.7)。 4.3.3有机干扰物：采用3%牛血清白蛋白；如为清洁物品采用0.3%牛血清白蛋白。 4.3.4载体：304不锈钢圆筒，表面抛光，外径8mm±1mm，内径6mm±1mm，壁厚1mm±0.5mm， 长度10mm±1mm。 4.3.5吊钩：长度为50mm～75mm，直径为0.5mm的镍铬合金丝，末端3mm呈直角弯曲。 4.3.6滤纸：直径为90mm的定性滤纸。 4.3.7器皿：25mm×100mm玻璃试管，直径为90mm的平皿，10mL吸管，移液器等。 4.4仪器设备 Ⅱ级及以上生物安全柜、恒温培养箱、振荡培养箱、恒温水浴箱、计时器等。 5染菌载体的制备 5.1载体准备 5.1.1外观检查 载体经肉眼观察合格，方可使用。如有可见破损如钝化、缺口、凹陷或凿孔等应剔除。 5.1.2清洗 将载体置于1mol/LNaOH溶液中浸泡约12h，用去离子水反复冲洗3次～4次，收集冲洗水加入2滴～ 3滴1%酚酞溶液，如酚酞变为粉红色，表明有NaOH残留，需要继续冲洗至酚酞不变色，将载体晾干后密 闭保存。 5.1.3筛选测试 5.1.3.1测试要求 未使用过或使用过但试验中无菌生长的载体，不需进行筛选测试，经压力蒸汽灭菌后可使用。使用 过的载体且在试验中有菌生长，应进行筛选测试，测试合格方可使用。 5.1.3.2测试方法 按照7.1规定，在无有机干扰物条件下，选用500mg/L苯扎氯铵消毒液对铜绿假单胞菌消毒作用10 min，以Letheen肉汤作为中和剂培养液，对每个载体进行杀菌试验。 5.1.3.3测试结果判断 无菌生长为载体筛选测试合格，测试管中有菌生长，则该载体不合格。ＷS/T798—2022 35.1.4灭菌 载体染菌前，将清洗后的载体放入试管中，加入去离子水至载体完全浸没，经压力蒸汽灭菌后，冷 却至室温备用。 5.2菌悬液的制备 5.2.1参照WS/T683的规定复苏菌种，接种于含10mL营养肉汤或合成肉汤的试管中，经36℃±1℃， 200r/min±20r/min振荡培养24h±2h，此为第1代培养物。 5.2.2用移液器取第1代培养物10μL转种于含10mL营养肉汤或合成肉汤的试管中，经36℃±1℃， 200r/min±20r/min振荡培养24h±2h，此为第2代培养物，可继续传代培养至第5代。 5.2.3用移液器取第1～5代的24h新鲜培养物10μL转种于10个含10mL营养肉汤或合成肉汤的试 管中，经36℃±1℃静置培养48h～56h后备用。 5