ICS11.020 CCSC50 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T413—2024 代替WS/T413-2013 血清肌酐参考测量程序 同位素稀释液相色谱串联质谱法 Referencemeasurementprocedureforserumcreatinine —Isotopedilutionliquidchromatographytandemmassspectrometry 2024-05-09发布 2024-11-01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会  发布WS/T413—2024 I前言 本标准为推荐性标准。 本标准代替WS/T413—2013《血清肌酐参考程序同位素稀释液相色谱串联质谱法》，与WS/T413 —2013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： ——增加了“参考物质”、“有证参考物质”“基质效应”的定义（见3.3、3.4、3.5）； ——更改了“互换性”的定义（见3.6，2013年版的3.3）； ——增加了试剂的CAS编号（见5）； ——更改了仪器技术参数的要求（见6，2013年版的6）； ——增加“分析可靠性”相关内容并调整条款的顺序（见11）； ——增加了“质量保证”的要求（见16）； ——增加了附录A.1，列出了典型质谱条件参数（见附录A.1）。 本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由国家卫生 健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法 规司负责统筹管理。 本标准起草单位：北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、中国医学科学院北京协和医院、民航 总医院、首都医科大学附属北京同仁医院、上海交通大学医学院附属仁济医院、西安交通大学第一附属 医院、郑州大学第一附属医院。 本标准主要起草人：张传宝、张天娇、陈文祥、赵海建、邱玲、王学晶、刘向祎、李敏、王晓琴、 郭书忍。 本标准于2013年首次发布，本次为第一次修订。WS/T413—2024 1血清肌酐参考测量程序 同位素稀释液相色谱串联质谱法 1范围 本标准规定了血清肌酐参考测量程序同位素稀释液相色谱串联质谱法的技术要点和质量要求。 本标准适用于开展血清肌酐参考测量的实验室。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 标准。 GB/T19702体外诊断医疗器械生物源性样品中量的测量参考测量程序的表述和内容的要求 GB/T33087仪器分析用高纯水规格和试验方法 JJF1135化学分析测量不确定度评定 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 参考测量程序referencemeasurementprocedure 被接受作为提供适合下列预期用途得测量结果得测量程序，预期用途包括评价测量同类量的其他测 量程序测得量值的测量正确度、校准或参考物质赋值。 注1：参考测量程序的作用参见ISO17511和ISO18153。 注2：在ISO术语中，正确度与偏倚、系统效应和系统误差有关，精密度与标准差、随机效应和随机误差有关，而准 确度与正确度（与其有关的）和精密度有关。 注3：术语“参考测量程序”意在作为更高级的测量程序被理解。 [来源：改编自ISO/IEC导则99-2007，定义2.7] 3.2 计量学溯源性traceability 通过文件规定的不间断的校准链将测量结果与参照对象联系起来的特性，校准链中的每项校准均会 引入测量不确定度。 [来源：ISO/IEC指南99:2007,定义2.4.1] 3.3 参考物质referencematerial 一种或多种指定特性足够均匀和稳定，已被证明适合在测量过程中或名义特性检验中预期应用的物 质。 注：预期应用包括校准、给其他物质定值或用做质量保证物质等。 [来源：GB/T29791.1—2013，定义3.58] 3.4 有证参考物质certifiedreferencematerial 附有由权威机构发布的文件，提供使用有效程序获得具不确定度和溯源性的一个或多个特性量值的 参考物质。WS/T413—2024 2[来源：改编自ISO/IEC导则99-2007，定义5.14] 3.5 基质效应matrixeffect 除待测物以外样品特性对按特定测量程序测定待测物及其量值的影响。 注：对质谱分析技术，基质效应指标本中除待测物以外的其他成分对分析方法测量能力的干扰。 [来源：CLSIEP14-A3，1.4.2] 3.6 互换性commutability 参考物质的属性，指按两种给定测量程序对此物质的指定量所获测量结果的关系与对其它指定物质 所获测量结果关系的一致程度。 注1：所述参考物质通常为校准物，其它指定物质通常是常规样品 注2：互换性，有时亦作互通性，均为“commutability”的中译文。 注3：临床检验领域参考物质的互通性，通常指用不同测量过程测量该物质时，各测量过程测量结果之间的数字关 系，与用这些测量过程测量实际临床样品时测量结果的数字关系的一致程度，即该物质理化性质与实际临床 样品的接近程度。 [来源：GB/T29791.1—2013，补充定义和分析术语A.3.9] 4测量原理和方法 本标准建立的血清肌酐参考测量程序以同位素稀释质谱法为测量原理，以稳定同位素标记的肌酐为 内标添加至血清中，内标与血清均匀混合后用无水乙醇沉淀蛋白质，三氯甲烷净化上清液，液相色谱串 联质谱分离和测量血清肌酐和内标特异的母离子和子离子，根据肌酐和内标峰面积比计算血清肌酐浓度。 5试剂 5.1水（H2O）：除非有特别说明，应使用GB/T33087定义的仪器分析用高纯水。 5.2无水乙醇（CH3CH2OH）：CAS64-17-5，色谱纯。 5.3三氯甲烷（CHCl3）：CAS67-66-3，色谱纯。 5.4乙酸铵（CH3COONH4）：CAS631-61-8，纯度≥99％。 5.5叠氮钠（NaN3）：CAS26628-22-8，分析纯。 6仪器 6.1液相色谱串联质谱联用系统 液相色谱串联质谱联用系统应满足以下要求： a）高效液相色谱仪或超高效液相色谱仪； b）三重四极杆串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI），各项参数指标符合正常工作的要求（见 本标准第8.1.1条）。 6.2液相色谱柱 液相色谱柱应满足以下要求： a)具有极性官能团嵌入或端基封尾的C18键合色谱柱，在含水量高的流动相中具有良好的稳定性 和重现性； b)规格为内径2.0mm～2.1mm，粒径3μm～5μm，柱长150mm。 c)实验室也可使用其他规格的色谱柱，使用前应进行参考测量程序的确认（见本标准第13章）， 证明所用色谱柱满足参考测量程序分析可靠性的要求（见本标准第11章）。WS/T413—2024 3示例：使用更小粒径（＜3μm），柱长为50mm～100mm的色谱柱。 6.3天平 十万分之一天平（最小分度0.01mg），每年至少进行一次校准，具有校准报告。 6.4离心机 水平转头离心机。离心力应不小于1500g。 6.5旋涡式混合器 适用于安瓿、试管等的旋涡式混合装置。 6.6加热吹干装置（氮吹仪） 将氮气吹入通过干热方式加热样品的表面进行样品浓缩的装置，不宜使用水浴加热。。 6.7微量移液器 经校准合格的微量可调移液器两支，规格分别为100μL～1000μL和20μL～200μL。 6.8血液混匀器 适用于安瓿、密封瓶等的血液混匀装置。 6.9安瓿或试管 规格5mL。试管应配有聚四氟乙烯密封塞。安瓿应配有融封装置。 6.10密度计 用于测量血清密度。 7样品 7.1通则 本参考测量程序适用于新鲜、冰冻或冻干血清样品的肌酐浓度测量。 应将样品视具有潜在生物传染性样，按照国家生物安全法及相关法律法规采取防护措施，对废物进 行妥善处理。 7.2样品取样量 样品取样量应根据肌酐的浓度确定，一般用量为0.1mL～0.4mL（见本标准第8.3.1条和第8.3.4 条）。为保证取样量的准确性和操作可行性，最小取样量不应低于0.1mL。 7.3样品的保存 新鲜血清样本若不立即测量，应冰冻保存。-70℃以下，可保存1年以上，-20℃保存，不可超过3 个月。冰冻血清样本使用前应置2℃～8℃0.5h后在室温下融解，充分混匀后使用。 冻干样品应按照说明书描述的使用期限和条件保存，临用前按照说明书复溶，充分混匀后使用。 8测量系统和分析样品的准备 8.1液相色谱串联质谱联用系统的准备 8.1.1质谱系统准备 测量前应对质谱系统进行性能检查，包括： a)最近3个月内进行过校准，符合制造商声明的正常工作的要求； b)装配电喷雾离子源，运行正常； c)真空度达到正常工作要求的范围。辅助气体纯度和流量符合制造商声明的正常工作的要求。WS/T413—2024 48.1.2液相系统准备 测量前应对液相系统进行准备，包括： a)流动相准备：纯水，乙酸铵水溶液（5mmol/L，pH=5.5）； b)色谱柱的平衡：用流动相（见本标准第9.2条）冲洗色谱柱约30～40倍柱床体积，直至色谱柱 达到平衡。 8.2校准溶液的制备 8.2.1一级有证参考物质 应使用国际检验医学溯源联合委员会（JCTLM)）认定并收录或权威参考物质研究机构研制的一级有 证参考物质（纯度标准物质）为血清肌酐检测参考测量程序的校准物。一级有证参考物质的使用、保存 及使用期限应符合研制机构提供的证书。 示例：日本计量研究院有证参考物质NMIJCRM6005-a、美国国家标准和技术研究院有证